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種子生產(chǎn)與經(jīng)營(yíng)專業(yè)《作物育種技術(shù)》目的基因重組質(zhì)粒的構(gòu)建掌握質(zhì)粒的含義熟悉最常用的質(zhì)粒掌握質(zhì)粒重組的基本步驟教學(xué)目標(biāo)一、質(zhì)粒（一）質(zhì)粒的含義質(zhì)粒是一種細(xì)胞染色體外能夠自主復(fù)制的很小的環(huán)狀DNA分子，在基因工程中，質(zhì)粒被用來當(dāng)做目的基因的運(yùn)載體，也是一種運(yùn)輸工具。獲得的目的基因只是為利用外源基因提供了基礎(chǔ)，還需連接到載體上才能進(jìn)行自我復(fù)制。將目的基因與載體結(jié)合的過程就是對(duì)目的基因進(jìn)行體外重組的過程。一、質(zhì)粒（二）最常用的質(zhì)粒目前在植物基因工程中，最常用的載體系統(tǒng)是Ti質(zhì)粒，它是根瘤土壤桿菌細(xì)胞中存在的一種環(huán)形雙鏈DNA分子。農(nóng)桿菌侵染植物后，Ti質(zhì)粒中的T-DNA區(qū)段脫離質(zhì)粒而整合到受體植物的染色體上。因此，如果把外源基因插入T-DNA中，就有可能攜帶進(jìn)入受體植物并整合到染色體上。一、質(zhì)粒（二）最常用的質(zhì)粒T-DNA中的Shi和Roi基因與這個(gè)質(zhì)粒的毒性區(qū)段中的幾個(gè)基因合作，能導(dǎo)致植物產(chǎn)生冠癭瘤，這些基因不但與運(yùn)載外源基因無關(guān)，而且還有害于植物。經(jīng)過改良的Ti質(zhì)粒保留了它的插入植物染色體、自我復(fù)制，轉(zhuǎn)錄mRNA等功能以及其固有的起標(biāo)志作用的合成Opines（罌粟堿）的基因，并且容許目的基因插入其中，這種改良的Ti質(zhì)?？梢郧秩緹煵荨珷颗?、馬鈴薯和向日葵等許多雙子葉植物，并且能有效地轉(zhuǎn)移外源基因。

二、質(zhì)粒重組的基本步驟質(zhì)粒重組的基本步驟包括：對(duì)目的基因的載體進(jìn)行改造利用限制性內(nèi)切酶將載體切開連接酶把目的基因連接到載體上獲得DNA重組體二、質(zhì)粒重組的基本步驟已經(jīng)分離的目的基因一般都保存在大腸桿菌內(nèi)的一類輔助質(zhì)粒中，常用的有pBR322系列、pUC以及pBluescriptK+(—)系列等。在進(jìn)行外源基因轉(zhuǎn)移前還必須將外源基因重組到合適的載體上，具體采用哪種載體要根據(jù)轉(zhuǎn)基因的方法和目的而定。二、質(zhì)粒重組的基本步驟二、質(zhì)粒重組的基本

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