氨基酸總量的測(cè)定2

《生物產(chǎn)品的分析與檢驗(yàn)技術(shù)》項(xiàng)目六氨基酸的分析與檢驗(yàn)任務(wù)一氨基酸總量的測(cè)定氨基酸是含有氨基和羧基的一類有機(jī)化合物的統(tǒng)稱，氨基酸不是單純的一種物質(zhì)，有時(shí)多種氨基酸可以共存。所以不能以氨基酸百分率來(lái)表示氨基酸含量，而需要測(cè)定總的氨基酸量，以氨基酸中所含的氮(氨基酸態(tài)氮)的百分率表示。若樣品中只含有一種氨基酸，就可以從含氮量計(jì)算出氨基酸的含量。

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氨基酸總量測(cè)定方法主要有單指示劑甲醛滴定法、雙指示劑甲醛滴定法和茚三酮比色法。

任務(wù)一氨基酸總量的測(cè)定1.原理與單指示劑甲醛滴定法相同，只是在本方法中使用了2種指示劑，單指示劑滴定法準(zhǔn)確度稍偏低，主要因?yàn)閱沃甘緞┘兹┑味ǚㄊ且园被崛芤旱膒H作為百里酚酞的終點(diǎn)，pH為9.2，而雙指示劑甲醛滴定法是以氨基酸溶液的pH作為中性紅的終點(diǎn)，pH為7.0。從理論計(jì)算看，雙色滴定法比單色滴定法準(zhǔn)確。二、雙指示劑甲醛滴定法測(cè)定任務(wù)一氨基酸總量的測(cè)定2.試劑與儀器1.試劑

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40%中性甲醛溶液：以百里酚酞指示劑，將甲醛溶液用1mol/LNaOH溶液中和至淡藍(lán)色，臨用前中和。

■0.1%百里酚酞乙醇溶液：稱0.5g酚酞溶于100mL60%酒精中。

■標(biāo)準(zhǔn)0.100mol/L氫氧化鈉溶液。

■0.1％中性紅（50%乙醇溶液）

2.儀器■錐形瓶堿式滴定管移液管洗耳球天平容量瓶試劑瓶量筒玻棒與燒杯等二、雙指示劑甲醛滴定法測(cè)定二、雙指示劑甲醛滴定法3.操作步驟（1）樣品稱量：取相同2份樣品分別注入100mL三角瓶中;（2）滴加指示劑并標(biāo)定：

一份加入中性紅2～3滴，用0.1mo|／LNaOH滴定至終點(diǎn)(由紅色變?yōu)殓晟?，記錄用量；另一份加百里酚酞乙醇液3滴，加中性甲醛20mL，搖勻，用0.1mol／LNaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡藍(lán)色，記錄用量。4.結(jié)果計(jì)算式中x——氨基酸態(tài)氮，％；C——?dú)溲趸c標(biāo)準(zhǔn)溶液的物質(zhì)的量濃度，mol／LV1——用中性紅為指示劑時(shí)堿液所消耗的體積，mLV2——用百里酚酞乙醇液為指示劑時(shí)標(biāo)液消耗量，mLm——樣品質(zhì)量，g0.014——氮的毫摩爾質(zhì)量，g／mmol二、雙指示劑甲醛滴定法測(cè)定次數(shù)測(cè)定內(nèi)容123百里酚酞作指示劑時(shí)消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（mL）中性紅作指示劑時(shí)消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（mL）氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度（mol/L）樣品的質(zhì)量（g）樣品中氨基酸態(tài)氮含量（g/100mL）樣品中氨基酸態(tài)氮含量平均值（g/100mL）相對(duì)平均偏差（%）二、雙指示劑甲醛滴定法6.注意事項(xiàng)

◆雙色滴定法比單色滴定法準(zhǔn)確◆測(cè)定樣品的顏色較深時(shí)，應(yīng)加活