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第4節(jié)蛋白質(zhì)工程的原理和應(yīng)用第三章
基因工程復(fù)習(xí)——基因工程的應(yīng)用基因工程已經(jīng)取得了一系列的成功,為什么還要進(jìn)行蛋白質(zhì)工程的研究?基因工程實(shí)質(zhì)將一種生物的基因轉(zhuǎn)移到另一種生物的體內(nèi),后者可以產(chǎn)生它本不能產(chǎn)生的蛋白質(zhì),進(jìn)而表現(xiàn)出新性狀。局限性基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)。天然蛋白質(zhì)是生物在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中形成的,它們的結(jié)構(gòu)和功能符合特定物種生存的需要,卻不一定完全符合人類生產(chǎn)和生活的需要。天然蛋白質(zhì)的缺陷基因工程實(shí)質(zhì)將一種生物的基因轉(zhuǎn)移到另一種生物的體內(nèi),后者可以產(chǎn)生它本不能產(chǎn)生的蛋白質(zhì),進(jìn)而表現(xiàn)出新性狀。局限性基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)。天然蛋白質(zhì)是生物在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中形成的,它們的結(jié)構(gòu)和功能符合特定物種生存的需要,卻不一定完全符合人類生產(chǎn)和生活的需要。天然蛋白質(zhì)的缺陷某種微生物合成的蛋白酶與人體消化液中的蛋白酶結(jié)構(gòu)與功能相似,可以將其制成藥片治療消化不良,但該酶的熱穩(wěn)定差,進(jìn)入人體后容易失效蛋白質(zhì)工程蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ),通過(guò)改造或合成基因,來(lái)改造現(xiàn)有蛋白質(zhì),或制造一種新的蛋白質(zhì),以滿足人類生產(chǎn)和生活的需求。(1)基礎(chǔ):蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系(2)操作:改造或合成基因(3)操作對(duì)象:基因(4)目的:改造現(xiàn)有蛋白質(zhì)或制造一種新的蛋白質(zhì),以滿足人類生產(chǎn)和生活的需求(5)地位:在基因工程基礎(chǔ)上延伸出來(lái)的第二代基因工程(6)理論和技術(shù):分子生物學(xué)、晶體學(xué)和計(jì)算機(jī)技術(shù)蛋白質(zhì)工程的實(shí)質(zhì)天然蛋白質(zhì)的合成過(guò)程天然蛋白質(zhì)的合成是按照
進(jìn)行的DNA轉(zhuǎn)錄mRNA翻譯肽鏈盤曲折疊具有空間結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)表達(dá)生物特有的功能或性狀蛋白質(zhì)只有具有一定空間結(jié)構(gòu),才能表達(dá)特有性狀或具有特定功能。中心法則中心法則包括DNA和RNA的自我復(fù)制,轉(zhuǎn)錄、逆轉(zhuǎn)錄和翻譯蛋白質(zhì)工程的基本思路——中心法則的逆推蛋白質(zhì)(三維結(jié)構(gòu))預(yù)期功能生物功能翻譯折疊行使轉(zhuǎn)錄設(shè)計(jì)推測(cè)改造或合成mRNA目的基因預(yù)期功能推測(cè)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)氨基酸序列mRNA設(shè)計(jì)推測(cè)查密碼子表丙氨酸色氨酸賴氨酸谷氨酸苯丙氨酸……蛋白質(zhì)工程的基本思路——中心法則的逆推密碼子的簡(jiǎn)并性蛋白質(zhì)工程的基本思路——中心法則的逆推……-丙氨酸-色氨酸-賴氨酸-谷氨酸-苯丙氨酸-……氨基酸序列:GCU(或C或A或G)UGGAAA(或G)GAA(或G)UUU(或C)mRNA序列:GCT(或C或A或G)TGGAAA(或G)GAA(或G)TTT(或C)CGA(或G或T或C)ACCTTT(或C)CTT(或C)AAA(或G)DNA序列:查密碼子表根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則蛋白質(zhì)工程的基本思路——中心法則的逆推蛋白質(zhì)(三維結(jié)構(gòu))預(yù)期功能生物功能翻譯折疊行使轉(zhuǎn)錄設(shè)計(jì)推測(cè)改造或合成mRNA目的基因預(yù)期功能生物功能推測(cè)翻譯折疊轉(zhuǎn)錄基因DNA蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)氨基酸序列mRNA設(shè)計(jì)行使推測(cè)①化學(xué)方法人工合成②應(yīng)用基因定點(diǎn)突變技術(shù)來(lái)進(jìn)行堿基的替換、增添改造或合成蛋白質(zhì)工程的基本思路思考1:為什么要通過(guò)改造基因來(lái)完成蛋白質(zhì)的改造,而不是直接對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行改造?①蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜,直接改造難度大氨基酸之間脫水縮合形成肽鏈一條肽鏈的特定區(qū)域進(jìn)行有規(guī)律的盤曲折疊這條肽鏈進(jìn)一步盤曲折疊形成了一定的空間結(jié)構(gòu)四條肽鏈聚集在一起形成復(fù)雜的空間結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)工程的基本思路思考1:為什么要通過(guò)改造基因來(lái)完成蛋白質(zhì)的改造,而不是直接對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行改造?①蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜,直接改造難度大②蛋白質(zhì)是由基因編碼的,改造了基因可以間接改造蛋白質(zhì)③基因可以遺傳,蛋白質(zhì)無(wú)法遺傳蛋白質(zhì)工程的基本思路思考1:為什么要通過(guò)改造基因來(lái)完成蛋白質(zhì)的改造,而不是直接對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行改造?①蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜,直接改造難度大②蛋白質(zhì)是由基因編碼的,改造了基因可以間接改造蛋白質(zhì)③基因可以遺傳,蛋白質(zhì)無(wú)法遺傳思考2:基因工程中的目的基因與蛋白質(zhì)工程中的目的基因有何區(qū)別?基因工程的目的基因一般是天然存在的,而蛋白質(zhì)工程中的目的基因不是天然存在的蛋白質(zhì)工程vs基因工程項(xiàng)目蛋白質(zhì)工程基因工程操作對(duì)象操作起點(diǎn)操作水平操作流程結(jié)果實(shí)質(zhì)聯(lián)系基因基因DNA分子水平DNA分子水平預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)氨基酸序列→找到并改變對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因)或合成新基因→獲得所需要的蛋白質(zhì)目的基因的篩選與獲取→構(gòu)建基因表達(dá)載體→將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞→目的基因的檢測(cè)與鑒定可生產(chǎn)自然界沒(méi)有的蛋白質(zhì)生產(chǎn)自然界已有的蛋白質(zhì)通過(guò)改造或合成基因來(lái)定向改造現(xiàn)有蛋白質(zhì)或制造新的蛋白質(zhì)將一種生物的基因轉(zhuǎn)移到另一種生物體內(nèi),后者可以產(chǎn)生它本不能產(chǎn)生的蛋白質(zhì),進(jìn)而表現(xiàn)出新的性狀①蛋白質(zhì)工程是在基因工程基礎(chǔ)上延伸出來(lái)的第二代基因工程;②蛋白質(zhì)工程離不開基因工程,其包含基因工程的基本操作。預(yù)期蛋白質(zhì)功能目的基因蛋白質(zhì)工程vs基因工程思考3:如何辨別一個(gè)操作是基因工程還是蛋白質(zhì)工程?是否改造原有基因或合成新的基因看蛋白質(zhì)看基因是否為天然蛋白質(zhì)是否蛋白質(zhì)工程基因工程是否蛋白質(zhì)工程基因工程蛋白質(zhì)工程vs基因工程下列表述中,屬于蛋白質(zhì)工程的是__________①通過(guò)對(duì)胰島素基因的改造,有效抑制了胰島素的聚合②將干擾素分子上的一個(gè)半胱氨酸變成絲氨酸,在一定條件下,可以延遲保存時(shí)間③利用大腸桿菌來(lái)生產(chǎn)人的胰島素④將小鼠抗體上結(jié)合抗原的區(qū)域與人的抗體進(jìn)行“嫁接”⑤利用植物細(xì)胞來(lái)生產(chǎn)藥物⑥通過(guò)改造參與調(diào)控光合作用的酶,來(lái)提高植物光合作用的效率⑦生產(chǎn)單克隆抗體①②④⑥蛋白質(zhì)工程的應(yīng)用——醫(yī)藥天然蛋白質(zhì)易形成二聚體或六聚體預(yù)期結(jié)構(gòu)改造B28位脯氨酸替換為天冬氨酸或?qū)⑺cB29位的賴氨酸交換位置新胰島素基因轉(zhuǎn)錄mRNA折疊預(yù)期功能行使功能降低胰島素的聚合作用設(shè)計(jì)結(jié)構(gòu)改變B鏈第20~29位氨基酸組成推測(cè)序列翻譯多肽鏈有效抑制胰島素的聚合(1)研發(fā)速效胰島素類似物蛋白質(zhì)工程的應(yīng)用——醫(yī)藥天然干擾素不易保存預(yù)期結(jié)構(gòu)改造一個(gè)半胱氨酸變成絲氨酸新干擾素基因轉(zhuǎn)錄mRNA折疊預(yù)期功能行使功能延長(zhǎng)保存時(shí)間設(shè)計(jì)結(jié)構(gòu)氨基酸替換推測(cè)序列翻譯多肽鏈在-70℃下可以保存半年(2)延長(zhǎng)干擾素體外保存時(shí)間蛋白質(zhì)工程的應(yīng)用——醫(yī)藥(3)降低人對(duì)小鼠單抗隆抗體的免疫反應(yīng)通過(guò)改造基因,將小鼠抗體上結(jié)合抗原的區(qū)域(即可變區(qū))“嫁接”到人的抗體(即恒定區(qū))上,經(jīng)過(guò)這樣改造的抗體誘發(fā)免疫反應(yīng)的強(qiáng)度就會(huì)減低很多。蛋白質(zhì)工程的應(yīng)用用于改進(jìn)酶的性能或開發(fā)新的工業(yè)用酶,如利用蛋白質(zhì)工程獲得枯草桿菌蛋白酶的突變體,篩選出符合工業(yè)化生產(chǎn)需求的突變體,提高該酶的使用價(jià)值(1)改造某些參與調(diào)控光合作用的酶,以提高植物光合作用的速率,增加糧食的產(chǎn)量。(2)利用蛋白質(zhì)工程的思路設(shè)計(jì)優(yōu)良微生物農(nóng)藥,通過(guò)改造微生物蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),使它防治病蟲害的效果增強(qiáng)。工業(yè)方面農(nóng)業(yè)方面總結(jié)一、蛋白質(zhì)工程崛起的緣由:基因工程原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)。二、蛋白質(zhì)工程的基本原理:預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)氨基酸序列→找到并改變對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因)或合成新基因→獲得所需要的蛋白質(zhì)三、蛋白質(zhì)工程的應(yīng)用練習(xí)例1
下圖表示蛋白質(zhì)工程的操作過(guò)程,相關(guān)敘述<zzd>錯(cuò)誤</zzd>的是(
)。A.蛋白質(zhì)工程是以基因工程為基礎(chǔ)的生物工程技術(shù)B.蛋白質(zhì)工程需要改變蛋白質(zhì)分子的所有氨基酸序列C.蛋白質(zhì)工程中對(duì)蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)的了解是非常關(guān)鍵的工作D.蛋白質(zhì)工程可以改造現(xiàn)有蛋白質(zhì)或制造一種新的蛋白質(zhì)B練習(xí)對(duì)點(diǎn)練1
下列關(guān)于蛋白質(zhì)工程的說(shuō)法,<zzd>錯(cuò)誤</zzd>的是(
)。A.蛋白質(zhì)工程能定向改造蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu),使之更加符合人類需要B.蛋白質(zhì)工程是在分子水平上對(duì)蛋白質(zhì)分子直接進(jìn)行操作的C.蛋白質(zhì)工程能產(chǎn)生自然界中不曾存在的新型蛋白質(zhì)分子D.蛋白質(zhì)工程需要從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā),從而設(shè)計(jì)出相應(yīng)的基因B練習(xí)例2
下列關(guān)于蛋白質(zhì)工程應(yīng)用的敘述,<zzd>不正確</zzd>的是(
)。A.蛋白質(zhì)工程實(shí)施中最大的難題是對(duì)大多數(shù)蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)不清楚B.將人的胰島素基因?qū)氪竽c桿菌細(xì)胞內(nèi),使大腸桿菌產(chǎn)生人的胰島素的技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程C.蛋白質(zhì)工程可以改變蛋白質(zhì)的活性,實(shí)質(zhì)是通過(guò)基因改造或基因合成來(lái)實(shí)現(xiàn)的D.蛋白質(zhì)工程可以對(duì)胰島素進(jìn)行改造和修飾,合成速效型胰島素制劑B練習(xí)胰島素可以用于治療糖尿病,但是胰島素被注射到人體中后,會(huì)堆積在皮下,要經(jīng)過(guò)較長(zhǎng)的時(shí)間才能進(jìn)入血液,而進(jìn)入血液的胰島素又容易被分解,因此,治療效果受到影響。下圖表示用蛋白質(zhì)工程設(shè)計(jì)速效胰島素的生產(chǎn)過(guò)程,據(jù)圖回答下列問(wèn)題:(1)蛋白質(zhì)工程的目標(biāo)是根據(jù)人們對(duì)____________的特定需求,對(duì)蛋白質(zhì)的______進(jìn)行設(shè)計(jì)改造。蛋白質(zhì)功能結(jié)構(gòu)練習(xí)(2)人工合成的新的胰島素基因在導(dǎo)入受體細(xì)胞前要先構(gòu)建______________,其目的是使目的基因在__________中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳給下一代,同時(shí)使目的基因能夠________________。在這個(gè)過(guò)程中需要__________________酶的參與。成熟的基因表達(dá)載體除了含有新的胰島素基因外,還必須有啟動(dòng)子、終止子以及__________________等?;虮磉_(dá)載體受體細(xì)胞
表達(dá)和發(fā)揮作用限制酶和DNA連接標(biāo)記基因、復(fù)制原點(diǎn)(3)在將基因表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌時(shí),一般要用___________
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