雌激素水平與去卵巢大鼠心肌梗塞后心室重構(gòu)的關(guān)系

rtinStrhlow[1]研究發(fā)現(xiàn)，去后小鼠外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelialprognitorlls，EP）EPs本研究通過觀察去大鼠發(fā)生心肌梗塞前后應(yīng)用雌激素干預(yù)觀察其外周血干細(xì)胞的變化及其對心室重構(gòu)的影響。旨在為進(jìn)一步探討雌激素心血管保護(hù)作用是否與干細(xì)胞改善了心肌損傷修復(fù)有關(guān)，提供分子生物學(xué)依據(jù)。14組：普通心肌梗死組（AMI）;去心肌梗死組(DOMI)：去1月后，結(jié)扎冠脈;去1月，劑量同上。檢測細(xì)胞凋亡應(yīng)用Bax及Bcl-2（BaxBcl-2單克隆抗體均購于SantaCruze公司）；CD90+/Ki67雙抗法免疫熒光組織化學(xué)進(jìn)行染色（CD90Ki-67單克隆抗體購于SantaCruze公司），TCS-Sp2免疫熒光顯微鏡（德國Leica公司）觀察心肌細(xì)胞增殖，應(yīng)用心肌天狼外周血CD90FITC標(biāo)記大鼠CD90單克隆抗體購于Sigma公司，在制造急性心梗模型后的第、、、、56只，腹主動脈采血應(yīng)用EPICSELITE流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（Beckman-Coulter公司）檢測血中單位：109個／L所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±SPSS11.0軟件分析，組間均數(shù)比較采用方差分析或t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料或方差不齊使用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)方法。大鼠心梗手術(shù)前后應(yīng)用雌激素干預(yù)各組外周血CD90＋細(xì)胞的百分率情況和變化(11)冠脈損傷前給予雌激素的雌激素替代組（DOER），心梗術(shù)后第1損傷后給予雌激素的雌激素治療組(DEST)以及單純?nèi)ソM(DOMI)，僅在心梗后7天外周血CD90＋細(xì)胞的百分率才升高雌激素替代組相比較心梗術(shù)后7天內(nèi)各時點(diǎn)外周血CD90＋細(xì)胞的百分率均較低（P<0.01）。(n601301357日期(dAMIDOMIDOERDEST

xs,aP<0.05bP<0.01vs.AMIcP<0.05,dP<0.01vsDOMIgP<0.05,hP<0.01DESvsDOERThepercentageofbloodCD90+ThepercentageofThepercentageof86420 Thedayof 注：1—術(shù)前；21天；33天；45天；57天；6287Bax及Bcl-2多克隆抗體免疫組織化學(xué)染色和雌激素干預(yù)變化（2-9）Bax在冠脈損傷前已給予雌激素的雌激素替代組（DOER）表達(dá)最強(qiáng)，依次為冠脈損傷后給予雌激素的雌激素治療組(DEST)及普通心梗組去組表達(dá)最弱。Bcl-2與之相反，去組表達(dá)最強(qiáng)，而冠脈損傷前已給予雌激素的雌激素替代組（DOER）表達(dá)較弱7CD90+/Ki67+雙抗法免疫熒光組織化學(xué)染色和雌激素干預(yù)變化（10）四組中僅在冠脈損傷前已用雌激素的雌激素替代組Ki67有表達(dá)，其余各組均無表達(dá)，各組中未檢測到CD90+細(xì)胞。圖 1心肌梗塞組、冠脈損傷后應(yīng)用雌激素的雌激素治療組及去組。 能失代償?shù)闹匾?。心臟重構(gòu)是調(diào)控的細(xì)胞和間質(zhì)變化,其中，心肌細(xì)胞的]的早期，是早期細(xì)胞的主要形式。的最短時間為45分鐘，遠(yuǎn)早于壞死[4]研究在體外試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)作為損傷修復(fù)的第一介質(zhì)—巨噬細(xì)胞在幾分鐘內(nèi)就可清除凋亡細(xì)胞，為什麼心肌細(xì)胞在缺血的早期會選擇這樣一種方式？是否是心肌細(xì)胞抗損傷的一種ully等在兔心肌缺血損傷[5]。推測：若細(xì)胞凋亡有損于心功能，應(yīng)用特異的凋亡抑制劑就應(yīng)該能改善受損的心肌功能。我們的研究發(fā)現(xiàn)冠脈損傷前給予雌激素的雌激素替代組（E）xl-2表達(dá)較低。普通心梗組表達(dá)次之。去（I及損傷后給予雌激素的雌素治療（ESx表達(dá)反而較ER及AIl-2ER組Ii-67ER組ER組心功能較好。推測心肌細(xì)胞凋亡可能有益于心臟修復(fù)？kon等人[6]從一種遺傳變種的小鼠身上純化了一種造血干細(xì)胞,這些細(xì)胞隨后被注入事先接受過致死劑量射線照射的心肌梗死小鼠的骨髓中，結(jié)果在梗塞周圍凋亡高發(fā)區(qū)發(fā)現(xiàn)有供體來源的心肌細(xì)胞還有人發(fā)現(xiàn)正常心肌細(xì)胞也存在凋亡果沒有新的細(xì)胞替代數(shù)年臟又由填充這一龕位——干細(xì)胞？目前多數(shù)文 ：雌激素可抑制細(xì)胞凋亡[7-8]。我們的結(jié)果與其不符，但是促進(jìn)？還是抑制？尚需的實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)。傳統(tǒng)的觀念一直認(rèn)為心肌細(xì)胞是一種終末分化細(xì)胞沒有增殖能力心臟增殖能力，Kajstura等[9]于1998年利用共聚焦顯微鏡首次發(fā)現(xiàn)了正常的心肌細(xì)胞有增殖現(xiàn)象，在正常心臟中，每100萬個細(xì)胞有14個細(xì)胞處于有絲期，在缺 的細(xì)胞數(shù)量大約增加10倍左右。Leri等[10]則通過測定不同階段大鼠心肌細(xì)胞端粒酶的活性發(fā)現(xiàn)在幼年成年及老年大鼠的心肌不同Beltrami等肌組織中有少量心肌細(xì)胞發(fā)生有絲。我們的研究也發(fā)現(xiàn)，干細(xì)胞數(shù)量較高（DOER組）Ki-67CD90無表達(dá)。推測CD90可能是較原始干細(xì)胞的表面抗原，隨著干細(xì)胞的分化，表達(dá)，及或存在心肌細(xì)胞 裂。最近，Anversa等在Nature上提出可能存在“心細(xì)胞，它可以和增殖。大量的研究也顯示干細(xì)胞有向損傷組織遷移的特性 稱之為“干細(xì)胞聽到損傷組織的召喚”徑移植入體內(nèi)的外源性骨髓干細(xì)胞,也會定向歸巢至損傷處。Jackson

將/c-Kit+富集的造血干細(xì)胞（也稱SP細(xì)胞，sidepopulationcells）經(jīng)LacZ標(biāo)記肌缺血局部，并形成心肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等。OrlicD.等[14] 細(xì)胞可促進(jìn)小鼠急性心梗肌和血管的再生，心梗面積縮小40%，左室舒張末重要指標(biāo)之一我們前期研究發(fā)現(xiàn)妊娠兔外周血中CD90+的細(xì)胞比例升高且隨孕期逐漸增加，與雌激素水平成正相關(guān)。而且，在心肌梗死后干細(xì)胞動員提前出現(xiàn)[15]。KerstinStrehlow[16]等觀察去 給予雌激素治療后EPCs明顯升高。從脾臟分離EPCs體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)相對于假手術(shù)組，去后小鼠脾臟EPCs降低37.6%，給予雌激素后同樣使內(nèi)皮祖細(xì)胞升高。對人類外周血EPCs研究也得到了相似的結(jié)果觀察進(jìn)行體外婦女給予雌激素前后外周血EPCs，發(fā)現(xiàn)，給予雌激素后，外周血EPCs顯著升高4倍以上。提示：雌激素與外周血骨髓干細(xì)胞水平有關(guān)在本研究中我們發(fā)現(xiàn)單純?nèi)ィ―OMI）外周血CD90＋細(xì)胞的百分率顯著低于普通心梗組（AMI）及冠脈損傷前給予雌激素的雌激素替代組（DOER）；而DOER組心梗后第1天外周血CD90＋細(xì)胞的百分率即顯著升高，第3天達(dá)峰值、且數(shù)值較高。冠脈損傷后給予雌激素的雌激素治療組（DEST）與DOMI組相比較，僅在心梗后7天外周血CD90＋細(xì)胞的百分率才DOER7天內(nèi)各時點(diǎn)外周血CD90＋細(xì)胞的百雌激素升細(xì)胞水平，可能是雌激素保護(hù)心血管系統(tǒng)功能的又一途徑。KerstinStrehlowMD,NikosWernerMD,JanBer MS,etal.Estrogenincreasesbonemarrow-derivedendothelialprogenitorcellproductionanddiminishesneointimaPaulS.Ventricularremodeling.CritCareNursClinNorthAm.200315:407-MurrielCL,Mochly-RosenD.OpposingrolesofdeltaandepsilonPKCincardiacischemiaandreperfusion:targetingtheapoptoticmachinery.ArchBiochemBiophys.2003420:246-254.OrimoA,IkegamiA,etal,Vascularsmoothmusclecellsaretargetsforestrogen.BiophysResCommun,1993,195:730RankiHJ,BudasGR,CrawfordRM,etal.17β-estradiolregulatesexpressionofKATPchannelsinheart-derivedH9c2cells[J].JAmCollCardiol,2002,40:367-374.RaghvendraKD,JacksonEK.Estrogen-inducedcardiorenalprotection:potentialcellular,biochemjcal,andmolecularmechanisms.AmJPhysiolRenalPhysiol,2001,280:F365-F388.HashemiM,Karami-TehraniF,GhavamiS,etal.Adenosineanddeoxyadenosineinducesapoptosisinestrogenreceptor-positiveand-negativehumanbreastcancercellsviatheintrinsicpathway.CellProlifJTCellproliferation,2005,38:269-85.PattenRD,PouratiI,AronovitzMJ,etal.17beta-estradiolreducescardiomyocyteapoptosisinvivoandinvitroviaactivationofphospho-inositide-3kinase/Aktsignaling.CircResJTCirculationresearch,2004,95:692-699.MinJY,YangY,ConversoKL,etal.Transntationofembryonicstemcellsimprovescardiacfunctioninpostinfarctedrats.JApplPhysiol,2002,92:288-296.AnversaP,Nadal-GinardB.Myocyterenewalandventricularremodeling.Nature,2002,415:BeltramiAP,UrbanekK,KajsturaJ,etal.Evidencethathumancardiacmyocytesdivideaftermyocardialinfarction.NEnglMed,2001,344:1750-1757.BlauHM,BrazeltonTR,WeimannJM.Theevolvingconceptofastemcell:entityorfunction?Cell,2001,105:829-841.Helmuth,L.Stemcellshearcallofinjuredtissue,Science,2000,290:1479-JacksonKA,MajkaSM,wangH,etal.Regenerationofischemiccardiacmuscleandvascularendotheliumbyadultstemcells.JClinInvest,2001,107:1395-402.,,等.妊娠兔心肌梗死后外周血干細(xì)胞變化及其與雌激素的關(guān)系.南方醫(yī)學(xué)學(xué)報，2006；2：237-239.StammC,WestphalB,KleineHD,etal.Autologousbone-marrowstem-celltransntationformyocardialregeneration.Lancet,2003,361:45-46.大鼠心梗術(shù)后7天Bax多克隆抗體免疫組織化學(xué)染圖2-心肌細(xì)胞胞漿、