氨基安替比林分光光度法測水中揮發(fā)酚

王虎副教授；孫桃講師4-氨基安替比林分光光度法測揮發(fā)酚水環(huán)境監(jiān)測1.實驗原理4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚1.1水中的揮發(fā)酚（1）酚類化合物：是指羥基與芳環(huán)直接連接的一類有機(jī)化合物，分為揮發(fā)酚與不揮發(fā)酚。（2）揮發(fā)酚：指沸點(diǎn)在230℃以下，能隨水蒸氣一起蒸出的一類酚類化合物。（3）與4-氨基安替比林（4-AAP）顯色的酚。4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚1.24-AAP分光光度法測定揮發(fā)酚原理

酚類化合物于pH=10.0±0.2的介質(zhì)中，在鐵氰化鉀的存在下，與4-氨基安替比林（4-AAP）反應(yīng)，生成橙紅色的吲哚酚安替比林染料，在510nm波長處有最大吸收，用比色法定量。反應(yīng)式如下：44-AAP分光光度法測揮發(fā)酚1.24-AAP分光光度法測定揮發(fā)酚原理本法測定的酚類不是總酚，而僅是與4-氨基安替比林顯色的酚，并以苯酚為標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果以苯酚計算含量。54-AAP分光光度法測揮發(fā)酚1.24-APP法適用情況4-氨基安替比林光度法(HJ503-2009)適用于酚濃度低于5mg/L的天然水或污廢水。表1方法分類及適用情況方法類別適用范圍適宜水樣萃取分光光度法0.001~0.04mg/L地表水、地下水和飲用水直接分光光度法0.04~2.5mg/L工業(yè)廢水、生活污水稀釋分光光度法2.50~5.0mg/L。工業(yè)廢水、生活污水4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚1.4萃取4-氨基安替比林分光光度法顯色后用三氯甲烷萃取，以三氯甲烷為參比，于460nm波長處測定吸光度。適用于0.001~0.04mg/L的含酚水樣。74-AAP分光光度法測揮發(fā)酚2.儀器與試劑準(zhǔn)備4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚2.1儀器準(zhǔn)備（1）紫外可見分光光度計；（2）30mm光程比色皿；（3）500mL全玻璃蒸餾器；（4）500mL錐形分液漏斗。

4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚2.2試劑準(zhǔn)備（1）無酚水：加氫氧化鈉使水呈現(xiàn)強(qiáng)堿性，并加入高錳酸鉀至溶液呈紫紅色，移入全玻璃蒸餾器中加熱蒸餾，集取餾出液備用。（2）酚標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1.00g/L）:稱取1.00g精制苯酚，溶解于無酚水，移入1000mL中，用無酚水稀釋至標(biāo)線，并進(jìn)行標(biāo)定。置冰箱內(nèi)冷藏，可穩(wěn)定保存一個月。4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚2.2試劑準(zhǔn)備（3）酚標(biāo)準(zhǔn)中間液（10mg/L）：取適量酚標(biāo)準(zhǔn)貯備液用無酚水稀釋至100mL容量瓶中，使用時當(dāng)天配制。（4）酚標(biāo)準(zhǔn)使用液（1.00mg/L）：量取10.00mL酚標(biāo)準(zhǔn)中間溶液于100mL容量瓶中，用無酚水稀釋至標(biāo)線，配制后2h內(nèi)使用。4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚2.2試劑準(zhǔn)備（5）0.1mol/LKBrO3-KI溶液：稱取2.784gKBrO3溶于水，加入10gKI，溶解后移入100mL容量瓶中，用水稀釋至標(biāo)線。（6）0.0125mol/LNa2S2O3標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取3.1gNa2S2O3，溶于煮沸放冷的水中，加入0.2gNa2CO3，溶解后移入1000mL容量瓶中，用水稀釋至標(biāo)線。臨用前按照GB7489-87標(biāo)定。（7）0.01g/mL淀粉溶液：稱取1g可溶性淀粉，用少量水調(diào)成糊狀，加沸水至100mL，冷卻后移入試劑瓶中，冰箱內(nèi)冷藏保存。4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚3.萃取分光光度法步驟4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚3.1水樣采集與保存（1）按照《地表水和污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范》（HJ/T91）的相關(guān)規(guī)定采集大于500mL體積的水樣于硬質(zhì)玻璃瓶中；（2）用玻璃棒蘸取水樣于淀粉-碘化鉀試紙上，觀察其顏色；若試紙變藍(lán)，說明有游離氯等氧化性物質(zhì)存在，應(yīng)加入過量硫酸亞鐵去除；4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚3.1水樣采集與保存（3）用pH試紙測定水樣pH值，如果pH>4.0，應(yīng)及時加入磷酸酸化至pH約為4.0，并加入適量硫酸銅，使樣品中硫酸銅濃度約為1g/L，以抑制微生物對酚類的生物氧化作用。（4）處理好的水樣應(yīng)在4℃下冷藏，24小時內(nèi)測定。4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚3.2蒸餾（1）取250mL樣品移入500mL全玻璃蒸餾瓶中，加25mL水，加數(shù)粒玻珠以防止暴沸；（2）加數(shù)滴甲基橙，加磷酸溶液使溶液顯橙紅色（pH=4）；4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚3.2蒸餾（3）加入5.0mL硫酸銅溶液，連接冷凝裝置并開啟，加熱蒸餾，收集餾出液250mL于容量瓶中，備用。（4）以無酚水代替試樣，按與水樣測定相同步驟進(jìn)行蒸餾，其餾出液作為空白樣。4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚3.3顯色（1）將餾出液250mL移入500ml分液漏斗中，加2.0mL緩沖溶液，混勻，pH值為10.0±0.2；（2）加1.5mL的4-氨基安替比林溶液，混勻；（3）再加1.5mL鐵氰化鉀溶液，充分混勻后密塞，放置10min。4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚3.4萃?。?）在上述顯色分液漏斗中準(zhǔn)確加入10.0mL三氯甲烷，密塞，劇烈振搖2min，倒置放氣，靜置分層。（2）用干脫脂棉或濾紙拭干分液漏斗頸管內(nèi)壁，于頸管內(nèi)塞一小團(tuán)干脫脂棉或濾紙；4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚3.4萃?。?）打開分液漏斗旋塞，使三氯甲烷層通過干脫脂棉團(tuán)或濾紙流出，棄去最初濾出的數(shù)滴后，將三氯甲烷及萃取物直接放入光程為30mm的比色皿中。（4）空白樣按照樣品的萃取過程進(jìn)行。4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚3.5酚標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制于一組8個分液漏斗中，分別加入100ml無酚水，依次加入0.00、0.25、0.50、1.00、3.00、5.00、7.00、10.00mL酚標(biāo)準(zhǔn)使用液，再分別加水至250mL，按照水樣的方法進(jìn)行顯色和萃取操作。4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚3.6吸光度測定（1）于460nm波長，以三氯甲烷為參比，測量三氯甲烷萃取液的吸光度；（2）記錄數(shù)據(jù)：將測定結(jié)果記錄入下表。4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚3.6吸光度測定（2）數(shù)據(jù)記錄。表2水中揮發(fā)酚測定數(shù)據(jù)記錄表試樣10mg/L酚標(biāo)準(zhǔn)中間液水樣吸取體積（mL）0.000.501.003.005.007.0010.0012.5025.0025.00苯酚含量（mg）0.000.0050.010.030.050.070.100.125吸光度A4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚3.7校準(zhǔn)曲線法定量（1）以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液測得的校正吸光度為縱坐標(biāo)，以相應(yīng)溶液的酚含量毫克數(shù)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（2）根據(jù)水樣的校正吸光度值查找對應(yīng)的酚含量（mg數(shù)）；（3）計算水樣揮發(fā)酚含量。Axmx4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚（3）計算水樣揮發(fā)酚含量：揮發(fā)酚濃度（以苯酚計，mg/L）=（mx-m0）/V

式中：mx——由水樣測得的校正吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的揮發(fā)酚的含量，mg；

m0——由空白試驗測得的校正吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的揮發(fā)酚的含量，mg；

V——顯色時所取餾出液體積，50mL。4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚4.干擾消除4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚4.1氧化劑干擾及消除（1）主要氧化劑：游離氯等；（2）檢測方法：采樣后，立即滴幾滴水樣于淀粉-碘化鉀試紙上，如出現(xiàn)藍(lán)色，說明存在氧化劑；（3）消除方法：向水樣中加入過量硫酸亞鐵去除。4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚4.2硫化物干擾及消除（1）檢測方法：滴幾滴水樣于乙酸鉛試紙上，如果試紙變黑色，說明有硫化物存在；（2）

消除方法：向水樣中加磷酸酸化，直至生成的硫化氫完全逸出。（注意硫化氫有毒！）4-AAP分光光度法測揮發(fā)酚4.3還原性物質(zhì)干擾及消除（1）還原性物質(zhì)：甲醛、亞硫酸鹽和油類等。（2）消除方法：①分取適量樣品于分液漏斗中，加硫酸溶液使呈酸性，分次加入50ml、30ml