2023學年完整公開課版同工酶分析

第五章酶學分析技術永州職業(yè)技術學院陳武哲同工酶分析一、同工酶概念

是指催化相同的化學反應，而酶蛋白的分子結構、理化性質(zhì)不同的一組酶。二、同工酶產(chǎn)生的機理（一）由不同基因位點編碼（二）由等位基因編碼（三）由多肽鏈化學修飾產(chǎn)生三、同工酶的分析技術

方法同工酶(或亞型)的性質(zhì)差異同工酶、亞型電泳法電荷不同所有同工酶、亞型層析法(離子交換層析、親和層析)電荷不同CK，LD，ALP免疫分析法免疫抑制法特異性抗體反應性不同CK、LD、ACP免疫化學測定法特異性抗體反應性不同CK、LD、ACP、ALP、AMY動力學分析法

底物特異性分析法底物Km、親和力不同ACP、CK、LD（-羥丁酸）抑制劑分析法對小分子量的抑制劑的特異性抑制不同LD（草酸）、ACP（L-酒石酸）、ALP（L-苯丙氨酸）pH分析法最適pH不同AST熱失活分析法熱穩(wěn)定性不同ALP蛋白酶水解法對蛋白水解酶敏感度不同LD、AST（一）按照理化性質(zhì)不同進行分離鑒定

1．電泳法

同工酶氨基酸組成不同，等電點不同，電泳遷移率也就不同，據(jù)此可用電泳法分離鑒定。（常規(guī)實驗室同工酶常用的測定方法。）

2．層析法根據(jù)同工酶分子荷電量不同，可用離子交換層析法加以分離。（用于同工酶的提純和制備，方法費時繁瑣不適用于臨床同工酶的常規(guī)檢測。）（二）按照底物專一性不同進行鑒定同工酶底物專一性不同，Km值也不同。如果同工酶之間的Km值差別足夠大，可以通過測定其Km值加以鑒定。（三）按照最適pH不同進行鑒定

同工酶分子氨基酸組成不同，最適pH也不同。如果同工酶最適pH之間的差別足夠大，可以通過調(diào)節(jié)緩沖溶液的pH值加以鑒定。（四）按照免疫學特性不同進行分離鑒定

由于同工酶分子的氨基酸組成不同，抗原性亦不同。可將同工酶分離提純后制備抗血清，用于同工酶的分離鑒定。常用的方法有免疫沉淀法、免疫抑制法、免疫化學法等。1．免疫抑制法

向標本中加入特異性抗體，與該抗體結合的同工酶的活性就受到抑制，其它同工酶活性則不受影響，據(jù)此對同工酶加以鑒定。2.免疫沉淀法

向標本中加入特異性抗體，讓特異性抗體與相應的同工酶形成抗原-抗體復合物沉淀，通過離心即可得到分離，其它同工酶仍舊保留在溶液中。2.免疫沉淀法

不適用于等位基因編碼的同工酶，僅適用于不同基因位點編碼的同工酶，因為后者酶蛋白氨基酸組成差異較大，抗原特異性較強。（五）按照耐熱程度不同進行鑒定

由于各種同工酶的耐熱性不同，根據(jù)此特點可以對同工酶進行鑒定。（六）選擇性抑制法

由于同工酶分子組成和理化性質(zhì)不同，對抑制劑的敏感程度也不同。四、同工酶測定的臨床意義

同工酶的分析與鑒定則能反映疾病部位、性質(zhì)和程度。由于血清同工酶分布具有器官特異性、組織特異性和細胞特異性，因此，同工酶的測定可以較為準確地反映病變器官、組織和細胞的種類及其功能損傷的程度，與酶的總活性測定相比，同工酶測定具有診斷特異性強、符合率高等優(yōu)點，對于疾病的診斷、治療和預后都有重要意義，正在逐步成為酶學中一個重要分支。表5-5幾種重要的同工酶名稱縮寫同工酶種類相關疾病肌酸激酶CKCK-MM,CK-MB,CK-BB心梗、肌病、顱腦損傷、腫瘤乳酸脫氫酶LDHLDH1,LDH2,LDH3,LDH4,

LDH5心梗、肌病、肺梗、腦病、腫瘤堿性磷酸酶ALP肝型，腸型，骨型，胎盤型，腎型肝膽疾病、骨病、妊娠、腸炎、腫瘤γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶γ-GTγ-GT1,γ-GT2,γ-GT3,γ-GT4肝病、梗阻性黃疸淀粉酶AMY胰型，唾液型胰腺炎、腮腺炎丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALT