細(xì)菌性食物中毒檢測(cè)

細(xì)菌性食物中毒

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)湖南疾病預(yù)防控制中心王嵐實(shí)驗(yàn)室在食物中毒事件中

主要任務(wù)是盡快查出食物中毒原因?qū)嶒?yàn)室在食物中毒事件中主要任務(wù)具體包括下列幾個(gè)方面1.參與食物中毒應(yīng)急預(yù)案的制定２.準(zhǔn)備食物中毒應(yīng)急物品３.參與現(xiàn)場(chǎng)采樣４.對(duì)樣品進(jìn)行檢驗(yàn)５.檢驗(yàn)結(jié)果與現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查情況及病人臨床癥狀進(jìn)行綜合分析６.食物中毒預(yù)防機(jī)制的研究食物中毒檢驗(yàn)

食物中毒檢驗(yàn)工作是食物中毒調(diào)查的重要組成部分，檢驗(yàn)技術(shù)水平與食物中毒致病物質(zhì)查明率密切相關(guān)，檢驗(yàn)結(jié)果對(duì)提供疾病臨床確診依據(jù)、中毒食品和病原因子污染來源等方面具有重要意義。實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)工作技術(shù)性較強(qiáng)，檢驗(yàn)結(jié)果的正確性不僅取決于實(shí)驗(yàn)室的條件和技術(shù)水平，同時(shí)還與檢驗(yàn)樣品的采集、保存、送樣方法等方面有關(guān)。因此在分析檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，除了應(yīng)考慮結(jié)果是否符合有關(guān)實(shí)驗(yàn)室判定標(biāo)準(zhǔn)外，還應(yīng)綜合考慮各種困難影響檢驗(yàn)結(jié)果的因素。有時(shí)陽性檢驗(yàn)結(jié)果不一定都能說明病原因子在食物中毒中的致病作用。陰性結(jié)果也不一定能完全否定某種病原因子。細(xì)菌性食物中毒實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)

1.根據(jù)中毒患者臨床特點(diǎn)和流行病學(xué)資料分析結(jié)果，盡快推斷可疑致病因素范圍，確定檢驗(yàn)項(xiàng)目。2.按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及時(shí)對(duì)采集的樣品進(jìn)行檢驗(yàn)。3.檢出致病菌或毒素的，應(yīng)對(duì)致病菌及毒素進(jìn)行分型，并按照規(guī)定鑒定并長(zhǎng)期保存菌株。4.必要時(shí)，對(duì)可疑中毒食品進(jìn)行毒性實(shí)驗(yàn)。5.加強(qiáng)與其他實(shí)驗(yàn)室的聯(lián)系和合作；到遇到困難時(shí)，及時(shí)請(qǐng)求保證和支持。細(xì)菌性食物中毒樣品檢驗(yàn)的一般程序1.樣品采集

↓2.初步檢驗(yàn)→活菌數(shù)、直接鏡檢(涂片→染色→鏡檢)↓3.分離培養(yǎng)

(包括增菌培養(yǎng)和直接平板培養(yǎng))↓4.初篩試驗(yàn)↓5.純培養(yǎng)↓6.全面鑒定食物中毒物資準(zhǔn)備承擔(dān)食物中毒事故現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)急處理的專業(yè)技術(shù)機(jī)構(gòu)，應(yīng)配備的物資和設(shè)施設(shè)備包括但不限于下述物品，并保持其隨時(shí)處于良好的性能狀態(tài)可投入正常使用。食物中毒物資準(zhǔn)備一.食物中毒事故應(yīng)急處理專用車輛二.采樣用物品三.取證工具四.現(xiàn)場(chǎng)快速檢驗(yàn)設(shè)備五.現(xiàn)場(chǎng)記錄表格六.參考資料：七.其它有關(guān)物品

食物中毒物資準(zhǔn)備

采樣用物品

1.食品（包括固體和液體）采集：滅菌塑料袋20個(gè)、廣口瓶4個(gè)、吸管10支以上、刀、剪、勺、鑷子、夾子等。2.涂抹樣品采集：滅菌生理鹽水試管(5ml)至少20支，棉拭子若干包，有條件的單位應(yīng)配備選擇性培養(yǎng)基。3.便樣采集：采便管、運(yùn)送培養(yǎng)基各20支以上。食物中毒物資準(zhǔn)備

采樣用物品4.患者嘔吐物采集：無菌平皿和特殊采樣棉球各20個(gè)以上。5.血樣采集：一次性注射器、滅菌試管各10支以上。6.保藏樣品的冷藏設(shè)備。7.防污染的工作服或隔離衣、帽、口罩、手套、靴子等。８.其他必備物品：75％醫(yī)用酒精、酒精燈、酒精棉球、洗耳球、打火機(jī)、記號(hào)筆等．食物中毒物資準(zhǔn)備

培養(yǎng)基準(zhǔn)備C-B保存液：保存病原菌亞硒酸鹽增菌液：培養(yǎng)沙門菌普通肉湯：培養(yǎng)金黃色葡萄球菌、蠟樣芽胞桿菌1%葡萄糖肉湯：培養(yǎng)鏈球菌7.5%NaCl肉湯：培養(yǎng)金黃色葡萄球菌嗜鹽增菌液：培養(yǎng)副溶血性弧菌食物中毒物資準(zhǔn)備

培養(yǎng)基準(zhǔn)備堿性蛋白胨水：培養(yǎng)霍亂弧菌腸道增菌液：培養(yǎng)致瀉大腸埃希菌GN增菌液；培養(yǎng)志賀菌、變形桿菌LB1增菌液：培養(yǎng)單核細(xì)胞增生李斯特氏菌硫乙醇酸鹽培養(yǎng)液：培養(yǎng)產(chǎn)氣莢膜梭菌布氏肉湯：培養(yǎng)空腸彎曲菌食物中毒物資準(zhǔn)備以上裝備應(yīng)不少于兩套，分別由專人負(fù)責(zé)準(zhǔn)備和管理。消耗性物品用后應(yīng)不遲于次日及時(shí)補(bǔ)充齊全。對(duì)采樣箱物品儲(chǔ)備情況應(yīng)堅(jiān)持每月例行檢查，凡未經(jīng)使用的滅菌試管、培養(yǎng)基和采便管等無菌物品應(yīng)至少每月更換一次，以確保達(dá)到無菌要求。

現(xiàn)場(chǎng)樣品的采集

現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查人員應(yīng)盡一切努力及時(shí)完成,對(duì)中毒發(fā)生現(xiàn)場(chǎng)食物中毒各種樣品采集工作，不能及時(shí)趕到現(xiàn)場(chǎng)采樣或者采樣不全面或采樣方法不正確均可能直接影響致病物質(zhì)的查明。各種食物中毒的采樣各有側(cè)重點(diǎn)，應(yīng)根據(jù)初步掌握的食物中毒性質(zhì)確定采樣的重點(diǎn)，一般根據(jù)病人出現(xiàn)的臨床癥狀和流行病學(xué)特點(diǎn)和衛(wèi)生學(xué)調(diào)查結(jié)果,初步確定進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)或?qū)嶒?yàn)室檢驗(yàn)的項(xiàng)目,有針對(duì)性采集現(xiàn)場(chǎng)樣品,以便能夠明確找到中毒食品。

現(xiàn)場(chǎng)樣品的采集

現(xiàn)場(chǎng)采集的樣品包括：

1.可疑食物的剩余部分，2.生產(chǎn)設(shè)備上的殘留物,3.食品的加工工（用）具、容器、餐飲具、抹布、操作人員手等接觸食品物品的涂抹樣,4.中毒患者的大便、血液、嘔吐物等.5.從業(yè)人員大便、肛拭子、咽拭子、膿液等。6.其他與食物中毒有關(guān)的可疑樣品。現(xiàn)場(chǎng)挽樣品漲的采間集食品建樣品削采集食品氏采集贊應(yīng)遵呈循以姨下原劉則１.盡量酬采取蓋中毒肉患者投食用鏈后的宏剩余筋食品２.無直唇接剩練余食餅品時(shí)郵，采雨集可秀疑中秒毒食賤品的告包裝深或者者用滅慕菌生舉理鹽漏水洗黎滌盛叉過可濤疑中掘毒食移品的紅容器蒙，取飽洗滌貪液；３.采集局同一創(chuàng)加工夾場(chǎng)所旬加工途的其煎它直產(chǎn)接入隊(duì)口食克品；４.必要塵時(shí)采槐集半碼成品構(gòu)或原局料，現(xiàn)場(chǎng)榮樣品疲的采晌集涂抹聞樣品融采集包括覺生產(chǎn)迷設(shè)備盈上的巷殘留折物，申食品調(diào)加工該工具癥、用暗具、薦炊具彼及托食品垂容器堡、餐座飲具嘗、抹些布、尾操作機(jī)人員群手等雕可能揮直接犯或間暖接接本觸可權(quán)疑中皮毒食偽品的仁物品芽表面店進(jìn)行國(guó)涂抹躬采樣怠，即囑用無視菌棉婆拭子位浸沾漲生理浪鹽水武，反擦復(fù)抹弓擦表堅(jiān)面，戀然后解將棉槽拭子雅置于神鹽水遺管中撕。也療可用衫刀刮駁物品絡(luò)表面目取樣要?，F(xiàn)場(chǎng)你樣品屋的采融集大便中樣品周采集大便膜樣品酬對(duì)診該斷細(xì)犬菌性攀食物男中毒姜非常重要斬，尤階其是撞在無欄法采令集到速剩余肺食品淘時(shí)，主要誕靠大怪便樣點(diǎn)品明海確診孟斷?，F(xiàn)場(chǎng)俯樣品水的采泥集采集響大便換樣品鑒應(yīng)注牌意：1.必須鞋用采坐便管漿采集司腹瀉禍病人巷大便犬，若發(fā)讓中桑毒病時(shí)人自汗行留鄙便可桂能影云響致翁病菌蝦的檢碗出率嗽；2.無論線中毒新病人帝是否睜已經(jīng)音服藥駛，均射應(yīng)進(jìn)好行大創(chuàng)便采發(fā)集。紅有人烤認(rèn)為撫中毒距病人膜服藥嚇后再另采集刺大便大沒有次意義舉，實(shí)扒際經(jīng)扇驗(yàn)表眾明，漿病人侄服藥勇后仍律可檢垂出致迎病菌急，只孟是致跪病菌棵檢出墊率可防能減箭低。掘決不巾能因鉤為病睬人已染經(jīng)服凳藥而言放棄側(cè)大便益采集小，貽以誤明變確診攏斷的格機(jī)會(huì)唱。3.應(yīng)采辯集嚴(yán)問重腹維瀉中捏毒病惹人的趴大便溜，對(duì)眉一起阿較大石規(guī)模犁的食媽物中遼毒事棚件一雪般至革少采聚集20名病耳人的明大便慰?，F(xiàn)場(chǎng)盯樣品刻的采扇集嘔吐費(fèi)物采虎集出現(xiàn)江嘔吐鳳病人灰時(shí)，逃應(yīng)盡肢量多輪采集貓病人角嘔吐皂物，從嘔吐肌物已鬼被處迷理掉堡時(shí)，益涂抹滴被嘔溝吐物棕污染岸的物鵝品?，F(xiàn)場(chǎng)猜樣品籠的采碧集血液雅采集懷疑瞞感染暈型細(xì)饑菌性易食物揉中毒銜時(shí)，壇采集票中毒集病人犁急性惹期(3天內(nèi))和恢裕復(fù)期(歷2周左叨右)靜脈遷血3ml繞,至少暈采集5名病傲人，析同時(shí)慮采集絡(luò)正常距人靜扇脈血干作為轉(zhuǎn)對(duì)照綢，觀幣察抗狡體效柱價(jià)的差變化爭(zhēng)，以塞便明于確致再病菌味?，F(xiàn)場(chǎng)刃樣品襲的采忌集食品萍加工喬人員鍵帶菌取情況葡采樣當(dāng)懷腰疑細(xì)駁菌性史食物槍中毒寬時(shí)，球廚師桃或者數(shù)其他冤食品齒加工駝人員娃是常岸見的嬸污染尋源之嫁一，鋤應(yīng)根重?fù)?jù)對(duì)康食品聰加工提人員塞帶菌粱情況敞調(diào)查銳結(jié)果瘋進(jìn)行榨采樣款，可楚用采慮便管待對(duì)廚院師進(jìn)胖行采內(nèi)便，們涂抹達(dá)食品造加工集人員聲的手燒、鼻盡、咽片和有側(cè)感染鍋灶的茅皮膚清等。現(xiàn)場(chǎng)稀樣品虜?shù)牟赏艏畼訌R采集當(dāng)懷守疑水防污染徑事故假時(shí)，勞應(yīng)采夸集水千樣。其它糖采樣食物跌中毒免的情古況復(fù)碼雜多芹變，冰根據(jù)懲實(shí)際叢需要設(shè)可以拍采集每含有陣或可挨能含奮有有旺毒物鑼質(zhì)的嫁各種榜物品疊。樣品弓保管孝與送帥檢1.樣品瓣采集簽后登印記好叢詳細(xì)軋信息便，對(duì)襪每個(gè)毯樣品協(xié)作唯商一標(biāo)盼志，娛以防升錯(cuò)亂犧；并頸嚴(yán)密投封閉英包裝鄉(xiāng)豐，置遙冰壺頁冷藏氧，應(yīng)福在4小時(shí)枕內(nèi)送代至實(shí)呢驗(yàn)室裹。2.樣品送檢應(yīng)附是詳細(xì)距送檢踩單，竭填明趁樣品講的名個(gè)稱、指來源堂、件壘數(shù)、努重量覽、采李樣的補(bǔ)條件懂、時(shí)應(yīng)間、鬧送檢千時(shí)間古、檢口驗(yàn)項(xiàng)隊(duì)目、網(wǎng)受理安編號(hào)怠、送獵樣人車等。夜并向緩檢驗(yàn)屋人員痛說明倍中毒鬧情況所。3.檢驗(yàn)饅人員肉接到檢樣品舊必須周簽字,注明遺接到念時(shí)間,并立鏈即進(jìn)旅行檢厚驗(yàn)。4.如發(fā)仆現(xiàn)采墾樣的奇條件(容器符或采刑樣)可能獻(xiàn)影響配結(jié)果朝時(shí),應(yīng)在爪檢驗(yàn)蒼報(bào)告救上注橋明。食物再中毒母樣品膛采集便注低意事謊項(xiàng)1.食物卸中毒豎采樣賞量不卸受常鉗規(guī)食咳品衛(wèi)的生監(jiān)叮督工棋作規(guī)盼定數(shù)席量的衫限制抱，可揉根據(jù)鄰食物肢中毒監(jiān)調(diào)查辨處理恨工作概需要啞進(jìn)行泄采樣份；2.懷疑刻細(xì)菌付性食幼物中緊毒必樓須采世用無載菌操充作采賺樣，堡采樣陵人員響必須嶺掌握界無菌妖采樣施技術(shù)舞，用度于采裹樣的駁工具秀、容委器等捆必須即經(jīng)過昨高壓裝滅菌腥；3.樣品諷在送萍檢之蛙前應(yīng)叫妥善豎保存傾，夏螞天應(yīng)湊置于原放有房誠(chéng)冰塊額的隔野熱保必溫箱允內(nèi)，竊最好捷冰箱儉內(nèi)保厭存。食物衫中毒魄樣品糾采集霸注撫意事秤項(xiàng)4.使用岔衛(wèi)生打部統(tǒng)選一制膨定的傲采樣傍記錄耀文書斗，經(jīng)改有關(guān)號(hào)陪同開人員懷簽字居后送憶檢；5.樣品正應(yīng)盡欣快送要實(shí)驗(yàn)溪室檢繼驗(yàn)。輸調(diào)查孤大規(guī)漫模食許物中挖毒時(shí)符，需絨要邊潮調(diào)查法，邊相采樣研，把索已經(jīng)史采集純的樣純品分兔批送捷實(shí)驗(yàn)掉室檢拌驗(yàn)。初步夸檢驗(yàn)直接賄涂片芹染色腥鏡檢觀察鉆存在陡于檢傲品中葬特種局形態(tài)鉛的細(xì)宗菌如洲霍亂珍弧菌胸、彎耍曲菌咱，為霧進(jìn)一糖步的閣檢驗(yàn)聚提供絮有用偏的信柱息一般狼活菌希數(shù)的擋測(cè)定按國(guó)梢標(biāo)菌貸落總尺數(shù)測(cè)份定方此法進(jìn)真行，盯以了爺解可土疑食瞎品被滅污染寧情況增菌駱及分托離培士養(yǎng)將非昂病源吹樣品霸包括年可疑瀉食物俱、水脫樣及脖環(huán)節(jié)朝樣品,服過敏抗生水素后戀采集緒的病飛源樣著品及茶從業(yè)樂人員德帶菌熄查源禍的樣坊品按湖檢驗(yàn)京項(xiàng)目坑要求厭接種居各相扒應(yīng)增抄菌液來培養(yǎng)；增菌駁培養(yǎng)顏后接沒種于受各相蟲應(yīng)分樹離培始養(yǎng)基。分離閣培養(yǎng)將無羽須做串增菌殊處理屢的病埋源樣領(lǐng)品按含檢驗(yàn)丑項(xiàng)目格要求牧直接杰接種燒于各濫相應(yīng)酷分離亮培養(yǎng)受基根據(jù)蘿分離剝培養(yǎng)夾基及江其菌致落特嶄征,選取膨可疑竄菌落初篩盟試驗(yàn)克氏綢雙糖/三糖鏡鐵/腸道蓬綜合槍發(fā)酵題管PC刷RVI悄DA媽S可疑燙菌的藏鑒定全面廁生化棕試驗(yàn)袍（AP眨I、VE登TI餓K、手工物鑒定逆等）；噬菌面體試撿驗(yàn)；血清抱分型；毒素末或毒凡素基灰因測(cè)描試；毒素細(xì)或毒枯素基嶺因測(cè)率試霍亂砌弧菌榜腸毒裁素、傷葡萄漁球菌跳腸毒汽素、EI容EC侵襲捐毒素散、ET津EC腸毒理素按莫國(guó)標(biāo)落方法訂進(jìn)行枕動(dòng)物嫂試驗(yàn)斯或酶罷聯(lián)免甘疫試直驗(yàn)（VI沿DA姨S等）毒素孝基因侄測(cè)試虛：霍考亂弧煉菌腸傻毒素峽、葡讓萄球征菌腸災(zāi)毒素棗、致歲瀉性坐大腸坊埃希猜菌的饅所有膜毒力社基因潮均可環(huán)用PC臨R檢測(cè)?；颊呋I血清女的試目驗(yàn)疑似適傷寒予或副畢傷寒肆的患則者應(yīng)昨取發(fā)次病一秩周的鐮血清舟做肥炒達(dá)氏粥反應(yīng)烈，用糟作輔憲助診會(huì)斷；將患能者急雙性期僻和恢管復(fù)期鍬的血耽清做損凝集翁效價(jià)蝴的對(duì)汁比，4倍增阿長(zhǎng)可護(hù)確診。檢驗(yàn)概結(jié)果寫的判茂定應(yīng)以忌找到跌病原減體或督其毒死素為勉最終都結(jié)論瞧，在威此之贏前所掙有的凱快速女檢驗(yàn)盤方法拋如PC染R、VI裁DA完S等得姨到的金結(jié)果忍僅供摸參考；應(yīng)注老意非擠病源票樣品砍與病狠源樣丑品檢酬出的次病原糖體的成統(tǒng)一蠢性。常見阿細(xì)菌忽性食堂物中織毒實(shí)驗(yàn)桿室診致斷沙門句氏菌梁食物趴中毒典實(shí)據(jù)驗(yàn)室稅診斷從可疑射食品猴、病嫌人嘔毅吐物芳或腹驚瀉便但中檢范出血挑清學(xué)孫型別租相同疑的沙拖門氏鍋菌?；蛉鐭o恢可疑毫食品殃，從彩幾個(gè)摩病人塞嘔吐勤物或蠅腹瀉繪便中哈檢出沈血清宜學(xué)型傳別相宏同的遭沙門只氏菌喉也可賞。有必中要時(shí)匙可觀牌察分料離出直的沙蛙門氏腥菌與色病人騎血清錘的凝焦集效練價(jià)，義恢復(fù)境期應(yīng)卷比初苗期有膽所升輪高(一般地約升趣高4倍約)。沙門盒氏菌催檢驗(yàn)捧方法唐按GB伏/湖T4膛78經(jīng)9.頌4進(jìn)行桂。副溶吩血性自弧菌婚食物梅中毒候?qū)嵱◎?yàn)室昆診斷從中煌毒食成品、臥食品炊工具顯、患打者腹駕瀉便奴或嘔館吐物咽中檢廳出生繩物學(xué)巷特性(見GB納/蝴T4帶78隔9.7熱)或血顯清型叛別一界致的臺(tái)副溶珍血性蛙弧菌價(jià)。動(dòng)物(小鼠)試驗(yàn)豈具有歡毒性難或與讓患者析血清血有抗許體反竄應(yīng)。助（有蠅條件銳時(shí)做鄰）按GB身/擾T4度78喬9.7進(jìn)行泡檢驗(yàn)摘。金黃青色葡草萄球通菌食漆物中哲毒振實(shí)驗(yàn)序室診珠斷從中跟毒食印品中生直接腐檢測(cè)匆腸毒睡素，并確勺定其峰型別脂。從中噴毒食型品、保患者誦嘔吐嶼物、產(chǎn)糞便期中經(jīng)堆培養(yǎng)許分離匯出金灰黃色矩葡萄挎球菌墨，菌娛株再倡檢測(cè)撫腸毒糠素，冠證實(shí)另為同咱一型妨別。符合嚇以上掀其中牲一項(xiàng)蘆者即垂可金黃析色葡丈萄球毒菌檢伍測(cè)方藍(lán)法見GB幼/研T4贏78汗9.1良0。變形敵桿菌耀食物嘉中毒御實(shí)削驗(yàn)室摟診斷從中覺毒食衰品和蠟患者碼吐瀉貨物中測(cè)檢出勇占優(yōu)寬勢(shì)、配且生飲化及掛血清伐學(xué)型育別相損同的焦變形愧桿菌委。取患炒者急診性期演和恢蟻復(fù)期(中毒承后12追～1柳5d)的血縣清，何用分甲離的慚菌株佳做血合清凝易集效貸價(jià)測(cè)違定，徒恢復(fù)仰期滴輕度高刪于急星性期呢滴度伍四倍脾，即攻有診邪斷意誓義。血同時(shí)駝以健漁康人錦做為吩對(duì)照催，應(yīng)苗為陰圖性。病原膊性大它腸艾媽希氏證菌食筐物中追毒嚼實(shí)驗(yàn)很室診律斷從中久毒食皮品中眼和患踐者吐芝瀉物徐中均白檢出漆生化怪及血但清學(xué)竊型別拾相同燭的大撿腸艾拿希氏翻菌。侵襲娛性大肌腸艾壘希氏狠菌應(yīng)割進(jìn)行易豚鼠維角膜淹試驗(yàn)幣，產(chǎn)定腸毒窩素大智腸艾嫌希氏憤菌應(yīng)曬進(jìn)行敞腸毒來素測(cè)朱定。按GB哲/買T4獻(xiàn)78預(yù)9.控6方法聽進(jìn)行羨。產(chǎn)氣隆莢膜蛛梭菌漫食物狡中毒跟實(shí)序驗(yàn)室圓診斷從采梳集患仔者糞丑便(最好時(shí)是發(fā)捉病2日以責(zé)內(nèi)的)及可史疑中傾毒食燙品檢書測(cè)產(chǎn)議氣莢劑膜梭趕菌，島方法土按GB隙/派T4賓78妙9.1陜3執(zhí)行瞞。架分離兆菌株誦血清糟型鑒魚定，雜以分濃離菌擾株按能一般介方法盛制備碰的免疫疫凝停集素著血清刺進(jìn)行學(xué)凝集頭試驗(yàn)醉。按差培養(yǎng)聯(lián)分離犧菌株牙檢查境其腸坊毒素剃產(chǎn)生徹性，取同緩上糞宵便檢蛙樣檢慮測(cè)