磷酸鹽緩沖液配制方法

磷酸鹽緩沖液（PBS）配制方法0.01MPBSPBS(135mMNaCl,2.7mMKCl,1.5mMKH2PO4,and8mMK2HPO4，pH7.2)PBS緩沖液（pH7.2～7.4）：NaCl137mmol/L，KCl2.7mmol/L，Na2HPO44.3mmol/L，KH2PO41.4mmol/L稱7.9gNaCl，0.2gKCl，0.24gKH2PO4(or1.44gNa2HPO4)和1.8gK2HPO4，溶于800ml蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4，最后加蒸餾水定容至1L。保存于4℃需要注意的是，通常所說的濃度0.01M指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度，而非Na離子或K離子的濃度，Na離子和K離子只是用來調(diào)節(jié)滲透壓的。母液的配制：0.2MNa2HPO4：稱取71.6gNa2HPO4-12H2O，溶于1000ml水0.2MNaH2PO4：稱取31.2gNaH2PO4-2H2O，溶于1000ml水各種濃度PB(pH=7.4)的配制：先配0.2MPB(pH=7.4，100ml)：取19ml0.2mol/L的NaH2PO4，81ml0.2mol/L的Na2HPO4,即可。然后只需將0.2MPB(pH=7.4)按相應(yīng)比例適當(dāng)稀釋即可，如：0.1MPB（PH=7.4）：取500ml0.2MPB，加水稀釋至1000ml即可。0.01MPB（PH=7.4）：取50ml0.2MPB，加水稀釋至1000ml即可。0.02MPB（PH=7.4）：取100ml0.2MPB，加水稀釋至1000ml即可。若需要NaCl的話，加入NaCl至0.9%（g/100ml）即可。另：其它各種另PH值的0.2MPB（100ml)配方：pH0.2MNaH2PO4（ml）0.2MNa2HPO4（ml）5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.516847.613877.710.590.57.88.591.57.97938.05.394.70.01M磷酸鹽緩沖液（PBS）配制方法稱取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,溶于800ml蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4，最后加蒸餾水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸氣滅菌（至少20分鐘），保存存于室溫或4℃需要注意的是，通常所說的濃度0.01M指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度，而非Na離子或K離子的濃度，Na離子和K離子只是用來調(diào)節(jié)滲透壓的。如果是用于免疫組化的話，則需要在配置的時(shí)候分別加入100u/ml青霉素和鏈霉素之后再調(diào)PH、定容、滅菌消毒。PH7.67.47.27.0H2O1000100010001000NaCl8.58.58.58.5Na2HPO42.22.22.22.2NaH2PO40.10.20.30.4根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來看，新鮮配置的PBS攪勻后其PH值約在7.2-7.4之間，可是在溫度的影響下，尤其在夏天，其電離常數(shù)發(fā)生了改變，在經(jīng)過晝夜的時(shí)間后，PH值會(huì)明顯改變（我親自測(cè)過偏酸）。所以做實(shí)驗(yàn)的同學(xué)可要注意了，PH值可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，甚至可能導(dǎo)致陰性。所以務(wù)必記得這個(gè)時(shí)候和天氣，要加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)條件控制問題。每次使用前最好用試紙測(cè)一下過夜了的PBS，如果發(fā)生偏酸或偏堿，注意重新?lián)Q新液。PBS緩沖液稱取NaCl8g，KCl0.2g，Na2HPO4?12H2O3.63g,KH2PO40.24g，溶于900ml雙蒸水中，用鹽酸調(diào)pH值至7.4，加水定容至1L，常溫保存?zhèn)溆?。PBST緩沖液取300μlTween-20加入PBS100ml中，混勻后即刻使用。現(xiàn)用現(xiàn)配。如果是把所有固體加大十倍，配置為濃縮液，工作時(shí)候十倍稀釋，那么，在剛配好濃縮液時(shí)，PH在6.5左右，明顯偏酸。不能用鹽酸調(diào)。雖然可以用氫氧化鈉顆粒調(diào)，但是有更方便的方法。十倍稀釋以后，PH自動(dòng)升高到所需要的值。不需要其它任何處理。這個(gè)可以先取少量試一試，配好之后再測(cè)一次~PH8.0的PBS配方詳細(xì)1.NaCl137mmol/L，KCl2.7mmol/L，Na2HPO44.3mmol/L，KH2PO41.4mmol/L2.向燒杯中加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至8.0，然后加入去離子水將溶液定容至1L。4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：上述PBSBuffer中無(wú)二價(jià)陽(yáng)離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。0.05mol/LPBS(磷酸緩沖液PhosphateBufferSolution，PBS)的配制：甲液：0.05mol/LNa2HPO4溶液：稱取磷酸氫二鈉9.465g7.099g,加蒸餾水至1000ml;乙液：0.05mol/LKH2P04溶液:稱取磷酸二氫鉀,9.07g6.803g,加蒸餾水至1000m1。將甲乙液分裝在棕色瓶?jī)?nèi)，于4℃pH甲液ml乙液mI5.292.597.55.595.095.05.9110.090.06.2420.080.06.4730.070.06.6440.060.06.8150.050.06.9860.040.07.1770.030.07.3880.020.07.7390.010.08.0495.05.0你要配制pH=6.8的PBS，可用甲、乙液各50ml混合即可。53種常見緩沖液配制方法乙醇－醋酸銨緩沖液(pH3.7)取5mol/L醋酸溶液15.0ml，加乙醇60ml和水20ml，用10mol/L氫氧化銨溶液調(diào)節(jié)pH值至3.7，用水稀釋至1000ml，即得。三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH8.0)取三羥甲基氨基甲烷12.14g，加水800ml，攪拌溶解，并稀釋至1000ml，用6mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至8.0，即得。三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH8.1)取氯化鈣0.294g，加0.2mol/L三羥甲基氨基甲烷溶液40ml使溶解，用1mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至8.1，加水稀釋至100ml，即得。三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH9.0)取三羥甲基氨基甲烷6.06g，加鹽酸賴氨酸3.65g、氯化鈉5.8g、乙二胺四醋酸二鈉0.37g，再加水溶解使成1000ml，調(diào)節(jié)pH值至9.0，即得。烏洛托品緩沖液取烏洛托品75g，加水溶解后，加濃氨溶液4.2ml，再用水稀釋至250ml，即得。巴比妥緩沖液(pH7.4)取巴比妥鈉4.42g，加水使溶解并稀釋至400ml，用2mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7.4，濾過，即得。巴比妥緩沖液(pH8.6)取巴比妥5.52g與巴比妥鈉30.9g，加水使溶解成2000ml，即得。巴比妥－氯化鈉緩沖液(pH7.8)取巴比妥鈉5.05g，加氯化鈉3.7g及水適量使溶解，另取明膠0.5g加水適量，加熱溶解后并入上述溶液中。然后用0.2mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7.8，再用水稀釋至500ml，即得。甲酸鈉緩沖液(pH3.3)取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氫氧化鈉溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml，用水稀釋至200ml，調(diào)節(jié)pH值至3.25～3.30，即得。鄰苯二甲酸鹽緩沖液(pH5.6)取鄰苯二甲酸氫鉀10g，加水900ml，攪拌使溶解，用氫氧化鈉試液(必要時(shí)用稀鹽酸)調(diào)節(jié)pH值至5.6，加水稀釋至1000ml，混勻，即得。枸櫞酸鹽緩沖液取枸櫞酸4.2g，加1mol/L的20％乙醇制氫氧化鈉溶液40ml使溶解，再用20％乙醇稀釋至100ml，即得。枸櫞酸鹽緩沖液(pH6.2)取2.1％枸櫞酸水溶液，用50％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.2，即得。枸櫞酸－磷酸氫二鈉緩沖液(pH4.0)甲液：取枸櫞酸21g或無(wú)水枸櫞酸19.2g，加水使溶解成1000ml，置冰箱內(nèi)保存。乙液：取磷酸氫二鈉71.63g，加水使溶解成1000ml。取上述甲液61.45ml與乙液38.55ml混合，搖勻，即得。氨－氯化銨緩沖液(pH8.0)取氯化銨1.07g，加水使溶解成100ml，再加稀氨溶液(1→30)調(diào)節(jié)pH值至8.0，即得。氨－氯化銨緩沖液(pH10.0)取氯化銨5.4g，加水20ml溶解后，加濃氯溶液35ml，再加水稀釋至100ml，即得。硼砂－氯化鈣緩沖液(pH8.0)取硼砂0.572g與氯化鈣2.94g，加水約800ml溶解后，用1mol/L鹽酸溶液約2.5ml調(diào)節(jié)pH值至8.0，加水稀釋至1000ml，即得。硼砂－碳酸鈉緩沖液(pH10.8～11.2)取無(wú)水碳酸鈉5.30g，加水使溶解成1000ml；另取硼砂1.91g，加水使溶解成100ml。臨用前取碳酸鈉溶液973ml與硼砂溶液27ml，混勻，即得。硼酸－氯化鉀緩沖液(pH9.0)取硼酸3.09g，加0.1mol/L氯化鉀溶液500ml使溶解，再加0.1mol/L氫氧化鈉溶液210ml，即得。醋酸鹽緩沖液(pH3.5)取醋酸銨25g，加水25ml溶解后，加7mol/L鹽酸溶液38ml，用2mol/L鹽酸溶液或5mol/L氨溶液準(zhǔn)確調(diào)節(jié)pH值至3.5(電位法指示)，用水稀釋至100ml，即得。醋酸－鋰鹽緩沖液(pH3.0)取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氫氧化鋰調(diào)節(jié)pH值至3.0，再加水稀釋至1000ml，即得。醋酸－醋酸鈉緩沖液(pH3.6)取醋酸鈉5.1g，加冰醋酸20ml，再加水稀釋至250ml，即得。醋酸－醋酸鈉緩沖液(pH3.7)取無(wú)水醋酸鈉20g，加水300ml溶解后，加溴酚藍(lán)指示液1ml及冰醋酸60～80ml，至溶液從藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)榧兙G色，再加水稀釋至1000ml，即得。醋酸－醋酸鈉緩沖液(pH3.8)取2mol/L醋酸鈉溶液13ml與2mol/L醋酸溶液87ml，加每1ml含銅1mg的硫酸銅溶液0.5ml，再加水稀釋至1000ml，即得。醋酸－醋酸鈉緩沖液(pH4.5)取醋酸鈉18g，加冰醋酸9.8ml，再加水稀釋至1000ml，即得。醋酸－醋酸鈉緩沖液(pH4.6)取醋酸鈉5.4g，加水50ml使溶解，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至4.6，再加水稀釋至100ml，即得。醋酸－醋酸鈉緩沖液(pH6.0)取醋酸鈉54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀釋至500ml，即得。醋酸－醋酸鉀緩沖液(pH4.3)取醋酸鉀14g，加冰醋酸20.5ml，再加水稀釋至1000ml，即得。醋酸－醋酸銨緩沖液(pH4.5)取醋酸銨7.7g，加水50ml溶解后，加冰醋酸6ml與適量的水使成100ml，即得。醋酸－醋酸銨緩沖液(pH6.0)取醋酸銨100g，加水300ml使溶解，加冰醋酸7ml，搖勻，即得。磷酸－三乙胺緩沖液取磷酸約4ml與三乙胺約7ml，加50％甲醇稀釋至1000ml，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.2，即得。磷酸鹽緩沖液取磷酸二氫鈉38.0g，與磷酸氫二鈉5.04g，加水使成1000ml，即得。磷酸鹽緩沖液(pH2.0)甲液:取磷酸16.6ml，加水至1000ml，搖勻。乙液：取磷酸氫二鈉71.63g，加水使溶解成1000ml。取上述甲液72.5ml與乙液27.5ml混合，搖勻，即得。磷酸鹽緩沖液(pH2.5)取磷酸二氫鉀100g，加水800ml，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至2.5，用水稀釋至1000ml。磷酸鹽緩沖液(pH5.0)取0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液一定量，用氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)pH值至5.0，即得。磷酸鹽緩沖液(pH5.8)取磷酸二氫鉀8.34g與磷酸氫二鉀0.87g，加水使溶解成1000ml，即得。磷酸鹽緩沖液(pH6.5)取磷酸二氫鉀0.68g，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液15.2ml，用水稀釋至100ml，即得。磷酸鹽緩沖液(pH6.6)取磷酸二氫鈉1.74g、磷酸氫二鈉2.7g與氯化鈉1.7g，加水使溶解成40