免疫細胞的分離與檢驗

關(guān)于免疫細胞的分離與檢驗第1頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月

第一節(jié)免疫細胞的分類與分離一、免疫細胞的種類與特征二、免疫細胞的分離技術(shù)三、細胞的凍存與復(fù)蘇第2頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月免疫細胞的特征1、免疫細胞的形態(tài)學(xué)特征理化性狀生物學(xué)特性2、免疫細胞的膜分子特征CD分子第3頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月

免疫細胞的起源與分化紅細胞血小板肥大細胞中性粒細胞巨噬細胞樹突狀細胞漿細胞T細胞NK細胞第4頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月免疫細胞的分離技術(shù)1、密度梯度離心法2、黏附分離法3、熒光激活分離法4、磁性分離法5、其他分離法第5頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月密度梯度離心法離心前離心后稀釋抗凝血淋巴細胞分離液血漿單個核細胞粒細胞紅細胞第6頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月沉降速度=2r2（Q—Q0）9xgQ=顆粒比重Q0=溶質(zhì)比重r=顆粒半徑=形狀因子=顆粒摩擦系數(shù)/同體積球型顆粒摩擦系數(shù)=粘稠度g=相對離心力第7頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月人類血液有形成分的平均密度與直徑密度直徑（）血小板1.04—1.06淋巴細胞1.06—1.088—10粒細胞1.08—1.0913紅細胞1.09—1.107.5第8頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月黏附分離法尼龍毛法貼壁法親和板法吸附柱法第9頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月熒光激活分離法（FACS）熒光檢測器濾光片透鏡接物鏡激光束偏轉(zhuǎn)板噴嘴細胞收集管流體護套樣品第10頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月流式細胞儀第11頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月磁性分離法磁鐵吸引法磁式細胞分類術(shù)法第12頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月MACS(陽性選擇法）NS第13頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月MACS(陰性選擇法）NS第14頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月第15頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月其他分離法花環(huán)沉降法細胞活化克隆法MHC分子四聚體法第16頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月抗原肽-MHC分子四聚體技術(shù)T第17頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月細胞的凍存與復(fù)蘇細胞凍存的原理與方法細胞復(fù)蘇的原理與方法第18頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月細胞凍存罐第19頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月

第二節(jié)免疫細胞膜分子的檢測一、免疫細胞膜分子檢測的原理與類型二、免疫細胞膜分子的檢測方法第20頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月免疫細胞膜分子檢測的原理與類型1、以抗體識別抗原2、以配體識別受體第21頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月免疫細胞膜分子的主要檢測方法1、免疫標記檢測方法熒光抗體法酶免疫檢測法免疫金銀染色法2、補體依賴的細胞毒試驗（CDC）3、花環(huán)形成試驗第22頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月SmIg的熒光抗體檢測法第23頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月SmIg的酶免疫檢測法第24頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月補體依賴的細胞毒試驗（CDC）染料補體第25頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月E-花環(huán)T細胞B細胞花環(huán)形成細胞綿羊紅細胞第26頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月第27頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月EA-花環(huán)第28頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月EAC-花環(huán)第29頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月

第三節(jié)免疫細胞功能測定一、轉(zhuǎn)化、增殖試驗二、細胞毒試驗三、抗體形成試驗四、細胞吞噬與殺傷試驗第30頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月1、淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗2、混合淋巴細胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)化、增殖試驗第31頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月第32頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月放射性測定3H-TdR絲裂原（抗原）刺激淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗原理示意第33頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月1、T細胞介導(dǎo)的細胞毒試驗2、NK活性測定3、ADCC作用測定細胞毒檢測試驗第34頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月放射性測定細胞毒試驗原理示意靶細胞效應(yīng)細胞分離上清第35頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月1、直接溶血空斑試驗2、間接溶血空斑試驗3、SPA-SRBC溶血空斑試驗抗體形成試驗第36頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月直接溶血空斑試驗第37頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月間接溶血空斑試驗第38頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月SPA-SRBC溶血空斑試驗第39頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月1、細胞吞噬功能試驗2、細胞殺菌功能試驗細胞吞噬與殺傷功能試驗第40頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月第41頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月吞噬百分率=吞有顆粒的吞噬細胞數(shù)計數(shù)的吞噬細胞數(shù)吞噬指數(shù)=吞噬細胞吞噬的總顆粒數(shù)計數(shù)的吞噬細胞數(shù)第42頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月NBT還原試驗原理：N-N-C+H+N=N-R-N-NH2CN=NH四氮唑基（淡黃色）甲月簪基（紫黑色）第43頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月NBT還原試驗方法：1、抗凝血+硝基藍四氮唑（NBT），37。C孵育25min。2、推片染色、鏡檢。正常值：NBT陽性細胞7.5-15%第44頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月

第四節(jié)免疫細胞凋亡測定一、細胞凋亡的概念與原理二、細胞凋亡的檢測方法第45頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月

細胞凋亡的概念與原理1、細胞凋亡的概念2、細胞凋亡的原理3、細胞凋亡的特點第46頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月

細胞凋亡（apoptosis）細胞在內(nèi)源性基因調(diào)控下發(fā)生的主動死亡過程，也稱程序性死亡。第47頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月

細胞凋亡的過程凋亡信號——凋亡受體——信號傳導(dǎo)——凋亡基因啟動——編碼程序性死亡蛋白——細胞結(jié)構(gòu)解體——細胞凋亡第48頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月

細胞凋亡機制第49頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月

細胞凋亡的特點1、細胞皺縮2、染色質(zhì)邊集3、凋亡小體出現(xiàn)第50頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月

細胞凋亡第51頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月

細胞凋亡的檢測方法1、形態(tài)觀察法2、生化檢測法3、流式細胞儀檢測法第52頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月形態(tài)觀察法普通光鏡檢測——HE染色甲基綠-派諾寧染色熒光顯微鏡檢測——溴化丙錠染色透射電鏡檢測——典型形態(tài)改變第53頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月生化檢測法凝膠電泳法原位末端標記法二苯胺分光光度法第54頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月凝膠電泳法原理：斷裂DNA在凝膠中呈梯形排列（DNAladder）方法：提取總DNADNA凝膠電泳觀察DNAladder現(xiàn)象第55頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月原位末端標記法（TUNEL）原理：利用標記的dUTP，在TdT作用下結(jié)合DNA斷片的3’末端羥基，顯示斷鏈DNA，提示凋亡方法：制備組織切片標記物結(jié)合標記物顯色鏡檢第56頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月二苯胺分光光度法原理：細胞凋亡可產(chǎn)生低分子量DNA，通過超速離心可與細胞核的高分子量DNA分離，分別測定兩種DNA，即可得出凋亡百分率。方法：裂解細胞13000g超速離心分別提取DNA使DNA顯色，測定第57頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月凋亡百分率=上清液OD值上清液OD值+沉淀OD值第58頁，課件共60頁，創(chuàng)作于2023年2月流式細胞儀法原理：PI標記凋