實驗一-顯微鏡的使用及動物基本組織的觀察

實驗一：顯微鏡的使用及動物基本組織的觀察一、實驗?zāi)康?.了解一般光學(xué)顯微鏡的基本構(gòu)造和工作原理2.掌握光學(xué)顯微鏡的使用方法3.生物量級及系統(tǒng)過程4.細胞學(xué)術(shù)與動物基本組織實驗原理光學(xué)顯微鏡一般由載物臺、聚光照明系統(tǒng)、物鏡，目鏡和調(diào)焦機構(gòu)組成。載物臺用于承放被觀察的物體。利用調(diào)焦旋鈕可以驅(qū)動調(diào)焦機構(gòu)，使載物臺作粗調(diào)和微調(diào)的升降運動，使被觀察物體調(diào)焦清晰成象。它的上層可以在水平面內(nèi)沿作精密移動和轉(zhuǎn)動，一般都把被觀察的部位調(diào)放到視場中心。聚光照明系統(tǒng)由燈源和聚光鏡構(gòu)成，聚光鏡的功能是使更多的光能集中到被觀察的部位。照明燈的光譜特性必須與顯微鏡的接收器的工作波段相適應(yīng)。物鏡位于被觀察物體附近，是實現(xiàn)第一級放大的鏡頭。在物鏡轉(zhuǎn)換器上同時裝著幾個不同放大倍率的物鏡，轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器就可讓不同倍率的物鏡進入工作光路，物鏡的放大倍率通常為5～100倍。物鏡是顯微鏡中對成象質(zhì)量優(yōu)劣起決定性作用的光學(xué)元件，一般變倍比為6.3：1，變倍范圍0.8X-5X。常用的有能對兩種顏色的光線校正色差的消色差物鏡；質(zhì)量更高的還有能對三種色光校正色差的復(fù)消色差物鏡；能保證物鏡的整個像面為平面，以提高視場邊緣成像質(zhì)量的平像場物鏡。高倍物鏡中多采用浸液物鏡，即在物鏡的下表面和標本片的上表面之間填充折射率為1.5左右的液體，它能顯著的提高顯微觀察的分辨率。目鏡是位于人眼附近實現(xiàn)第二級放大的鏡頭，鏡放大倍率通常為5～20倍。按照所能看到的視場大小，目鏡可分為視場較小的普通目鏡，和視場較大的大視場目鏡(或稱廣角目鏡)兩類。載物臺和物鏡兩者必須能沿物鏡光軸方向作相對運動以實現(xiàn)調(diào)焦，獲得清晰的圖像。用高倍物鏡工作時，容許的調(diào)焦范圍往往小于微米，所以顯微鏡必須具備極為精密的微動調(diào)焦機構(gòu)。顯微鏡放大倍率的極限即有效放大倍率，顯微鏡的分辨率是指能被顯微鏡清晰區(qū)分的兩個物點的最小間距。分辨率和放大倍率是兩個不同的但又互有聯(lián)系的概念。當(dāng)選用的物鏡數(shù)值孔徑不夠大，即分辨率不夠高時，顯微鏡不能分清物體的微細結(jié)構(gòu)，此時即使過度地增大放大倍率，得到的也只能是一個輪廓雖大但細節(jié)不清的圖像，稱為無效放大倍率。反之如果分辨率已滿足要求而放大倍率不足，則顯微鏡雖已具備分辨的能力，但因圖像太小而仍然不能被人眼清晰視見。所以為了充分發(fā)揮顯微鏡的分辨能力，應(yīng)使數(shù)值孔徑與顯微鏡總放大倍率合理匹配。聚光照明系統(tǒng)是對顯微鏡成像性能有較大影響，但又是易于被使用者忽視的環(huán)節(jié)。它的功能是提供亮度足夠且均勻的物面照明。聚光鏡發(fā)來的光束應(yīng)能保證充滿物鏡孔徑角，否則就不能充分利用物鏡所能達到的最高分辨率。為此目的，在聚光鏡中設(shè)有類似照相物鏡中的，可以調(diào)節(jié)開孔大小的可變孔徑光闌，用來調(diào)節(jié)照明光束孔徑，以與物鏡孔徑角匹配。改變照明方式，可以獲得亮背景上的暗物點(稱亮視場照明)或暗背景上的亮物點(稱暗視場照明)等不同的觀察方式，以便在不同情況下更好地發(fā)現(xiàn)和觀察微細結(jié)構(gòu)。顯微鏡是利用凸透鏡的放大成像原理，將人眼不能分辨的微小物體放大到人眼能分辨的尺寸，其主要是增大近處微小物體對眼睛的張角（視角大的物體在視網(wǎng)膜上成像大），用角放大率M表示它們的放大本領(lǐng)。因同一件物體對眼睛的張角與物體離眼睛的距離有關(guān)，所以一般規(guī)定像離眼睛距離為25厘米（明視距離）處的放大率為儀器的放大率。顯微鏡觀察物體時通常視角甚小，因此視角之比可用其正切之比代替。顯微鏡由兩個會聚透鏡組成，光路圖如圖所示。物體AB經(jīng)物鏡成放大倒立的實像A1B1，A1B1位于目鏡的物方焦距的內(nèi)側(cè)，經(jīng)目鏡后成放大的虛像A2B2于明視距離處。三、動物與器材1.實驗材料：十三張人體組織切片2.實驗器材：光學(xué)顯微鏡四、方法與步驟1.實驗分組2.實驗原理講解3.實驗報告要求4.顯微鏡操作/觀察1）安裝顯微鏡2）檢查3）對光4）調(diào)焦5）低倍鏡(4倍）觀察6）高倍鏡（40倍）觀察5.氣管的假復(fù)層纖毛上皮圖像采集五、實驗結(jié)果偽復(fù)層纖毛柱狀上皮屬于另一種單層柱狀上皮的變異，細胞皆具有纖毛，又可以稱為假復(fù)層纖毛柱狀上皮。之所以稱做偽復(fù)層是因為其在切片下看起來細胞好像多于一層所造成的錯誤觀念；事實上其確為單層上皮，因為所有的細胞皆貼在基底膜上，然而細胞長度不同，造成高低參差不齊的狀況。并非所有的細胞都會延伸到表面形成具纖毛的細胞，這些在下方的細胞通常具分裂的能力，可取代喪失或受損的細胞。2.如何區(qū)別偽復(fù)層上皮與真正的復(fù)層上皮？區(qū)別偽復(fù)層上皮與真正的復(fù)層上皮有以下特征。1）偽復(fù)層上皮的每個細胞皆具有纖毛，其細胞核主要位在上皮的底部三分之二；2）復(fù)層上皮中絕對不會出現(xiàn)纖毛。氣管組織的橫截面，圖片不正確標示在右上角的復(fù)層纖毛上皮即是。偽復(fù)層上皮幾乎只會出現(xiàn)在哺乳類呼吸系統(tǒng)的大型氣體通道中，因此被稱做呼吸上皮。在呼吸道中，纖毛可將含有顆粒的表面黏液往咽的方向推，所以常被描述為黏液織毛自動輸送帶。八、參考文獻《組織學(xué)和胚胎學(xué)》第五版鄒仲之主編人民衛(wèi)生出版