檢驗(yàn)的確認(rèn)與驗(yàn)證

關(guān)于檢驗(yàn)的確認(rèn)與驗(yàn)證第1頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月為什么要檢驗(yàn)驗(yàn)證這里所說的驗(yàn)證不光是指方法驗(yàn)證，還包括一個(gè)儀器設(shè)備確認(rèn)（有些單位也叫驗(yàn)證，不過國(guó)外一般稱之為Qualification，一般譯成確認(rèn)），甚至還有一個(gè)叫做系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。

看似簡(jiǎn)單的檢驗(yàn)，其實(shí)需要建立在相當(dāng)?shù)囊欢▽用嫔?。檢驗(yàn)可以理解為一個(gè)金字塔，最底層也是最關(guān)鍵的是儀器設(shè)備確認(rèn)，試想你的儀器都不好使，你檢出的結(jié)果怎么能夠相信。舉例：尺子（刻度為英尺）天平（最小稱量50mg）第2頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月檢驗(yàn)驗(yàn)證還包括哪些儀器確認(rèn)再往上是方法驗(yàn)證。方法驗(yàn)證中也包括了確認(rèn)、交叉驗(yàn)證、轉(zhuǎn)移驗(yàn)證等內(nèi)容，不外乎是你需要做什么樣的試驗(yàn)，來確保你檢測(cè)結(jié)果是可信的，在你的實(shí)驗(yàn)室是可以實(shí)現(xiàn)和完成的。再往上是系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，這可能也是國(guó)內(nèi)大家做得比較少的，往往藥典對(duì)它也不是太關(guān)注，頂多是有點(diǎn)重復(fù)性的概念。其實(shí)以下幾個(gè)方面我個(gè)人認(rèn)為也可以是系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的一部分，它包括空白干擾、對(duì)照品檢查（即雙份對(duì)照品的平行性檢查）、括號(hào)對(duì)照品檢查（即檢查系統(tǒng)沒有發(fā)生漂移，以及溶液穩(wěn)定）、有關(guān)物質(zhì)的定量限、分離度（包括峰谷比）等。只有建立在這個(gè)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)通過的基礎(chǔ)上，本次試驗(yàn)的結(jié)果才是可信的。第3頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1、儀器設(shè)備確認(rèn)這是個(gè)在新版GMP中引進(jìn)的概念，以前只有工藝驗(yàn)證、生產(chǎn)設(shè)備和公用工程系統(tǒng)等概念。其實(shí)這個(gè)概念由來已久，簡(jiǎn)單的理解可以說是3Q（對(duì)于分析儀器基本上不需要設(shè)計(jì)確認(rèn)，都是成型的東西，頂多需要個(gè)URS），再加上個(gè)校準(zhǔn)就差不多了?？赡車?guó)內(nèi)很多單位甚至一些所謂的“磚家”認(rèn)為檢定就是儀器設(shè)備的全部，其實(shí)我個(gè)人對(duì)檢定是最不感冒的：第一，儀表、標(biāo)準(zhǔn)器械類的一般沒有問題；第二，儀器設(shè)備類的可能與我們行業(yè)的要求及用戶需要有很大不同；第三，很多檢測(cè)是沒有標(biāo)準(zhǔn)的，就給你一個(gè)校驗(yàn)結(jié)果，你自己看去；第四，有相當(dāng)一部分根本就不做，有些讓客戶自己做，讓他做還有什么意義，只是收錢而已。在我看來，儀器設(shè)備的檢定、檢測(cè)那是給一些官老爺們看的，確認(rèn)才是給自己用的（很多官老爺不懂也不看）。目的明確了，確認(rèn)也就好做了。

第4頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3QIQ：不外乎是要看一下水、電、氣、環(huán)境、東西是否正確齊全、安裝人員的資質(zhì)、軟件等等是否符合要求，與你的合同是否一致。OQ：主要是看你的儀器設(shè)備是否能夠正常運(yùn)行，包括功能鍵、密碼等是否能夠正確通過；儀器設(shè)備的主要指標(biāo)是否能夠滿足。PQ：主要是看儀器設(shè)備是否能夠滿足用戶的需求。

有很多儀器設(shè)備的OQ和PQ并不一定能夠界定得很清楚，沒有必要一定強(qiáng)行去劃分，最重要的是能夠滿足你的要求，而且沒必要做多次重復(fù)和工作。還有很多儀器設(shè)備并不需要進(jìn)行OQ和PQ，甚至同一儀器目的不同也會(huì)有所差別。例如一臺(tái)干燥箱，如果只是烘玻璃器皿，那就不需要進(jìn)行OQPQ確認(rèn)；還有一些儀器，由于每次使用都需要進(jìn)行校準(zhǔn)，那么這種儀器對(duì)于所謂的確認(rèn)要求也可以降低，例如pH計(jì)等；還有一些儀器設(shè)備，他的作用只是輔助的，準(zhǔn)確與否對(duì)你實(shí)驗(yàn)的結(jié)果影響不大，這時(shí)你也不需要進(jìn)行確認(rèn)，例如離心機(jī)、磁力攪拌器等。第5頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月天平的日常校驗(yàn)天平在所有儀器設(shè)備里是一種比較特殊的儀器，除了需要進(jìn)行正常的確認(rèn)外，還要每天進(jìn)行日校（更合適的應(yīng)該叫做日常檢查）。這是因?yàn)樘炱皆跈z驗(yàn)中非常關(guān)鍵，而且本身也容易受各種條件的影響而發(fā)生偏移。個(gè)人覺得在進(jìn)行日校時(shí)應(yīng)設(shè)立警戒限和行動(dòng)限，所謂警戒限就是指當(dāng)天平超出這個(gè)值時(shí)你要做重新校正（例如內(nèi)?；蛲庑＃允怪粫?huì)再發(fā)生更大的偏移；所謂行動(dòng)限就是指當(dāng)天平走出這個(gè)值時(shí)你需要對(duì)過去一天以來的所有數(shù)據(jù)進(jìn)行回顧和調(diào)查（可以通過偏差調(diào)查的方式），以確定哪些檢驗(yàn)結(jié)果是有效的，哪些數(shù)據(jù)是無效的。如果平時(shí)不進(jìn)行日校，那么你根本無法確定當(dāng)發(fā)現(xiàn)問題的這段時(shí)間哪些數(shù)據(jù)還可用。還有一種所謂的日校，就是日校時(shí)首先清零，再外校，再檢查。就相當(dāng)于你把罪證都已經(jīng)銷毀了，再自己查一次，說，“沒問題”，那不是自己騙自己?jiǎn)?！不過相信還是比從來都沒做過強(qiáng)。前幾天去做供應(yīng)商審計(jì)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)人家根本連砝碼都沒有，還校啥呀，問他們?cè)鯓诱J(rèn)為天平有問題，答曰“天平?jīng)]回到零點(diǎn)”，然后找計(jì)量院來看看。第6頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月儀器設(shè)備的OQPQ舉例HPLC：泵流速（準(zhǔn)確性和波動(dòng)性）、進(jìn)樣器（重復(fù)性和殘留量）、紫外檢測(cè)器（波長(zhǎng)準(zhǔn)確性、燈能量、噪音和漂移）、多元混合器（梯度準(zhǔn)確性和波動(dòng)性）。

UV：波長(zhǎng)準(zhǔn)確性、吸收值準(zhǔn)確性和重復(fù)性、基線平直度、分辨率、噪音和漂移等。

恒溫（包括恒濕）箱：不同溫度（濕度）分布、準(zhǔn)確性和波動(dòng)性。

滅菌鍋：除溫度分布外，還有程序升溫曲線以及熱穿透性。

第7頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2、分析方法驗(yàn)證這部分內(nèi)容在ICHQ2部分有明確的闡述，但只是在概念上比較清晰，在實(shí)踐應(yīng)用中卻不是特別明確，在這里只是對(duì)其需要特別注意的事項(xiàng)作一個(gè)補(bǔ)充。

有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)的方法驗(yàn)證具有一定的特殊性，也是最容易被質(zhì)疑的方法，這里暫不提到，更多的是其他方面的常見問題。

驗(yàn)證的方法與檢驗(yàn)方法不一致是最常見的問題！即使CDE和一些藥檢機(jī)構(gòu)可能也沒有注意到這一點(diǎn)，而且由于國(guó)內(nèi)注冊(cè)中大家都知道的原因造成沒有大量數(shù)據(jù)的積累，進(jìn)而不會(huì)在注冊(cè)中發(fā)現(xiàn)這個(gè)問題所造成的巨大影響，舉個(gè)例子說明。

第8頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月研磨制備供試品（1）很多國(guó)人在制定含量（固體制劑）測(cè)定時(shí)，都采用研磨后稱取的方法制備供試品溶液，甚至在一些口岸所都將進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)中的投片法給改為研磨法；而在方法驗(yàn)證中即沒有采用研磨法，所以看上去驗(yàn)證的結(jié)果很美，但你得到的結(jié)果卻可能是個(gè)偽結(jié)論。因?yàn)楹芏嘈∫?guī)格的產(chǎn)品在研磨過程中都會(huì)存在吸附現(xiàn)象，這種現(xiàn)象會(huì)因?yàn)椴煌娜?、不同的研磨工具、不同的力度和時(shí)間等因素而有所不同，最經(jīng)典的結(jié)果就是經(jīng)常會(huì)發(fā)現(xiàn)含量測(cè)定的結(jié)果要低于均勻度測(cè)定的平均值！那么請(qǐng)注意，如果你要采用研磨法制備樣品，請(qǐng)?jiān)隍?yàn)證時(shí)也要將對(duì)照品研于空白輔料或樣品（加樣回收）中，而不是直接投入容量瓶里！如果你要直接投入容量瓶中，只有你的方法是投片法，或者全轉(zhuǎn)移的方法！第9頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3、分析方法確認(rèn)這里單獨(dú)提出來是因?yàn)樵谛掳鍳MP中提出了這個(gè)概念，而國(guó)內(nèi)官方?jīng)]有給出明確的概念。GMP第223條：對(duì)不需要進(jìn)行驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法，企業(yè)應(yīng)當(dāng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行確認(rèn)，以確保檢驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、可靠。分析方法確認(rèn)是指一個(gè)方法對(duì)于你的產(chǎn)品（或物料）、實(shí)驗(yàn)條件在你的實(shí)驗(yàn)室能否進(jìn)行的一種適用性檢測(cè)。即：確認(rèn)本實(shí)驗(yàn)室具備檢驗(yàn)條件和能力，能確保檢驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠。第10頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月比如說你的工藝與其他人家不同，你的雜質(zhì)分布也會(huì)有可能不同，因此藥典的方法不一定能夠適合你的產(chǎn)品，所以你要進(jìn)行確認(rèn)。至于你確認(rèn)哪些項(xiàng)目，在美國(guó)藥典附錄1226中有所描述，但由于各家對(duì)其理解有所不同，它被認(rèn)為是最低要求，你要根據(jù)自己的情況適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行增補(bǔ)。第11頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月如何進(jìn)行方法確認(rèn)當(dāng)然并不是所有的藥典方法都要做確認(rèn)，已使用多年的、通用的方法是不需要做確認(rèn)的，例如熾灼殘?jiān)?、干燥失重、pH等實(shí)驗(yàn)室日常測(cè)試。一般需要做確認(rèn)的方法通常是指色譜法，但并不局限于此。第12頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月如何進(jìn)行方法確認(rèn)方法確認(rèn)=簡(jiǎn)要的方法驗(yàn)證以含量為例，一般應(yīng)確認(rèn)：準(zhǔn)確度、精密度（系統(tǒng)重復(fù)性、分析重現(xiàn)性）、專屬性。操作及限度要求同方法驗(yàn)證。一是確認(rèn)產(chǎn)品是否適用這個(gè)檢驗(yàn)方法，尤其是制劑處方中的輔料是否有干擾。二是確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室的條件能否用這個(gè)方法獲得準(zhǔn)確的結(jié)果，包括儀器設(shè)備、環(huán)境、人員等。第13頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月如何進(jìn)行方法確認(rèn)參見下表驗(yàn)證項(xiàng)目第1類方法第2類方法第3類方法第4類方法定量分析限度試驗(yàn)準(zhǔn)確度是是＊＊否精密度是是否是否專屬性是是是是是檢出限否否是＊否定量限否是否＊否線性＊＊否＊否范圍＊＊＊＊否第14頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月＊：表示根據(jù)特殊實(shí)驗(yàn)的性質(zhì)決定是否需要第1類方法：定量測(cè)定散裝藥品中主成分或成品藥中活性成分的分析方法。第2類方法：測(cè)量散裝藥品中雜質(zhì)或成品藥中降解化合物的分析方法。第3類方法：測(cè)量藥品性能特性（如溶出度、釋放度）的分析方法。第4類方法：鑒別試驗(yàn)第15頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月方法轉(zhuǎn)移還有一個(gè)概念與確認(rèn)比較相近，叫做方法轉(zhuǎn)移。在我看來，方法轉(zhuǎn)移可以認(rèn)為是方法確認(rèn)加上重現(xiàn)性，更重要的是指你實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果與原實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果是一致的。第16頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（SST）這一部分是國(guó)內(nèi)很多實(shí)驗(yàn)室都不太關(guān)注的地方，其實(shí)這一部分對(duì)于檢驗(yàn)是非常關(guān)鍵的。簡(jiǎn)單的說，你的檢驗(yàn)結(jié)果是否可信、是否有效、是否有說服力全在這里了。SST一般主要考察哪些方面（主要從色譜角度）：

（1）重復(fù)性：檢查通過則表明你的系統(tǒng)一直處于穩(wěn)定狀態(tài)，你的儀器沒有問題。如果你的檢驗(yàn)結(jié)果有問題，要么是你的制備有問題，要么是你的樣品有問題，儀器出現(xiàn)問題的機(jī)會(huì)很小。第17頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月括號(hào)對(duì)照品檢查重復(fù)性國(guó)內(nèi)有相當(dāng)?shù)钠髽I(yè)都在做，但另外一個(gè)概念很多企業(yè)都不太關(guān)注：括號(hào)對(duì)照品檢查。意思是什么呢，你的樣品被對(duì)照品進(jìn)樣包著，形成一個(gè)括號(hào)，括號(hào)沒有問題，才表明你的樣品檢測(cè)沒有問題，否則你后面的對(duì)照品與前面的樣品不一致，你怎么保證你的樣品在檢測(cè)時(shí)沒有問題。在一些要求嚴(yán)格的企業(yè)，如果供試品后面沒有括號(hào)檢查，那么可以認(rèn)為這期間你所有的樣品的檢測(cè)結(jié)果都是無效的。第18頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月分離度考查（2）分離度考查：這往往是有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)SST最常見的要求（但國(guó)內(nèi)很多標(biāo)準(zhǔn)，尤其是進(jìn)口注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)，居然將它轉(zhuǎn)移至含量測(cè)定中去，估計(jì)連自己都不知道在干什么）。由于國(guó)外對(duì)于雜質(zhì)研究的比較透徹，所以它并不會(huì)像國(guó)內(nèi)那樣去比較供試品和未知雜質(zhì)的分離情況，更多的是以加標(biāo)的方法來考查。第19頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月定量限考查（3）定量限考查：在一些較先進(jìn)的方法中，往往規(guī)定了配制定量限溶液，以之進(jìn)樣，檢測(cè)信噪比，要求不得小于10，否則雜質(zhì)無法準(zhǔn)確定量，這往往要優(yōu)于你在方法驗(yàn)證中所做的用信噪比去篩濃度的作法，因?yàn)樾旁氡葧?huì)受儀器本身、流動(dòng)相、電信號(hào)、柱子、溫度等多方面的影響，甚至有不同數(shù)量級(jí)的差別，因此后者往往沒有任何實(shí)際意義。（4）理論板數(shù)、拖尾因子等。自己看藥典去，與前三個(gè)概念一比，沒有值得說的地方。

除了這些，以下的內(nèi)容也可以被認(rèn)為是SST的一部分，超出規(guī)定的范圍也被認(rèn)為是無效數(shù)據(jù)：第20頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月平行對(duì)照品（5）平行對(duì)照品：如果兩份對(duì)照品不平行，那么說明你配制過程中可能存在問題，你無法確定哪一個(gè)是正確的，因此兩份都無效，你也不需要再往下進(jìn)樣，直接重新配制再進(jìn)樣就OK了，對(duì)照品無效，那么檢驗(yàn)的樣品數(shù)據(jù)也就無效了。第21頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月平行樣品（6）平行樣品：同平行對(duì)照品，兩份不平行則說明至少你樣品制備有問題，除非你能證明你的方法有問題，既然制備有問題，檢驗(yàn)結(jié)果當(dāng)然無效了。如果這時(shí)有一個(gè)數(shù)據(jù)為OOS結(jié)果，你也大也不必進(jìn)行調(diào)查，因?yàn)檫@是無效數(shù)據(jù)，OOS只有是在有效數(shù)據(jù)的情況下再進(jìn)行調(diào)查。例如含量要求98.0%-102.0%，平行要求不得過2.0%，結(jié)果是99.0%和102.5%，那么你不需要進(jìn)行OOS調(diào)查；而如果結(jié)果是101.0%和102.5%，你就需要進(jìn)行OOS調(diào)查。要記住，你的平行樣品的規(guī)定是你自己要求的。第22頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月為什么要平行測(cè)定含量測(cè)定時(shí)都采用雙對(duì)照品，請(qǐng)問：計(jì)算時(shí)應(yīng)該采用A還是B，或者是A和B的平均值，抑或其他，為什么？采用兩份的平均值會(huì)不會(huì)增加準(zhǔn)確性？為什么要做兩份，做三份、五份行不行？

第23頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月平行測(cè)定的目的做兩份的目的是用以證明你的稱量和配制過程是沒有問題的！任何操作本身就有誤差，就如我們前面所說的那樣，你所用的儀器設(shè)備都要確認(rèn)過的，而且像天平每天都要做校驗(yàn)，但仍然不能避免誤差，更何況還有可能出現(xiàn)人為誤差，而這些誤差并不見得你在操作過程中就可以發(fā)現(xiàn)（發(fā)現(xiàn)了你就該重新配了）。在你的儀器例如HPLC已經(jīng)確認(rèn)完成的基礎(chǔ)上，進(jìn)樣平行樣品，如果有操作導(dǎo)致的誤差可能被發(fā)現(xiàn)（當(dāng)然三份時(shí)發(fā)現(xiàn)的機(jī)會(huì)就更大）。簡(jiǎn)單舉個(gè)例子，你在稱量時(shí)出現(xiàn)灑的機(jī)率是1%，那么稱兩份時(shí)出現(xiàn)灑的機(jī)率就是萬分之一。第24頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月如何計(jì)算計(jì)算時(shí)應(yīng)該采用哪個(gè)呢，A、B還是平均值？答案其實(shí)是都可以，只要檢查通過！因?yàn)槎叨际钦_的，而且你也沒辦法證明哪個(gè)更準(zhǔn)確，也就不能說明平均值會(huì)更好。第25頁(yè)，課件共29頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月平行測(cè)定的意義在你的儀器確認(rèn)沒有問題