核酸、蛋白技術(shù)參數(shù)資料、分子量標(biāo)準(zhǔn)及常用試劑的配制

核酸、白技術(shù)參數(shù)料、分量標(biāo)準(zhǔn)及常試劑的制一、核酸及蛋白質(zhì)常用數(shù)據(jù)1．苷三磷酸的物理常數(shù)化合物ATPCTPGTPUTPdATPdCTPdGTPdTTP

分子量507483523484494467507482

λmax(pH7.0)259271253262259271253267

1摩溶液（）max的最大吸收值1540090001370010000152009300137009600

OD280/OD2600.150.970.660.380.150.980.660.71核酸λDNApBR32228SrRNA23SrRNA18SrRNA19SrRNA5SrRNA

2．常用核酸的長度與分子量核苷酸數(shù)48502（雙鏈環(huán)狀）4363（鏈）4800370019001700120

分子量3.0×1072.8×1061.6×1061.2×1066.1×1055.5×1053.6×104

tRNA（大腸桿菌）752.5×1043．用核酸蛋白換算數(shù)據(jù)（）量換算1μg=10-6g1pg=10-12g1ng=10-9g1fg=10-15g（）光光度算：1A260雙鏈DNA=50μg/ml1A260單DNA=30g/ml1A260單RNA=40μg/ml（）DNA摩換算：1μg100bpDNA=1.52pmol=3.03pmol末端μgpBR322DNA=0.36pmol1pmol1000bpμg1pmolpBR322=2.8g1kb雙（鈉鹽道爾頓1kb單鏈DNA（鹽）=3.3×105道頓單鏈（鈉鹽）=3.4×105道頓（）蛋白摩爾換算：100pmol分量100蛋白質(zhì)=10μg100pmol分量，000蛋白質(zhì)5μg100pmol分量，000蛋白=1μ

氨基酸的平均分子量126.7道爾頓（）白質(zhì)換：1kbDNA=333個氨基酸編碼容量=04MW蛋白質(zhì)10，000MW蛋質(zhì)270bp30，000MW蛋白=810bpDNA50，000MW蛋白質(zhì)=1.35kb100，蛋白=2.7kbDNA4．常用蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)參照物（）分子量標(biāo)準(zhǔn)參照

（）分子量標(biāo)準(zhǔn)參照

（）分子量標(biāo)準(zhǔn)參照肌球蛋白肌球蛋白β-半糖甘酶B磷酸化酶B牛血清白蛋白

分子量212，000116，00097，40066，200

磷酸化酶B牛血清白蛋白谷氨酶脫氫酶卵白蛋白醛縮酶

97，66，55，42，40，

碳酸酐酶大豆脻蛋白酶抑制劑馬心肌球蛋白溶菌酶

31，0021，16，14，過氧化氫酶醛縮酶

57，00040，000

碳酸酐酶大豆脻蛋白酶

31，21，

肌球蛋白（F1）8，100肌球蛋白（F2）6，200抑制劑

肌球蛋白（F3）2，500溶菌酶

14，5．用DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)參照物λDNA/HindⅢ

λDNA/EcoRⅠ

λ/HindⅢ+EcoRⅠpBR322/HaeⅢ

2313094166557436123222027564125

2122674215804564348433530

2122751484973426835302027190415841375974831

587405504458434267234213192184124

12310489806457512118117564125常用抗生素溶液貯存液

工作濃度抗生素氨芐青霉素羧芐青霉素氯霉素卡那霉素鏈霉素四環(huán)素b

濃度50mg/ml(溶于水)50mg/ml(溶于水)34mg/ml(溶于乙醇)10mg/ml(溶于水)10mg/ml(溶于水)5mg/ml(溶于乙)

保存條件-20℃-20℃-20℃-20℃-20℃-20℃

嚴(yán)緊型質(zhì)粒20μg/ml20μg/ml25μg/ml10μg/ml10μg/ml10μg/ml

松弛型質(zhì)粒60μg/ml60μg/ml170g/ml50μg/ml50μg/ml50μg/mla：以水為溶劑的抗生素貯存液通過0.22μm濾器過濾除菌。以乙醇為溶劑的抗生素溶液無須除菌處理。所有抗生素溶液均應(yīng)放于不透光的容器保存。b：鎂離子是四環(huán)素的拮抗劑，四環(huán)素抗性菌的篩選應(yīng)使用不含鎂鹽的培養(yǎng)基（如LB培基）。

五、常用貯存液的配制1．30%丙烯酰胺液【制方法】

將29g丙酰胺和N’亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水熱至37溶解之加水至終體積為100ml。

用Nalgene濾（0.45μm孔徑）過濾除菌，查證該溶液的pH值不大于7.0，置棕色瓶中保存于室溫。【注意】

丙烯酰胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性并可以通過皮膚吸收，其作用具累積性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時應(yīng)戴手套和面具。可認(rèn)為聚丙烯酰胺無毒，但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作，因為它還可能會含有少量未聚合材料。

一些價格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子，在丙烯酰胺貯存液中加入大約0.2體的單床混合樹脂MB-1Mallinckrodt）攪拌過夜，然后用Whatman1號紙過濾以純化之。

在貯存期間，丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會緩慢轉(zhuǎn)化成丙烯酰和雙丙烯酸。2．40%丙烯酰胺【配制方法】

把380g丙烯酰胺（DNA測序）和20g，N亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為600ml的蒸餾水中繼按上述配制30%烯酰胺溶液的方法處理但加熱溶解后應(yīng)以蒸餾水補(bǔ)足至終體積為1L?！疽狻?/p>

見上述配制丙酰胺的說明40%烯酰胺溶液用于DNA序測定。3放線菌素D液【制方法】

把20mg放菌素D溶于4ml乙中110釋貯存液，用100%乙作空白對照讀取OD440值放線菌素D（分子量為1255）純在水溶液中的摩爾消化系數(shù)為21，900，而1mg/ml的放線菌素溶液440nm處吸值為0.182線菌素D的存液應(yīng)放在包有箔片的試管中，保存于20℃。【意

放線菌素D是畸和致癌劑，制該溶液時必須戴手套并在通風(fēng)櫥內(nèi)操作，而不能在開放在實驗桌面上進(jìn)行，謹(jǐn)防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚。

藥廠提供的作治療用途的放線菌素品常含有糖或鹽等添加劑。只要通過測量貯存液在440nm波長的吸收確定放線菌素D的濃度，這類制品便可用于抑制自身引導(dǎo)作用。4．0.1mol/L腺三磷酸ATP溶液【配制方法】

在0.8ml水中溶解60mgATP,用0.1mol/LNaOH至pH值至7.0用蒸餾水定容1ml，分裝成小份保存于70℃510mol/L乙酰液【配制方法】

把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后濾除菌6．10%硫酸銨溶液【制方法】

把1g過硫酸銨溶解于終量為10ml的水溶液中液可在4保存數(shù)周。7溶【制方法】

把的5-溴-4-氯3-吲哚磷二鈉鹽BCIP）溶解于10ml100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃8緩沖鹽溶液【配制方法】

用總體積90ml的蒸餾水溶解1.07g鹽液BES[N，N-（2-羥乙基-2-基乙磺酸、1.6gNaCl和0.027gNa2HPO4，溫下用HCl調(diào)節(jié)該液的pH值至6.96、后加入蒸餾水定容至，0.22m器過濾除菌，分裝成小份，保存-20℃。．1mol/LCaCl2溶【配制方法】

在200ml蒸餾水中溶解54gCaCl2·6H2O用μm濾過濾除菌，分裝成10ml小貯存于20℃?！疽狻?/p>

制備感受態(tài)細(xì)胞時，取出一小份解凍并用蒸餾水稀釋至100mlNalgene濾0.45μm徑除菌驟至0℃。102.5mol/LCaCl2溶【制方法】

在20ml蒸水中溶解13.5g，用0.22μm濾器過濾除菌成1ml小貯存-20。硫蘇糖【制方法】

用20ml0.01mol/L乙鈉溶液pH5.2溶解3.09gDTT過濾除菌后分裝成1ml小貯存于20℃。【意】或含有DTT溶液不能進(jìn)行高壓處理。12氧核苷三磷酸（dNTP）溶液【制方法】

把每一種溶于水至濃度為

100mmol/L左，用微量移液器取0.05mol/lTris堿別調(diào)節(jié)每一dNTP溶的pH值7.0（用pH試紙檢測），把中和的每種dNTP溶液各取一份作適當(dāng)稀釋，在下表中給出的波長下讀取光密度計算出每種dNTP的實濃度，然后用水稀釋成終濃度為50mmol/L的dNTP，裝成小份貯存于-70℃堿基AGCT

波長（）259253271260

消化系數(shù)（ε[L/（mol·cm）]1.54×1041.37×1049.10×1037.40×103比色杯光徑為1cm時吸光度εM13．0.5mol/lEDTA(pH8.0)液【配制方法】

在水加入186.1g二水二胺四乙酸二鈉EDTA-Na·2H2O）在磁力攪拌器上劇烈攪拌，用NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值至（約需20gNaOH顆粒）然后定容至1L，分裝后高壓滅菌備用?！疽狻縀DTA鈉鹽需加入將液的pH值至接近8.0，才能完全溶解。14．化乙錠10mg/ml溶）【制方法】

在100ml水中加入1g溴化錠，磁力攪數(shù)小時以確保其完全溶解，然后用鋁箔包裹容器或轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，保存于室溫。【意】

小心：溴化乙錠是強(qiáng)誘變劑并有中度毒性，使用含有這種染料的溶液時務(wù)必戴上手套，稱量染料時要戴面罩。15．2×HEPES緩鹽溶液【制方法】

用總量為的餾水溶解1.6g、KCl0.027gNa2PO4·2H2O、0.2g葡糖和1gHEPES，0.5mol/l調(diào)節(jié)pH值7.05，再用蒸餾水定容至100ml用0.22m濾器過濾除菌分裝成5ml小貯存于20℃。16IPTG溶液【制方法】為異丙基硫-β-D-半乳苷（分子量為238.3）在8ml蒸餾水中溶解2gIPTG后，用蒸水定容至，用0.22μ濾器過濾除菌，分裝成1ml小份貯存于20℃。．乙酸鎂溶液【配制方法】

在800ml水溶解214.46g四乙酸鎂，用水定容至過濾菌。18．1mol/LMgCl2溶【制方法】

在水溶解203.4gMgCl2·6H2O，用水定容至1L分裝成小份并高壓滅菌備用?！疽狻縈gCl2極易潮解，應(yīng)選購小瓶（如100g）試劑，啟用新瓶后勿長期存放。19．β-巰基乙醇BME溶液【配制方法】

一般得到的是14.4mol/L溶液應(yīng)在棕色瓶中保存于4。【注意】或含有BME的液不能高壓處理。20．NBT溶液【制方法】

把0.5g氯氮藍(lán)四唑溶解于10ml70%二甲基甲酰胺中，保存于4℃。21．酚/仿溶液【配制方法】

把酚和氯仿等體積混合后用0.1mol/LTris·HCl(pH7.6)抽幾次以平衡這一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆蓋等體積的0.01mol/lTris·HCl(pH7.6)層，保存于℃。【意】

酚腐蝕性很強(qiáng)，并可引起嚴(yán)重灼傷，操作時應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡，穿防護(hù)服。所有操作均應(yīng)在化學(xué)通風(fēng)櫥中進(jìn)行。與酚接觸過的部位皮膚應(yīng)用大量的水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。

22．10mmol/L苯基磺酰氟（PMSF溶液【配制方法】

用異丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L）分裝成小份貯存20℃。如有必要可配成濃度高達(dá)17.4mg/ml的貯存液100mmol/L?！疽狻縋MSF嚴(yán)損害呼吸道粘膜眼及皮膚，吸入、吞進(jìn)或通過皮膚吸收后有致命危險旦眼睛或皮膚接觸了PMSF應(yīng)立即用大量水沖洗之。凡被PMSF污的衣物應(yīng)予丟棄PMSF水溶液中不穩(wěn)定應(yīng)使用前從貯存液中現(xiàn)用現(xiàn)加于裂解緩沖液中PMSF在水液中的活性喪失速率隨pH值的高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。值為8.0時20μmmol/lPMSF溶液的半壽期大約為85min，這表明將PMSF溶液調(diào)節(jié)為性pH>8.6）并在室溫放置數(shù)小時后，可安全地予以丟棄。23．酸鹽緩沖溶液（PBS）溶【制方法】

在蒸水中溶解8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,用HCl節(jié)溶液的pH值至加定容至1L，15lbf/in2(1034×105Pa)壓下蒸氣滅菌20min保存于室溫。．乙酸鉀（pH7.5）液【制法】

將9.82g乙鉀溶解于90ml純中，用2mol/L乙酸調(diào)節(jié)pH值7.5后入純水定容到1L，保存-20。．酸鉀溶液（用于堿裂解）【配制方法】

在60ml5mol/L乙鉀溶液中加11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成鉀濃度為3mol/L而酸根濃度為5mol/L的溶液。263mol/L乙酸鈉（pH5.2和pH7.0）液【制方法

在80ml水溶解408.1g三乙鈉，用冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2或用稀乙酸調(diào)節(jié)pH值至7.0定到1L后高壓滅菌。27NaCl溶【制方法】

在800ml水溶解NaCl水定容至1L分裝后高壓滅菌。28．10%十二烷基酸鈉（SDS）液【制方法】

在900ml水溶解100g電泳級SDS，加熱至68助溶，加入幾滴濃鹽酸調(diào)節(jié)溶的pH值7.2，加水定容至1L，分裝備用?！疽獾奈⒓?xì)晶粒易擴(kuò)散，因此稱量時要戴面罩，稱量完畢后要清除殘留在稱量工作區(qū)和天平上的SDS10%SDS溶無須滅菌。29溶液【制方法】

在800ml水溶解175.3gNaCl和88.2g檬酸鈉，加入數(shù)滴10mol/l溶調(diào)節(jié)pH值至加水定容至1L分裝后高壓滅菌。．20×SSPE溶液【制方法】

在800ml水溶解17.5gNaClNaH2PO4·H2O7.4gEDTA，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值7.4（需6.5ml10ml/LNaOH，加水定容至1L，分裝后高壓滅菌。31100%三乙酸溶【制方法】

在裝有TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（）TCA321mol/LTris溶液【制方法】

在800ml水溶解121.91g堿，加入濃HCl調(diào)pH值至需值。pHHCl7.470ml7.660ml8.042ml

應(yīng)使溶液冷至室溫后方可最后調(diào)定值，水定容至1L，分裝后高壓滅菌?！咀⒁狻?/p>

如溶呈現(xiàn)黃色，應(yīng)予丟棄并置備質(zhì)量更好的Tris

盡管多種類型的電極均不能準(zhǔn)確測量Tris液的pH值，但仍可向大多數(shù)廠商購合適的電極。Tris溶的pH值溫度而異，溫度每升高1℃，值大約降低個單位。例如0.05mol/L的液在5℃、25℃、和37℃的值分為9.5和。33緩沖鹽溶TBSTris）【配制方法】

在800ml蒸餾中溶解8gNaCl0.2gKCl和3g堿，加入0.015g酚

用HCl調(diào)至pH值7.4，用蒸水定容至，分裝后在151bf/in2(1.034×105Pa)高下蒸汽滅菌20min，室溫保存。34X-gal溶【配制方法】X-gal為5-溴4-氯3-吲哚β-D半糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配成的20mg/ml的存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，裝有溶液的試管須用鋁箔封裹以防因受光照而被破壞，并應(yīng)貯存于-20℃。X-gal溶液無過濾除菌。試劑Denhardt試劑

雜交試驗中用于降低背景的封閉劑用途Northern雜使用RNA探的雜交單拷貝序列的Southern雜交將DNA固于尼龍膜上的雜交Denhardt試通常配制50×貯液，過濾后保存20℃?？蓪⒃撡A存液10倍稀于預(yù)雜交液（常為含有0.5%SDS和100μ經(jīng)變性被打斷的鮭精DNA的6×SSC6×SSPE）中。50×Denhardt液含5g聚蔗Ficoll,400型Pharmacia）5g聚烯吡咯烷酮和5g牛清白蛋白（組分V”Sigmal），加水至終體積為500