少花龍葵化學(xué)成分預(yù)試及抑制亞硝化反應(yīng)研究

少花龍葵化學(xué)成分預(yù)試及抑制亞硝化反應(yīng)研究【摘要】目的初步測定野生少花龍葵的化學(xué)成分類型及其對亞硝化反應(yīng)的抑制作用。方法用石油醚、95%乙醇和水依次對野生少花龍葵進行提取，根據(jù)顏色反應(yīng)及沉淀反應(yīng)初步判斷所含化學(xué)成分的類型，研究各提取物對亞硝胺合成的阻斷及對亞硝酸鹽的清除作用。結(jié)果石油醚提取液中含有甾體或三萜類及油脂，95%乙醇提取液中含有酚類、鞣質(zhì)、生物堿以及香豆素和萜類內(nèi)酯，水提取液中含有糖及其苷類、氨基酸、蛋白質(zhì)、皂苷和生物堿；3種提取物對亞硝化反應(yīng)均有抑制作用，其中醇提取液作用較強。結(jié)論野生少花龍葵對亞硝化反應(yīng)有抑制作用，有望成為防癌新資源。

【關(guān)鍵詞】少花龍葵提取物成分預(yù)試亞硝化抑制

Abstract：ObjectiveTostudythechemicalcomponentsandtheirinhibitiononphoteinocarpumNakamuraetOdashimawasextractedbypetroleumether，95%ethanolandwaterrespectively.Thepreliminarytestsofthechemicalcomponentswereexperimentizedbycolorreactionandprecipitationreaction,whiletheirinhibitiononnitrosationsuchasnitrosodimethylaminesynthesisandsodiumnitritewerestudied.ResultsTheexperimentsshowedthatthereweresteroidsortri-terpenoidandoilinthepetroleumetherextractandphenols,tanning,alkaloids,coumarinandterpenoidsinthe95%ethanolextract，whilethereweresaccharidesandglycoside,amino-acid,protein,saponinsandalkaloidsinthewaterextract.Theseextractshadsomeinhibitiononnitrosationandtheinhibitionofthe95%ethanolextractwasstrongerthanthephoteinocarpumNakamuraetOdashimahasinhibitoryeffectonnitrosationanditmaybecomeanewresourcetopreventcancer.

Keywords：SolanumphoteinocarpumNakamuraetOdashima；Extracts；Preliminarytests；Nitrosation；Inhibition

少花龍葵SolanumphoteinocarpumNakamuraetOdashima別名白花菜，為茄科一年生草本植物，多生長在果園、田邊、路旁等地，主要分布在廣東、廣西、海南、貴州、福建、臺灣等省及地區(qū)［1］。少花龍葵嫩葉可作蔬菜食用，全草可入藥,是華南地區(qū)重要的藥用植物，具清熱利濕、涼血解毒功效，常用作治療痢疾、高血壓病、扁桃體炎、肺熱咳嗽、牙齦出血、眼疾及呼吸道疾病等［2］。

李蕓瑛等［3］對野生少花龍葵嫩葉的主要營養(yǎng)成分、維生素、礦質(zhì)元素等進行了分析測定，證明了它是一種營養(yǎng)保健的野生植物資源。目前對其藥用成分的研究尚未見報道。文獻表明茄科茄屬植物龍葵SolanumnigrumL.為抗癌中草藥之一［4］。為了尋找新的藥用植物資源，本文對其同科植物少花龍葵進行此方面的研究。實驗用石油醚、95%乙醇和水依次對野生少花龍葵全草進行提取，根據(jù)顏色反應(yīng)及沉淀反應(yīng)初步判斷所含化學(xué)成分的類型，研究不同濃度的提取物對二甲基亞硝胺合成的阻斷和對亞硝酸鈉的清除作用，初步研究少花龍葵提取物的防癌生物活性，以期為少花龍葵的開發(fā)利用尋找新的途徑。

目前亞硝胺是最令人關(guān)注的一類化學(xué)致癌物，它能引發(fā)肝臟等多種器官的惡性腫瘤。阻斷亞硝胺合成或清除亞硝胺的前體是預(yù)防癌癥的一個有效途徑。本文旨在為加速對少花龍葵這一野生植物資源的綜合開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1器材1材料

野生少花龍葵全草于4月上旬采自肇慶學(xué)院校外田邊，先以自來水沖洗，再用蒸餾水清洗，自然晾曬后80℃干燥，粉碎備用。2試劑

醋酐、濃硫酸、磷鉬酸、氯仿、三氯化鐵、鐵氰化鉀、對硝基苯胺、濃鹽酸、亞硝酸鈉、明膠、氯化鈉、硫酸鐵銨、醋酸鉛、溴酚藍、溴甲酚綠、碘、碘化鉀、硅鎢酸、苦味酸、鞣酸、三氯化鋁、鎂粉、醋酸鎂、氫氧化鉀、硼酸、氫氧化鈉、碳酸鈉、鹽酸羥胺、三氯乙酸、硫酸銅、a-萘酚、酒石酸鉀、茚三酮、檸檬酸鈉、二甲胺、對氨基苯磺酸、α-萘胺、N-1-萘乙二胺鹽酸鹽、冰乙酸、正丁醇、醋酸乙酯、甲醇、丙酮、石油醚、乙醇等均為國產(chǎn)分析純。3儀器

FA2004N、FA1604電子分析天平，HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋，ZKJ-1型循環(huán)水真空泵、RE-52AAA旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器，DJ-10傾倒式粉碎機，101-2AS電熱鼓風恒溫干燥箱，UV-2550型紫外可見分光光度計。

2方法

少花龍葵化學(xué)成分預(yù)試驗［5］

石油醚提取液

取粉碎的少花龍葵1g，加10ml石油醚，放置3h，過濾，濾液置表面皿上任其揮發(fā)，殘留物進行甾體或三萜類、揮發(fā)油和油脂的試驗。

乙醇提取液

取粉碎的少花龍葵10g，加入100ml石油醚浸泡3h，抽濾。濾渣揮干溶劑，加95%乙醇100ml，在水浴上加熱回流1h，過濾，濾液留2ml進行酚類、糅質(zhì)、有機酸的預(yù)試驗。其余濃縮成浸膏，浸膏分為兩部分，一部分置于研缽中，用2%HCl溶解，過濾，取鹽酸水溶液進行生物堿試驗，附濾紙上的殘渣再以少量乙醇溶解，作黃酮、蒽醌試驗；另一部分浸膏再以少量的醋酸乙酯溶解，溶液置分液漏斗中加適量5%NaOH振搖，使酚性物質(zhì)及有機酸等轉(zhuǎn)入下層氫氧化鈉水溶液中，醋酸乙酯部分用蒸餾水洗至中性，將醋酸乙酯液2～3ml在水浴上蒸干，以1～2ml乙醇溶解作香豆素與萜類內(nèi)酯和強心苷的試驗。

水提取液

取粉碎的少花龍葵5g，加入50ml石油醚浸泡3h，抽濾。濾渣揮干溶劑，加95%乙醇50ml，在水浴上加熱回流1h，抽濾。濾渣揮干溶劑后，加水50ml，在50～60℃的水浴上加熱1h后過濾，此濾液在試管及濾紙片上做多糖、有機酸、皂苷、苷類、酚類、糅質(zhì)、氨基酸、蛋白質(zhì)、生物堿預(yù)試驗。

少花龍葵提取物抑制亞硝化反應(yīng)研究［6］

提取物的制備

取粉碎的少花龍葵20g，加入200ml石油醚浸泡3h，抽濾，濾液減壓濃縮成浸膏，干燥備用。濾渣揮干溶劑，加95%乙醇200ml，在水浴上加熱回流1h,抽濾，濾液減壓濃縮成浸膏，干燥備用。濾渣揮干溶劑后，加水200ml，在50～60℃的水浴上加熱1h，抽濾，濾液減壓濃縮成浸膏，干燥備用。取上述各提取物用相應(yīng)提取劑配制1，2，3，4，5，6，7，8，9，10mg/ml待測液。

提取物阻斷亞硝胺合成的試驗

取pH為的檸檬酸鈉-鹽酸緩沖液5ml，加入1mmol/LNaNO2溶液ml，再加入1mmol/L二甲胺溶液ml，分別加入不同濃度的待測液1ml，用蒸餾水定容至10ml，在37℃下恒溫1h。吸取ml該反應(yīng)液至7cm2培養(yǎng)皿中，加入%Na2CO3溶液1ml，紫外燈照射15min，取出后加1%對氨基苯磺酸溶液ml，再加%的α-萘胺ml，加蒸餾水精確為ml，然后搖勻放置15min，在525nm處測吸光度值(Ax)。同時用浸提劑做空白試驗測吸光度值(A0)，計算阻斷率。

阻斷率(%)=(A0-Ax)/A0×100%

提取物清除NaNO2的試驗

分別取不同濃度待測液ml，加入5mlpH為的檸檬酸鈉-鹽酸緩沖液，再加入mmol/L的NaNO2溶液2ml，用蒸餾水定容至10ml，37℃恒溫1h，然后各吸取2ml反應(yīng)液于7cm2培養(yǎng)皿中，加入%的對氨基苯磺酸溶液4ml，%的N-1-萘乙二胺鹽酸鹽溶液4ml，搖勻放置15min后，用分光光度計在540nm處測吸光度值

少花龍葵化學(xué)成分預(yù)試結(jié)果少花龍葵石油醚提取液、乙醇提取液和水提取液部分化學(xué)成分預(yù)試結(jié)果見表2。表2少花龍葵化學(xué)成分預(yù)試結(jié)果

上述實驗結(jié)果表明，石油醚提取液中含有甾體或三萜類以及油脂；95%乙醇提取液中含有酚類、鞣質(zhì)、生物堿以及香豆素和萜類內(nèi)酯，未檢測到有機酸、黃酮、蒽醌類和強心苷；水提取液中含有糖及苷類、氨基酸、蛋白質(zhì)、皂苷和生物堿，未檢測到有機酸，無法確定是否存在酚類和鞣質(zhì)。

少花龍葵提取物對二甲基亞硝胺合成的阻斷作用在模擬人體胃液的條件下，二甲胺與亞硝酸鈉在37℃條件下可適宜地生成二甲基亞硝胺，在紫外光照射下二甲基亞硝胺可分解成二甲基仲胺和亞硝酸根，亞硝酸根與對氨基苯磺酸重氮化后，再與α-萘胺偶合生成紅色化合物，用分光光度計測出該化合物的吸光度值可計算上述反應(yīng)液中亞硝胺含量的多少。當往少花龍葵提取物中依次加入二甲胺與亞硝酸鈉時，提取物優(yōu)先先亞硝酸鈉作用，使得二甲胺不能與亞硝酸鈉反應(yīng)，達到阻止亞硝胺生成的目的。據(jù)此可以比較相同條件下生成亞硝胺量的多少來反映少花龍葵提取物阻斷能力的強弱，生成亞硝胺量少，少花龍葵提取物的阻斷能力就強，反之則弱。

不同濃度提取物對二甲基亞硝胺合成阻斷作用為3次測定平均值。

由圖1可知少花龍葵石油醚提取物、乙醇提取物和水提取物均對阻斷亞硝胺合成有一定的作用。隨著各提取物濃度的增大，阻斷率均呈現(xiàn)出明顯的變化，先增大后減小。其中乙醇提取物的阻斷率較大，水提取物次之，石油醚提取物最弱，這可能是石油醚提取物在反應(yīng)體系中溶解度小所致。

少花龍葵提取物對NaNO2的清除作用亞硝酸鹽在弱酸性的條件下，能與對氨基苯磺酸重氮化后，再與N-1-萘乙二胺鹽酸鹽偶合生成紅色的化合物，用分光光度計測出該化合物的吸光度值可以反映出少花龍葵提取物清除NaNO2的能力的強弱，生成紅色化合物的量少，說明提取物清除能力強，反之則弱。

不同濃度提取物對NaNO2清除作用見圖2。

由圖2可知少花龍葵石油醚提取物、乙醇提取物和水提取物均能清除亞硝酸鈉。隨著各提取物濃度的增大，清除率均呈現(xiàn)出明顯的變化，先增大后減小。其中乙醇提取物的清除率較大，水提取物次之，石油醚提取物最弱。

4結(jié)論

本文用石油醚、95%乙醇和水依次對野生少花龍葵全草進行提取，根據(jù)顏色反應(yīng)及沉淀反應(yīng)初步判斷所含化學(xué)成分的類型，研究不同濃度的提取物對二甲基亞硝胺合成的阻斷和對亞硝酸鈉的清除作用。實驗表明石油醚提取液中主要含有甾體或三萜類以及油脂，95%乙醇提取液中主要含有酚類、鞣質(zhì)、生物堿以及香豆素和萜類內(nèi)酯，水提取液中主要含有糖及其苷類、氨基酸、蛋白質(zhì)、皂苷和生物堿。3種提取物均對阻斷亞硝胺合成和清除亞硝酸鹽有一定作用，其中乙醇提取物對亞硝化反應(yīng)的抑制作用強于石油醚提取物和水提取物，在體外模擬胃液的條件下，少花龍葵乙醇提取物對NDMA合成的最大阻斷率為%，對NaNO2的最大清除率為%，作為防癌劑具有一定的開發(fā)利用價值。

少花龍葵資源豐富，營養(yǎng)價值高，口味獨特，醫(yī)食兩用，未受農(nóng)藥和化肥污染，是人們要求回歸自然的“野味”佳品，極具開發(fā)利用價值。本實驗發(fā)現(xiàn)其乙醇提取物對亞硝化反應(yīng)具有較好的抑制作用，下一步工作計劃對該部分進行純化以找到抑制作用更強的物質(zhì)，使少花龍葵有望成為經(jīng)濟、高效的防癌新資源。

【參考文獻】

［1］全國草藥匯編編寫組．全國中草藥匯編，第2版［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：2