DB35T 1335-2013豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測方法 免疫金試紙法

ICS11.220B41DB35福建省地方標(biāo)準(zhǔn)DB35/T1335—2013豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測方法

免疫金試紙法Detectionofantibodiesagainstporeinereproductiveandrespiratory

syndrome(PRRS)-ProtocoIofgoIdimmuno-chromatographyassay2013-04-02發(fā)布 2013-07-05實施福建省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB35/T1335—2013本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》給出的規(guī)則編制。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國廈門出入境檢驗檢驗局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)負(fù)責(zé)起草單位：廈門出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心、廈門市波生生物技術(shù)有限公司。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：孔繁德、徐淑菲、張長弓、黃印堯、陳信忠、龔艷清、郭書林、楊俊萍、周斌華。DB35/T1335—2013DB35/T1335—201311豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測方法

免疫金試紙法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬繁殖與呼吸綜合征抗體的免疫金試紙法的原理、檢測儀器和材料、操作步驟和結(jié)果判定。本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬血清、血漿或全血中豬繁殖與呼吸綜合征抗體的檢測，可用于豬繁殖與呼吸綜合征的診斷、檢疫和監(jiān)測。2縮略語下列縮略語適用于本標(biāo)準(zhǔn)。PRRS：豬繁殖與呼吸綜合征（Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome）3原理當(dāng)試紙用于檢測時，在加樣孔（S）內(nèi)加入待檢豬血液或豬血清樣品，由于層析作用，血清溶解玻璃纖維膜中膠體金標(biāo)記的PRRS抗原后繼續(xù)向檢測區(qū)方向移動，首先遇到檢測區(qū)的檢測線（T），如果樣品中有PRRS抗體存在，那么抗體在流動的過程中與膠體金標(biāo)記的PRRS抗原結(jié)合，然后流動到硝酸纖維素膜檢測線（T）,再與檢測線（T）上的PRRS抗原結(jié)合，形成膠體金標(biāo)記PRRS抗原-PRRS抗體-PRRS抗原的免疫復(fù)合物，在檢測線（T）上形成一條紫紅色色帶，剩余的膠體金標(biāo)記PRRS抗原繼續(xù)往檢測區(qū)的對照線（O移動，與兔抗PRRS抗體結(jié)合形成一條紫紅色色帶，以此證明該檢測試紙有效。若在檢測區(qū)和對照區(qū)各形成一條紫紅色線，則視為PRRS抗體陽性。PRRS抗體滴度越高，結(jié)合膠體金標(biāo)記的PRRS抗原就越多，檢測線出現(xiàn)的紫紅色色帶就越深。4檢測儀器與材料1PRRS標(biāo)準(zhǔn)陽性血清和陰性血，￡4.2PRRS抗體免疫金試紙檢測卡或檢測/紙條。4.3離心機(jī)：離心速度不小于3000r/mino4微量取樣器。5操作步驟1樣品制備1.1采血無菌條件下采血2mL?DB35/T1335—2013DB35/T1335—20135.1.2分離血清靜置血樣，待血液凝固后，取上部血清液體，若不易獲取或與紅細(xì)胞混勻，可通過3000r/min,離心機(jī)離心3min，取上部血清液體，待測。5.2檢測步驟5.2.1檢測卡的操作取出檢測卡，用微量取樣器吸取血清或血液樣品100卩L直接加到加樣孔(S)上，18°C?25°C靜置，在20min?30min內(nèi)觀察結(jié)果。5.2.2檢測試紙條的操作用微量取樣器吸取血清或血液樣品100卩L直接加到酶標(biāo)板的加樣孔上，然后取出檢測試紙條，將含有膠體金的一端插入含有血清或血液的酶標(biāo)板孔中，18C?25C靜置，在20min?30min內(nèi)觀察結(jié)果。6結(jié)果判定在檢測線(T)和對照線(C)各出現(xiàn)一條紫紅色線，判定為被檢樣品中含有PRRS抗體；只在對照線(C)出現(xiàn)一條紫紅色線，而檢測線(T)沒有出現(xiàn)紫紅色線，判定為被檢樣品中的PRRS抗體陰性；對照線(C)不岀現(xiàn)紫紅色線，本試驗無效，需重新檢測。DB35/T1335-2013D