微生物基礎(chǔ)知識和GMP衛(wèi)生管理

微生物基礎(chǔ)知識和GMP衛(wèi)生管理培訓(xùn)是為了共同提高

第一部分：微生物基礎(chǔ)知識第二部分：GMP與微生物第三部分：衛(wèi)生管理目錄微生物（microorganism）：是存在于自然界的一大群體形微小、結(jié)構(gòu)簡單、肉眼直接看不見，必須借助光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡放大數(shù)百倍、數(shù)千倍，甚至數(shù)萬倍才能觀察到的微小生物。特點：

1）種類多、分布廣

2）個體小、面積大

3）吸收多、轉(zhuǎn)化快

4）適應(yīng)強、異變異第一部分微生物基礎(chǔ)知識肺炎鏈球菌細(xì)菌的形態(tài)

微生物特點種類多、分布廣微生物在地球上幾乎無處不有，無孔不入，人的皮膚上，口腔，腸道里都有許多微生物。微生物聚集最多的地方是土壤，哪里塵埃多，哪里的微生物就多。迄今為止，我們知道的微生物約有10萬種，目前已知的種類只占地球上實際存在的微生物總數(shù)的20%，人類生產(chǎn)和生活中僅開發(fā)利用了已發(fā)現(xiàn)微生物種數(shù)的1%。個體小、面積大生物的個體極其微小，必須借助顯微鏡放大幾倍、幾百倍、上千倍，乃至數(shù)萬倍才能看清。桿菌的寬度是0.5微米，因此80個桿菌“肩并肩”地排列成橫隊，也只有一根頭發(fā)絲的寬度。桿菌的長度約2微米，故1500個桿菌頭尾銜接起來僅有一顆芝麻長。物體的表面積和體積之比稱為比表面積。大腸桿菌的比表面積是人的30萬倍。吸收多、轉(zhuǎn)化快微生物有驚人的繁殖速度，大多數(shù)微生物幾十分鐘內(nèi)就可以繁殖一代，如細(xì)菌一般每20~30分鐘既可分裂一次；微生物的食譜非常廣泛，凡是動植物能利用的營養(yǎng)，微生物都能利用，大量的動植物不能利用的物質(zhì)，甚至劇毒的物質(zhì)，微生物照樣可以視為美味佳肴。如大腸桿菌在合適條件下，每小時可以消耗相當(dāng)于自身重量2000倍的糖，而人體則需要40年之久。

適應(yīng)強、異變異多數(shù)細(xì)菌能耐0～－196℃的低溫；在海洋深處的某些硫細(xì)菌可在250～300℃的高溫條件下正常生長；一些嗜鹽細(xì)菌甚至能在飽和鹽水中正常生活；產(chǎn)芽孢細(xì)菌和真菌孢子在干燥條件下能保藏幾十年、幾百年。由于微生物繁殖快，也可在短時間內(nèi)產(chǎn)生大量變異的后代。正是由于這個特性，人們才能夠按照自己的要求不斷改良在生產(chǎn)上應(yīng)用的微生物，如青霉素生產(chǎn)菌的發(fā)酵水平由每毫升20單位上升到近10萬單位，利用變異和育種得到如此大幅度的產(chǎn)量提高。

微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu)

微生物按其結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及生活習(xí)性等分為三大類：原核細(xì)胞型：細(xì)菌、放線菌、支原體、衣原體、立克次氏體、螺旋體等真核細(xì)胞型：真菌非細(xì)胞型：病毒噬菌體

微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu)桿菌(bacillus)不同桿菌的大小、長短、粗細(xì)很不一致。炭疽芽胞桿菌3-10μm大中大腸埃希菌2-3μm小布魯菌0.6-1.5μm微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu)螺形菌(spiralbacterium)弧菌螺菌螺桿菌微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu)

1、細(xì)菌

細(xì)菌是一類細(xì)胞細(xì)而短、結(jié)構(gòu)簡單、細(xì)胞壁堅韌，以二等分裂方式繁殖的原核微生物，分布廣泛。細(xì)菌的繁殖

二分分裂繁殖是細(xì)菌最普遍、最主要的繁殖方式。在分裂前先延長菌體，染色體復(fù)制為二，然后垂直于長軸分裂，細(xì)胞赤道附近的細(xì)胞質(zhì)膜凹陷生長，直至形成橫隔膜，同時形成橫隔壁，這樣便產(chǎn)生兩個子細(xì)胞。<==細(xì)菌細(xì)胞分裂的電鏡超薄切片圖桿菌二分裂過程模式圖細(xì)菌的菌落

單個或少數(shù)細(xì)菌細(xì)胞生長繁殖后，會形成以母細(xì)胞為中心的一堆肉眼可見、有一定形態(tài)構(gòu)造的子細(xì)胞集團，這就是菌落。細(xì)菌菌落常表現(xiàn)為濕潤、粘稠、光滑、較透明、易挑取、質(zhì)地均勻以及菌落正反面或邊緣與中央部位顏色一致等。細(xì)菌的菌落特征因種而異。可作為鑒定細(xì)菌種的依據(jù)。

粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征

沙門氏菌的菌落特征銅綠假單孢菌的菌落特征

弗氏志賀氏菌的菌落特征粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征

2、霉菌

霉菌是絲狀真菌的俗稱，意即"發(fā)霉的真菌"，它們往往能形成分枝繁茂的菌絲體，但又不象蘑菇那樣產(chǎn)生大型的子實體。在潮濕溫暖的地方，很多物品上長出一些肉眼可見的絨毛狀、絮狀或蛛網(wǎng)狀的菌落，那就是霉菌。霉菌的形態(tài)、大小和結(jié)構(gòu)

霉菌的菌絲是構(gòu)成霉菌營養(yǎng)體的基本單位。菌絲是一種管狀的細(xì)絲，把它放在顯微鏡下觀察，很像一根透明膠管，它的直徑一般為3-10微米，比細(xì)菌和放線菌的細(xì)胞約粗幾倍到幾十倍。菌絲可伸長并產(chǎn)生分枝，許多分枝的菌絲相互交織在一起，就叫菌絲體。霉菌的菌絲霉菌的菌落

由于霉菌的菌絲較粗而長，因而霉菌的菌落較大，有的霉菌的菌絲蔓延，沒有局限性，其菌落可擴展到整個培養(yǎng)皿，有的種則有一定的局限性，直徑1-2厘米或更小。菌落質(zhì)地一般比放線菌疏松，外觀干燥，不透明，呈現(xiàn)或緊或松的蛛網(wǎng)狀、絨毛狀或棉絮狀；菌落與培養(yǎng)基的連接緊密，不易挑??；菌落正反面的顏色和邊緣與中心的顏色常不一致。

霉菌的繁殖有性繁殖和無性繁殖兩種以無性繁殖為主

各種曲霉的菌落

酵母菌的形態(tài)、大小和結(jié)構(gòu)

酵母菌是單細(xì)胞真核微生物。酵母菌細(xì)胞的形態(tài)通常有球形、卵圓形、臘腸形、橢圓形、檸檬形或藕節(jié)形等。比細(xì)菌的單細(xì)胞個體要大得多，一般為1-5微米×5-30微米。酵母菌無鞭毛，不能游動。酵母菌具有典型的真核細(xì)胞結(jié)構(gòu),有細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)、液泡、線粒體等，有的還具有微體。

酵母菌的繁殖

1、芽殖

2、裂殖

3、孢子生殖酵母菌的菌落大多數(shù)酵母菌的菌落特征與細(xì)菌相似，但比細(xì)菌菌落大而厚，菌落表面光滑、濕潤、粘稠，容易挑起，菌落質(zhì)地均勻，正反面和邊緣、中央部位的顏色都很均一，菌落多為乳白色，少數(shù)為紅色，個別為黑色。

各種酵母菌的菌落

啤酒酵母的菌落

紅酵母的菌落

微生物的營養(yǎng)水分：水占細(xì)胞漿的70%～90%，是細(xì)胞的重要組成成分。較普遍的觀點認(rèn)為，只有在含水的環(huán)境中微生物才能存活。但也有人發(fā)現(xiàn)在無水碳?xì)浠衔镏形⑸锟砷L期存活。碳源：碳源是構(gòu)成細(xì)胞的重要物質(zhì)。有些微生物的碳源必須來自有機碳化合物如糖、蛋白質(zhì)、脂肪、有機酸等（同時利用其化學(xué)能），屬異養(yǎng)型；有些微生物不需有機碳化合物，以CO2為碳源，屬自養(yǎng)型（分為光能自養(yǎng)型和化能自養(yǎng)型）。氮源：氮是組成蛋白質(zhì)和核酸的重要元素。無機鹽類：細(xì)菌所需無機鹽包括磷、硫、鎂、鐵、鉀、鈉、鈣、氯、錳、鋅、鈷、銅等。其中磷、硫、鎂、鉀、鈉、鐵需要量較多，其他只需微量。生長因子：生長因子是某些微生物生長發(fā)育所必需，而其自身又不能合成的一類營養(yǎng)物質(zhì)。包括維生素、嘌呤和嘧啶。

微生物生長的影響因素1、營養(yǎng)物2、PH值3、溫度4、氧氣5、滲透壓6、表面張力其他因素：

溫度氧氣

光照水份等

推行GMP目的：防止污染、交叉污染、混藥、差錯。污染：當(dāng)一個產(chǎn)品存在有不需要的物質(zhì)時，它即受到污染。交叉污染：不同原料、輔料及產(chǎn)品之間發(fā)生的相互污染。污染的形式：塵粒污染、微生物污染。微生物污染：因微生物產(chǎn)生、附著而給特定的環(huán)境帶來的不良影響。如果細(xì)菌得到了必要的養(yǎng)料、一定量的水份和合適的溫度，它們就能迅速繁殖，它們繁殖的速度快得驚人。通常一個細(xì)菌在僅僅2小時后可產(chǎn)生出281兆(百萬)個的細(xì)菌。

傳播污染的四大媒介：空氣、水、表面、人

第二部分GMP與微生物傳播污染的第一幫兇就是空氣，空氣攜帶著敵人來污染藥品。每立方米的空氣中至少含有60萬顆塵粒，同時還存在著大量的微生物，在這樣的空氣條件下進(jìn)行生產(chǎn)，肯定會污染藥品。因此，要杜絕帶有大量塵埃微粒和微生物的空氣污染藥品的辦法是對空氣采取過濾的措施，把隱藏在空氣中的敵人通通過濾掉，使空氣質(zhì)量達(dá)到我們的要求。這就是要建立密閉廠房和空氣凈化系統(tǒng)的原因。對空氣處理，只過濾了塵粒，但還有大量微生物存在空氣中，所以采取對空氣消毒的措施來消滅微生物，例如：臭氧消毒的方式等殺死微生物。但是常使用一種消毒劑會使微生物產(chǎn)生耐藥性，因此，在使用消毒劑時，必須定期交替使用。GMP與微生物傳播污染的四大媒介－空氣第二個幫兇是水，從理論上來講，微生物在純水中是不能生長的。但是，所有的各類水，不管怎樣仔細(xì)地蒸溜或過濾，總會含有一定量的可溶性有機物和鹽類。正是這些可溶性的物質(zhì)可被微生物利用作為它們生長的養(yǎng)料源泉。水是我們藥品生產(chǎn)不可缺少的要素之一，不只是用于生產(chǎn)中，還用于設(shè)施、設(shè)備清洗中。當(dāng)帶有大量塵埃粒子和微生物的水用于生產(chǎn)或清洗設(shè)施、設(shè)備時，就轉(zhuǎn)移到藥品上面，污染了藥品。因此，我們直接用于藥品生產(chǎn)的水必須經(jīng)過處理，以防止敵人通過水來污染產(chǎn)品。GMP與微生物傳播污染的四大媒介－水

第三個幫兇是表面，包括：天花板、墻壁、地面、設(shè)備、容器、工具、桌子；由于空氣中的濕度，所有表面都包上一層含水的薄膜。這層薄膜由于靜電吸引而飽含塵埃微粒，有很多時候，表面還覆蓋一層油狀物質(zhì)，此層油膜易受到塵粒污染。表面因塵埃微粒和微生物由空氣傳播的回降而受到污染。請記?。阂粋€表面看起來很干凈，而實際上已經(jīng)被千百萬個微生物所污染，除非已經(jīng)做了正確的消毒滅菌。第四個幫兇可能是大家都不會想到的，它就是我們自己，人體是一個永不休止的污染媒介。當(dāng)你每天來上班時，也許隨身將幾百萬細(xì)菌帶入工作場地。GMP與微生物傳播污染的四大媒介－表面、人GMP與微生物人體中的微生物人自出生后，外界的微生物就逐漸進(jìn)入人體。在正常人體皮膚、粘膜及外界相通的各種腔道（如口腔、鼻咽腔、腸道和泌尿道）等部位，存在著對人體無害的微生物群，包括細(xì)菌、真菌、螺旋體、支原體等，稱為正常菌群。能使宿主致病的為致病菌或病原菌，不能造成宿主感染的為非致病菌或非病原菌。有些細(xì)菌在正常情況下并不致病，但當(dāng)在某些條件改變的特殊情況下可以致病，這類菌稱為條件致病菌或機會致病菌人的頭發(fā)和皮膚：每分鐘從人類皮膚中要散發(fā)出約10,000個微生物嘴巴和鼻子——水滴：呼吸、咳嗽和噴嚏將產(chǎn)生出大量水滴，這種水滴既含有塵粒污染也含有微生物污染?？人砸淮蔚陌l(fā)菌量為70～700個(min·人)，噴嚏一次的發(fā)菌量為4000～60000個(min·人)。衣著：潔凈室內(nèi)當(dāng)工作人員穿無菌服，靜止時的發(fā)菌量為10～300個(min·人)，軀體一般活動時的發(fā)菌量為150～1000個(min·人)，快步行走時的發(fā)菌量為900～2500個(min·人)。化妝品和珠寶手飾：發(fā)膠、氣霧除臭劑、眼臉膏、香粉等，為微生物污染提供了極好的源泉。耳環(huán)、戒指、項鏈、手鏈等首飾，因為它們難于清洗，所以可能成為感染源或污染源。

生產(chǎn)過程中的人為差錯：當(dāng)員工沒有按照SOP進(jìn)行工作時，促使污染程度增加。GMP與微生物人員污染的途徑和方式由于藥品的特殊性，衛(wèi)生管理不善，很容易造成污染。藥品污染后，質(zhì)量會發(fā)生變化，這是GMP要防止的核心。因此，衛(wèi)生管理在藥品生產(chǎn)中的重要性是不言而喻的。第三部分衛(wèi)生管理生產(chǎn)區(qū)環(huán)境衛(wèi)生要求潔凈區(qū)的設(shè)計必須符合相應(yīng)的潔凈度要求，包括達(dá)到“靜態(tài)”和“動態(tài)”的標(biāo)準(zhǔn)。無菌藥品生產(chǎn)所需的潔凈區(qū)可分為以下4個級別：A級：高風(fēng)險操作區(qū)，如灌裝區(qū)、放置膠塞桶和與無菌制劑直接接觸的敞口包裝容器的區(qū)域及無菌裝配或連接操作的區(qū)域，應(yīng)當(dāng)用單向流操作臺（罩）維持該區(qū)的環(huán)境狀態(tài)。單向流系統(tǒng)在其工作區(qū)域必須均勻送風(fēng)，風(fēng)速為0.36-0.54m/s（指導(dǎo)值）。應(yīng)當(dāng)有數(shù)據(jù)證明單向流的狀態(tài)并經(jīng)過驗證。在密閉的隔離操作器或手套箱內(nèi)，可使用較低的風(fēng)速。B級：指無菌配制和灌裝等高風(fēng)險操作A級潔凈區(qū)所處的背景區(qū)域。C級和D級：指無菌藥品生產(chǎn)過程中重要程度較低操作步驟的潔凈區(qū)。第三部分衛(wèi)生管理以上各級別空氣懸浮粒子的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定如下表：第三部分衛(wèi)生管理應(yīng)當(dāng)對微生物進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測，評估無菌生產(chǎn)的微生物狀況。監(jiān)測方法有沉降菌法、定量空氣浮游菌采樣法和表面取樣法（如棉簽擦拭法和接觸碟法）等。動態(tài)取樣應(yīng)當(dāng)避免對潔凈區(qū)造成不良影響。成品批記錄的審核應(yīng)當(dāng)包括環(huán)境監(jiān)測的結(jié)果。對表面和操作人員的監(jiān)測，應(yīng)當(dāng)在關(guān)鍵操作完成后進(jìn)行。在正常的生產(chǎn)操作監(jiān)測外，可在系統(tǒng)驗證、清潔或消毒等操作完成后增加微生物監(jiān)測。第三部分衛(wèi)生管理潔凈區(qū)微生物監(jiān)測的動態(tài)標(biāo)準(zhǔn)如下：第三部分衛(wèi)生管理物料衛(wèi)生管理：符合要求的物料是生產(chǎn)合格產(chǎn)品的前提，因此用于生產(chǎn)的物料必須是符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的。一方面我們所使用的物料必須經(jīng)檢驗合格，最重要的另一方面必須保證物料在使用的過程中不得受到污染。切記：（1）進(jìn)入潔凈區(qū)的物料必須對其外包裝處理。（2）流轉(zhuǎn)過程的物料必須密閉。（3）盛裝物料的容器具必須是經(jīng)過消毒的。設(shè)備衛(wèi)生管理：除了對設(shè)備保養(yǎng)外，更重要的目的是防止交叉污染。因此，每次使用完或使用前都要對設(shè)備進(jìn)行清潔，確保產(chǎn)品符合標(biāo)準(zhǔn)。一清除清除文件、器具和殘余物料。二清潔用純化水進(jìn)行沖洗。三消毒對需要用消毒液對設(shè)備消毒的進(jìn)行消毒。第三部分衛(wèi)生管理生產(chǎn)現(xiàn)場衛(wèi)生管理：案例：我們所用的物料微生物指標(biāo)均符合要求，可生產(chǎn)出來的成品的微生物指標(biāo)檢測卻不符合要求，這就是未做好生產(chǎn)現(xiàn)場衛(wèi)生管理的直接體現(xiàn)。（1）生產(chǎn)前注意上批清場是否在有效期內(nèi)，超過有效期應(yīng)重新清場且符合要求。（2）生產(chǎn)過程中隨時保持現(xiàn)場的衛(wèi)生工作，不得出現(xiàn)臟、亂、差的場面，物料、設(shè)備應(yīng)符合上述要求。人員衛(wèi)生管理：要養(yǎng)成良好的衛(wèi)生習(xí)慣，做到勤洗澡、勤洗手、勤刮胡子、勤剪指甲、勤換衣。切記：手是我們工作時使用的最重要的工具之一，只要觸摸到污染的東西，微生物就會留在你手上或指甲里，因此手是最大的細(xì)菌傳播工具和途徑。在藥品生產(chǎn)時必須保持手的清潔。第三部分衛(wèi)生管理在凈化室工作，必須遵守潔凈室內(nèi)每一個細(xì)節(jié)的工作規(guī)范不允許將任何有害的物質(zhì)帶入潔凈室；避免污染帶給產(chǎn)品可能的嚴(yán)重?fù)p害；人員的清潔和衛(wèi)生是很重要的；進(jìn)入潔凈室必須卸妝；工作服帽子大小要合適，必須遮蓋所有頭發(fā)，以防止皮膚碎片及頭發(fā)屑污染；不得將手表及首飾帶入潔凈室；戴口罩是控制來自口腔污染的有效方法之一；潔凈工作服不得接觸地面；穿潔凈鞋或鞋套時，腳不得接觸地面；進(jìn)入潔凈室要正確著裝。第三部分衛(wèi)生管理正確的更衣要求：1.接觸物品前應(yīng)對手（手套）消毒2.工作時，不要觸摸口罩3.揉鼻子盡量少，并更換手套和口罩4.操作時，不是必須坐著的工作，盡量站著5.不要在層流下面的工作臺上休息6.休息時，站著，手臂順著身體下垂，不要把兩臂交叉，也不要放在臀部7.休息時，坐著，雙手放在膝蓋上，不要交叉雙手或雙腳8.工作中必要時才講話。第三部分衛(wèi)生管理在潔凈區(qū)內(nèi)工作的要求：潔凈室清場順序及注意事項：天花板、墻壁、與墻壁連接的物體、管道、臺面、設(shè)備、地面。先上后下、先里后外、先清洗、再清潔、后消毒，不要在清潔過的地面上走動。潔凈室的清潔方法：1.真空吸塵：僅對大粒子有效2.干擦：干擦可能脫落粒子，通常僅用于擦干潮濕表面3.濕擦：這是大多數(shù)的除污及清潔的方法。消毒：用于消滅多種微生物，使其數(shù)量減少到可接受的水平。常用：

甲醛、臭氧、乙醇、新潔爾滅。滅菌：殺滅所有微生物。121℃30min，115℃30min。第三部分衛(wèi)生管理消毒與滅菌消毒與滅菌是微生物實驗技術(shù)中最基本的操作，從事藥品生產(chǎn)和檢驗的人員都應(yīng)當(dāng)了解消毒與滅菌的方法及其意義，嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，否則會影響產(chǎn)品質(zhì)量，危害患者安全。對生產(chǎn)的企業(yè)

關(guān)鍵！??！Disinfection消毒與滅菌殺死物體上病原微生物的方法,并不一定能殺死含芽胞的細(xì)菌或非病原微生物殺滅物體上所有微生物的方法。不存在活菌的意思。

防止或抑制體外細(xì)菌生長繁殖的方法。消毒：滅菌：無菌：防腐：AsepsisSterilizationAntisepsis常用消毒劑①70%~75%乙醇水溶液；②0.5%洗必泰溶于70%乙醇，再加入2%甘油，用于皮膚、器具等消毒；③異丙醇75%水溶液，用于皮膚、器具等消毒；④甲醛37%~40%甲醛液8~9ml，再加入4~5g高錳酸鉀，每m3熏蒸量，密閉12~24h，刺激性強；⑤戊二醛2%水溶液，用于空氣、器具等消毒。廣譜、高效、低毒，可殺芽孢和病毒，毒性較輕；⑥新潔爾滅（苯扎溴銨）0.1%水溶液，用于皮膚、粘膜、器具等消毒，有清潔和消毒雙重功效，抗菌譜較窄；⑦杜滅芬（消毒寧）0.05%~0.1%水溶液，用于皮膚、器具等消毒；⑧過氧乙酸a、0.2%~0.5%水溶液；