動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體(用)

細(xì)胞融合和單克隆抗體2021/10/101復(fù)習(xí)鞏固：1.植物體細(xì)胞雜交

2.植物組織培養(yǎng)2021/10/102植物體細(xì)胞雜交植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合雜種細(xì)胞組織培養(yǎng)雜種植株去細(xì)胞壁纖維素酶、果膠酶化學(xué)法物理法誘導(dǎo)2021/10/1031.概念：動(dòng)物細(xì)胞融合（cellfusion)，又稱體細(xì)胞雜交（somatichybridiazation），是指兩個(gè)或更多個(gè)相同或不同細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。一、動(dòng)物細(xì)胞融合融合后形成的具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。2021/10/1042、動(dòng)物細(xì)胞融合基本原理：與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同，即細(xì)胞膜的流動(dòng)性3、誘導(dǎo)方式物理法：化學(xué)法：生物法：滅活的病毒電激、振動(dòng)、離心聚乙二醇（PEG）例如：仙臺(tái)病毒2021/10/105滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合，形成雜種細(xì)胞（細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性）生物法：滅活的病毒（喪失感染性、保留抗原結(jié)構(gòu)）2021/10/106病毒促使細(xì)胞融合的主要步驟如下：兩個(gè)原生質(zhì)體或細(xì)胞在病毒黏結(jié)作用下彼此靠近；通過病毒與原生質(zhì)體或細(xì)胞膜的作用使兩個(gè)細(xì)胞膜間互相滲透，胞質(zhì)互相滲透；兩個(gè)原生質(zhì)體的細(xì)胞核互相融合，兩個(gè)細(xì)胞融為一體；進(jìn)入正常的細(xì)胞分裂途徑，分裂成含有兩種染色體的雜種細(xì)胞。2021/10/1074、過程：動(dòng)物細(xì)胞A動(dòng)物細(xì)胞B誘導(dǎo)，融合2個(gè)完整的雜交細(xì)胞AB有絲分裂（膜融合、誘導(dǎo)方法質(zhì)融合、核融合）單核細(xì)胞2021/10/1085、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的發(fā)展簡史告訴我們：科學(xué)技術(shù)是不斷發(fā)展的。那么，實(shí)現(xiàn)動(dòng)物細(xì)胞融合有什么意義呢？打破生殖隔離，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能；廣泛應(yīng)用多個(gè)學(xué)科領(lǐng)域；重要用途：制備單克隆抗體。2021/10/1096、植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合的方法誘導(dǎo)方法用途制備單克隆抗體獲得雜種植株細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞的全能性去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒2021/10/10102、什么是抗體？二、單克隆抗體回顧3、抗體的分布？抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。主要分布在血清中。1、什么是克隆？“克隆”從英文“clone”音譯而來，是指從一個(gè)共同祖先，通過無性繁殖的方法產(chǎn)生出來的一群遺傳特性相同的DNA分子，細(xì)胞或個(gè)體。在細(xì)胞水平指動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng).2021/10/1011

由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克?。┬纬苫蛐拖嗤募?xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。

1、單克隆抗體概念:2021/10/1012該法制備抗體的特點(diǎn)：

產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。自主閱讀P52：抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法及缺陷是什么？思考：如何大量獲取某種特定抗體？2021/10/1013B淋巴細(xì)胞特點(diǎn)：３.每一個(gè)B淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。１.B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。２.動(dòng)物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。2021/10/1014怎樣才能大量生產(chǎn)單克隆抗體？提示1：僅用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可行嗎？提示2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？提示3：有什么方法能使B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力和腫瘤細(xì)胞無限增殖能力同時(shí)具備呢？2021/10/10152、單克隆抗體的制備過程

自學(xué)與思考：1）在從小鼠體內(nèi)取B淋巴細(xì)胞前應(yīng)對小鼠作何種處理？為什么要這樣處理？2）從小鼠何處獲取B淋巴細(xì)胞？3）如只考慮兩兩融合，可能出現(xiàn)哪些融合類型細(xì)胞？4）是否所有雜交瘤細(xì)胞都能產(chǎn)生某一特定抗體？5）由特定的B淋巴細(xì)胞和小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合成的雜交瘤細(xì)胞具有什么特點(diǎn)？6）最后可以通過哪些途徑大量獲取抗體？2021/10/1016B淋巴細(xì)胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞融合（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中細(xì)胞有幾種類型？融合細(xì)胞幾種類型？骨髓瘤細(xì)胞---骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞---B淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞---骨髓瘤細(xì)胞多種雜交細(xì)胞在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗(yàn)陽性克隆上述雜交細(xì)胞分開不同雜交細(xì)胞，克隆專一抗體，檢驗(yàn)陽性細(xì)胞單克隆抗體注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)第1次篩選目的：得到雜交瘤細(xì)胞（多種）。第2次篩選目的：在雜交瘤細(xì)胞中篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。

該細(xì)胞繼承雙親細(xì)胞的遺傳特性，既能產(chǎn)生專一抗體又能無限增殖。雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)？特異性強(qiáng)，靈敏度高2021/10/1017比較項(xiàng)目第一次篩選第二次篩選原理在選擇性培養(yǎng)基中添加某種藥物，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死亡，只有融合的雜種細(xì)胞才能生長抗原—抗體的特異性結(jié)合目標(biāo)雜交瘤細(xì)胞既能無限增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞2021/10/10183.單克隆抗體的應(yīng)用：①作為診斷試劑：準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)，并與一定抗原特異性結(jié)合。

優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確、高效、簡易、快速②用于運(yùn)載藥物：制成“生物導(dǎo)彈”治療疾病：主要用于癌癥治療2021/10/10192021/10/1020兩個(gè)過程動(dòng)物細(xì)胞融合過程單克隆抗體制備過程三個(gè)“一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法一個(gè)新細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢課堂小結(jié)你記住了嗎？－－滅活的病毒－－雜交瘤細(xì)胞－－單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢2021/10/1021形成雜種細(xì)胞獲得雜種植株結(jié)果物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性原理動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目1、植物、動(dòng)物細(xì)胞融合的比較課堂小結(jié)融合前處理用纖維素酶、果膠酶去壁用胰蛋白酶使細(xì)胞分散2021/10/10222、單克隆抗體制備過程B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合B-B細(xì)胞B-瘤細(xì)胞瘤-瘤細(xì)胞選擇培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞（B-瘤細(xì)胞）克隆化培養(yǎng)抗體檢測產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體2021/10/1023B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC

1.右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案制備單克隆抗體不能，沒有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細(xì)胞。(1).該實(shí)驗(yàn)方案的目的是：________________(2).該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？課堂練習(xí)2021/10/1024B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC

(3)A是從小鼠的脾臟中取得__________該細(xì)胞能夠產(chǎn)生______。(4)圖中B為________________過程，常用_________________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。B淋巴細(xì)胞抗體細(xì)胞融合滅活的病毒雙親細(xì)胞產(chǎn)生專一抗體無限