糞大腸菌群的測定2

項目四：城鎮(zhèn)污水監(jiān)測

任務7糞大腸菌群的測定

測定方法和原理1試劑和儀器2測定過程33結果計算44任務7糞大腸菌群的測定1.1方法名稱與適用范圍水質糞大腸菌群的測定——多管發(fā)酵法HJ/T347-2007方法名稱適用于地表水、地下水及廢水中糞大腸菌群的測定適用范圍1.2方法原理糞大腸菌群是總大腸菌群中的一部分，主要來自糞便，在44.5℃溫度下能生長并發(fā)酵乳酸產酸產氣的大腸菌群稱為糞大腸菌群。用提高培養(yǎng)溫度的方法，造成不利于來自自然環(huán)境的大腸菌群生長的條件，使培養(yǎng)出來的菌主要為來自糞便中的大腸菌群，從而更準確地反映出水質受糞便污染的情況。多管發(fā)酵法是以最可能數(shù)（mostprobable

number），簡稱MPN來表示試驗結果的。實際上它是根據統(tǒng)計學理論，估計水體中的大腸桿菌密度和衛(wèi)生質量的一種方法。

測定方法和原理1試劑和儀器2測定過程33結果計算44任務7糞大腸菌群的測定

2.1培養(yǎng)基和試劑(1)單倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)基成分：蛋白胨10g

牛肉膏3g乳糖5g

氯化鈉5g1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL

蒸餾水1000mL制法：將蛋白胨、牛肉膏、乳糖、氯化鈉加熱溶解于1000mL蒸餾水中，調節(jié)pH為7.2～7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混勻，分裝于含有倒置的小玻璃管的試管中，于高壓蒸汽滅菌器中，在115℃滅菌20min，貯存于暗處備用。

(2)三倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)基按上述配方比例三倍（除蒸餾水外），配成三倍濃縮的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，制法同上。注：本試驗測定所使用的培養(yǎng)基為配制的乳糖蛋白胨培養(yǎng)基，也可使用成品的大腸菌群發(fā)酵培養(yǎng)基，如：乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基，等。

(3)EC培養(yǎng)液成分：胰胨20g乳糖5g膽鹽三號1.5g磷酸氫二鉀（K2HPO4）4g磷酸二氫鉀（KH2PO4）1.5g氯化鈉5g蒸餾水1000mL制法：將上述成分加熱溶解，然后分裝于含有玻璃倒管的試管中。置高壓蒸汽滅菌器中，115℃滅菌20min。滅菌后pH應為6.9。高壓滅菌鍋生化培養(yǎng)箱2.2儀器和設備

測定方法和原理1試劑和儀器2測定過程33結果計算44任務7糞大腸菌群的測定3.1培養(yǎng)基制備及滅菌（1）水樣接種量的確定將水樣充分混勻后，根據水樣污染的程度確定水樣接種量。每個樣品至少用三個不同的水樣量接種。同一接種水樣量要有五管。相對未受污染的水樣接種量為10mL、1mL、0.1mL。受污染水樣接種量根據污染程度接種1mL、0.1mL、0.01mL或0.1mL、0.01mL、0.001mL等。使用的水樣量可參考下表1。表1接種水量參考表由于本次測定的是污水處理廠的出水水樣，所以選取的濃度梯度為10-3、10-4、10-5。（2）乳糖蛋白胨培養(yǎng)基分裝杜氏小管杜氏小管杜氏小管杜氏小管10mL3倍10mL1倍10mL1倍10mL1倍如接種體積為10mL，則試管內應裝有三倍濃度乳糖蛋白胨培養(yǎng)液5mL；如接種量為1mL或少于1mL，則可接種于普通濃度的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液10mL中。（3）準備其他要滅菌的物品（4）滅菌:115OC，20min水源水90ml無菌水9ml無菌水移液管3.2水樣制備及稀釋（1）采樣瓶（2）采集污水處理廠出水口的水樣（3）水樣的稀釋1mL10mL90mL無菌水9mL無菌水原液10-110-21mL1mL9mL無菌水10-39mL無菌水10-49mL無菌水10-51mL10-5杜氏小管杜氏小管杜氏小管10ml3倍10ml1倍10ml1倍1ml1ml培養(yǎng)條件：37℃、24h3.3糞大腸菌群的初發(fā)酵10-41ml10-3生化培養(yǎng)箱1.培養(yǎng)基變?yōu)辄S色，杜氏管中有氣泡（陽性）2.培養(yǎng)基仍為紫色，杜氏管中沒有氣泡（陰性）3.4觀察糞大腸菌群的初發(fā)酵結果表2.1記錄—初發(fā)酵陽性管數(shù)由接種量為10-3mL管轉接由接種量為10-4mL管轉接由接種量為10-5mL管轉接陽性管數(shù)輕微振蕩初發(fā)酵試驗陽性結果的發(fā)酵管，用接種環(huán)將培養(yǎng)物轉接到EC培養(yǎng)液中。在44.5℃±0.5℃下培養(yǎng)24h±2h。培養(yǎng)后立即觀察，發(fā)酵管產氣則證實為菌群陽性。3.5糞大腸菌群的復發(fā)酵試驗表2.2

記錄—復發(fā)酵陽性管數(shù)由接種量為10-3mL管轉接由接種量為10-4mL管轉接由接種量為10-5mL管轉接陽性管數(shù)

測定方法和原理1試劑和儀器2測定過程33結果計算44任務7糞大腸菌群的測定根據不同接種量的發(fā)酵管所出現(xiàn)陽性結果的數(shù)目，從表3中查得每升水樣中的糞大腸菌群。接種5份10mL水樣、5份1mL水樣、5份0.1mL水樣時，查表3求得MPN指數(shù)，MPN值再乘10，即為1L水樣中的糞大腸菌群。如果接種的水樣不是10mL、1mL和0.1mL，而