動物細胞融合與單克隆抗體申

動物細胞融合與單克隆抗體申第一頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物體細胞雜交過程示意圖動物細胞能否融合？第二頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五A細胞B細胞人工誘導1.1動物細胞融合的概念雜交細胞是指兩個或多個細胞融合形成一個單核細胞的過程。（也稱細胞雜交）一、動物細胞融合第三頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五怎樣融合?過程如何?第四頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五細胞膜的流動性滅活病毒、PEG、電激等融合后的細胞進行有絲分裂，形成完整的雜交細胞誘導的手段？融合后細胞的類型？AB雜種細胞遺傳物質(zhì)有什么特點？三種AA、AB、BB（A、B）含兩種生物的遺傳物質(zhì)1.2動物細胞融合過程原理？第五頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五1.2動物細胞融合過程

滅活喪失感染性保留融合活性為什么滅活的病毒能作誘導劑？第六頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五1.3動物細胞融合技術(shù)的意義和應用突破

方法的局限，使遠緣雜交成為可能為制造

開辟了新途徑有性雜交單克隆抗體第七頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五比較項目細胞融合的原理相關(guān)的酶誘導手段用途植物體細胞雜交細胞膜的流動性纖維素酶、果膠酶去除細胞壁離心、電刺激、振動、聚乙二醇克服遠源雜交不親和性獲得雜種植株動物細胞融合細胞膜的流動性用胰蛋白酶膠原蛋白酶使細胞分散除應用植物細胞雜交手段外，還有滅活病毒使遠緣雜交成為可能,獲得雜種細胞制備單克隆抗體1.4比較動、植物細胞雜交技術(shù)第八頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五1．動物細胞融合與植物原生質(zhì)體融合所用的誘導方法有何不同？

提示：動物細胞融合可用滅活的病毒進行誘導。

2．細胞融合技術(shù)與有性雜交相比有哪些優(yōu)點？提示：有性雜交有著十分嚴格的時空關(guān)系和種族界限。動物細胞融合則不同，①它克服了物種之間的遺傳屏障，②能夠按照人們的意愿，把不同物種的不同組織類型的細胞融合在一起。思考與探究第九頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五強調(diào)：效應B淋巴細胞是能夠產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞，下文將其簡稱為B淋巴細胞抗體：能夠與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白。能產(chǎn)生抗體的細胞是漿細胞（即效應B細胞）。溫故知新二、單克隆抗體B淋巴細胞效應B淋巴細胞記憶B淋巴細胞分化第十頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五1、抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗原（1）向動物體內(nèi)反復注射抗原（2）從動物的血清中分離抗體（3）該法制備抗體的缺點：產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。如何解決這個問題呢？單克隆抗體！第十一頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五讀下面一段資料，找出單克隆抗體的概念

人們發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)生免疫反應的過程中，體內(nèi)的B細胞可以產(chǎn)生多達百萬種以上的特異性抗體，但是每個B細胞只分泌一種化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個B細胞進行無性繁殖，即克隆。2.1單克隆抗體1、概念：單個B細胞克隆產(chǎn)生的化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體第十二頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五2.2單克隆抗體的制備如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請嘗試設計一個方案。(2)解決思路：將B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合為

。雜交瘤細胞第十三頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五產(chǎn)生專一抗體的B細胞骨髓瘤細胞雜交瘤細胞動物細胞培養(yǎng)技術(shù)動物細胞融合技術(shù)單克隆抗體既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖的細胞1975年英國科學家米爾斯坦和柯勒的實驗第十四頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五(3)制備過程第十五頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五獲得產(chǎn)生相應抗體的B細胞①為什么給小鼠注射特定的抗原蛋白？BB

、B瘤、瘤瘤（B、瘤）②會有幾種融合方式？√第十六頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五（一選）選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)：只有雜交瘤細胞才能存活（二選）：選擇能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞體外培養(yǎng)液中培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)雜交瘤細胞特點：既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖。③雜交瘤細胞是如何篩選出來的？有何特點？④是否所有的雜交瘤細胞都能產(chǎn)生專一性抗體？⑤如何大規(guī)模進行培養(yǎng)得到大量的單克隆抗體？因為用抗原刺激小鼠時會產(chǎn)生多種效應B細胞，不同效應B細胞與骨髓瘤細胞融合得到的雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體是不同的，所以還要篩選出產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞第十七頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五(4)單克隆抗體的特點特異性強，靈敏度高，并能大量制備。第十八頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五2.3單克隆抗體的應用（1）作為診斷試劑——準確、高效、簡易、快速的優(yōu)點第十九頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五“生物導彈”＝單克隆抗體＋藥物單抗導向，藥物為彈頭（2）治療疾病和運載藥物主要用于治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運載抗癌藥物，形成“生物導彈”，準確殺傷癌變細胞。第二十頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五血清抗體與單克隆抗體的比較名稱產(chǎn)生特點血清抗體由B淋巴細胞分泌一般從血清中分離，產(chǎn)量低、純度低、特異性差單克隆抗體由雜交瘤細胞分泌特異性強、靈敏度高，能大量制備第二十一頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五1．為什么要對小鼠注射抗原？提示：以獲得能產(chǎn)生相應抗體的B淋巴細胞(漿細胞)。

2．根據(jù)單克隆抗體制備過程思考下列問題：

(1)制備單克隆抗體時，為什么要選用B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞？

(2)B淋巴細胞和骨髓瘤細胞經(jīng)聚乙二醇處理后，培養(yǎng)液中存在哪幾種細胞？

(3)選擇雜交瘤細胞的兩步篩選的目的各是什么？思考與探究提示：(1)B淋巴細胞只能分泌一種特異性抗體，但不能無限增殖；骨髓瘤細胞可大量快速增殖，卻不能產(chǎn)生抗體。若將兩種細胞融合在一起，既能無限增殖又能大量產(chǎn)生特異性抗體。

(2)未融合的B淋巴細胞、未融合的骨髓瘤細胞、B－B融合細胞、瘤－瘤融合細胞、B－瘤融合細胞。

(3)第一步篩選的目的是獲得雜交瘤細胞；第二步篩選的目的是獲得能產(chǎn)生所需單一抗體的雜交瘤細胞。第二十二頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五【考向一】細胞融合[例1]下列對植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較，描述正確的是 (

)A．動物細胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同，誘導融合的方法也完全相同

B．兩者都可以跨越種屬間的生殖隔離，突破有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能

C．利用動物細胞融合技術(shù)而發(fā)展起來的雜交瘤技術(shù)，為試管嬰兒的誕生開辟了新途徑

D．目前科學家終于實現(xiàn)了兩個植物物種間的體細胞雜交，得到了同時具有兩個物種遺傳物質(zhì)的超級植物，并使它們的性狀全部得以體現(xiàn)B第二十三頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五【考向二】單克隆抗體的制備[例2]下圖是制備分泌抗X(H1N1流感病毒)抗體的過程，根據(jù)圖解回答問題：(1)給小鼠注射抗原的目的是_____________。(2)在單克隆抗體制備過程中之所以選用B淋巴細胞和骨髓瘤細胞，是因為它們?nèi)诤虾蟮碾s交瘤細胞具有_______

的特性。獲得能產(chǎn)生相應抗體的B淋巴細胞既能無限增殖，又能產(chǎn)生特定抗體第二十四頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五(3)由圖中可看出，單克隆抗體制備過程運用了_________

和______

_的動物細胞工程技術(shù)手段。(4)動物細胞培養(yǎng)液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素等，與植物細胞培養(yǎng)基有所不同的是還含有________

。細胞融合細胞培養(yǎng)動物血清第二十五頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五(5)在動物細胞融合過程中，需要將所選取的組織細胞分散開，以利于細胞融合，可用________

處理離體組織細胞使之分散。(6)圖中有兩次篩選過程，其中步驟④的目的是篩選出_

_

，步驟⑤⑥的目的是篩選出_______________________________。胰蛋白酶雜交瘤細胞能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞第二十六頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五【變式訓練】單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和B淋巴細胞融合后,要用特定的培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細胞是(

)①B淋巴細胞②小鼠骨髓瘤細胞③B淋巴細胞自身融合細胞④小鼠骨髓瘤細胞自身融合細胞⑤雜交瘤細胞A．①②③④B．①②③

C．②④D．②③初試牛刀A在選擇培養(yǎng)基上，只有雜交瘤細胞才能成活增殖第二十七頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五1.動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較中，正確的是()A.誘導融合的方法完全相同B.所用的技術(shù)手段完全相同C.所采用的原理完全相同D.都能形成雜種細胞2.動物細胞融合和植物原生質(zhì)體融合比較，在動物細胞融合中有特殊性的是

（

）A.融合的原理 B.融合的優(yōu)點

C.融合的誘導手段 D.融合的過程在選擇培養(yǎng)基上，只有雜交瘤細胞才能成活增殖DC第二十八頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五3、科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是（）A.經(jīng)過免疫的B淋巴細胞C.經(jīng)過免疫的T淋巴細胞B.不經(jīng)過免疫的T淋巴細胞D.不經(jīng)過免疫的B淋巴細胞A第二十九頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五4.下圖是單克隆抗體制備過程示意圖，其中1過程注射的物質(zhì)和A細胞的名稱為 （）A.抗體、T淋巴細胞B.抗原、T淋巴細胞C.抗體、B淋巴細胞D.抗原、效應B淋巴細胞D第三十頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五5.單克隆抗體和血清抗體相比，其優(yōu)越性在于（）A.單克隆抗體能夠制成“生物導彈”B.單克隆抗體能夠在體外制備C.單克隆抗體比血清抗體的特異性強、免疫活性高D.單克隆抗體制備過程簡單6.“生物導彈”是指 （）A.單克隆抗體B.帶有特定藥物的單克隆抗體C.雜交細胞D.B淋巴細胞CB第三十一頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五【例6】用動物細胞工程技術(shù)獲取單克隆抗體，下列實驗步驟中錯誤的是（）A．將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞B．用纖維素酶處理B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞C．用聚乙二醇作誘導劑，促使能產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合D．篩選雜交細胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體的細胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體×B第三十二頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五7.右圖為細胞融合的簡略過程，請據(jù)圖回答：（1）若A、B是植物細胞，在細胞融合之前已用

_____________處理，除去了

_______；由A、B到細胞C的過程中，常用的物理方法是

____________________。融合完成的標志是________。（2）若A、B是植物細胞，則形成的D細胞還要應用

_______________________技術(shù)把D培養(yǎng)成植株。纖維素酶和果膠酶細胞壁離心、振動、電刺激產(chǎn)生新的細胞壁組織培養(yǎng)第三十三頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五（3）若A、B是動物細胞，一般取自

_____

，然后用

使其分散開來；由A、B到C的過程中，常用的不同于植物細胞融合的手段是

_________

，所形成的D稱為

__________

，A、B融合為C的過程說明了細胞膜具有

。（4）若該過程是制備單克隆抗體，A為小鼠效應B細胞，那么，在獲得此細胞之前，小鼠已經(jīng)被注射了

。注射后小鼠身體發(fā)生了相應的免疫反應，生成了______

，圖中B為____________。幼齡動物的組織或器官或胚胎胰蛋白酶滅活的病毒誘導雜（交）種細胞流動性抗原效應B細胞、記憶細胞、抗體骨髓瘤細胞第三十四頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五（5）若該過程仍是制備單克隆抗體，在A、B到C的過程中，所形成的C有

種，用來培養(yǎng)的D細胞應該是_____________。從中選擇出它的方法是___________

培養(yǎng)，獲得D后，常用的培養(yǎng)方法是培養(yǎng)液中培養(yǎng)和_________________________。雜交瘤細胞用特定選擇培養(yǎng)基小鼠腹腔內(nèi)增殖

3

第三十五頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五第三十六頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五兩個過程動物細胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個“一”一個誘導細胞融合的新方法－－滅活病毒一個新細胞－－雜交瘤細胞一個優(yōu)勢－－單克隆抗體特異性強、靈敏度高的優(yōu)勢本節(jié)小結(jié)重點第三十七頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五(1)若A細胞是小鼠骨髓瘤細胞，則B細胞是取自小鼠體內(nèi)的

細胞，從小鼠體內(nèi)提取分離該細胞之前，應給小鼠注射_____________類物質(zhì)。（2）d過程是一個_____________過程，該過程的進行常用_____________或_____________的誘導。(3)假設僅考慮某兩個細胞的融合，則可形成

種類型的C細胞，因此需用__________培養(yǎng)基篩選出D細胞用于培養(yǎng)，D細胞的名稱是

，其特點是_________________________________________。效應B

抗原

細胞融合

聚乙二醇滅活的病毒

選擇性3既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體

雜交瘤細胞第三十八頁，共四十一頁，編輯于2023年，星期五(4)在培養(yǎng)時通過________分裂方式大量繁殖。D細胞體外培養(yǎng)需要注意的條件是（要求答5項）__________________________________。（5）單克隆抗體在疾病的診斷、治療和預防方面，與常規(guī)抗體相比，其特點是_________________。特異性強、靈敏度高

有絲無菌、無毒的環(huán)境；充足的營養(yǎng)；適宜的溫度和pH；適宜的氣體環(huán)境