十全大補湯對移植乳腺癌小鼠免疫抑瘤作用的實驗研究

十全大補湯對移植乳腺癌小鼠免疫抑瘤作用的實驗研究【摘要】目的研究十全大補湯對荷瘤小鼠抑瘤作用及對荷瘤小鼠免疫功能的影響。方法以TA2移植性乳腺癌小鼠作為研究對象，給予50%SDT和灌胃，并給予化療，以小鼠的體重、瘤重及脾內(nèi)B淋巴細胞、T淋巴細胞增殖指數(shù)、IL6，TNFα，IL2作為觀察指標。結(jié)果50%SDT可明顯改善荷瘤鼠的一般狀況，抑制腫瘤的生長；明顯增強脾內(nèi)T淋巴細胞的增殖，并調(diào)節(jié)B淋巴細胞的增殖，顯著提高荷瘤小鼠脾細胞的IL-2，IL-6和TNF-α的分泌。結(jié)論SDT可在體內(nèi)抑制腫瘤的生長，并降低化療藥物對機體的免疫損傷作用。

【關(guān)鍵詞】十全大補湯；荷瘤小鼠；抑瘤率；淋巴細胞增殖指數(shù)白細胞介素2；白細胞介素6；腫瘤壞死因子α

Abstract：ObjectiveTostudytheeffectsofShiquanDabuDecoctionontumor-inhibitionandimmunityinmicewithtransplantablemammarycancer.MethodsTA2micewererandomlydividedintofourgroupsaftervaccinationofMA737tumortissue(namedcontrol,50%SDT,CMF,CMF+50%SDT).Theweight,tumorweight,spleencellproliferation，IL6，IL2andTNFαwereresultsshowedthat50%SDTinhibitedthegrowthofthetumor.50%SDTalsoenhancedthelevelofTlymphocyteproliferationandregulatedthelevelofBlymphocyteproliferationandpromotedthespontaneouslysecreteandstimulatedsecreteofIL6，IL2andTNFαinspleencaninhibittumorgrowthandlessenthedamageofimmunitycausedbychemotherapy.

Keywords：ShiquanDabuDecoction;Micewithtumor；Lymphocytecellsproliferation;IL2;IL6;TNFα

十全大補湯(ShiquanDabuTang,SDT)由人參、當歸等10種生藥配伍組方，為氣血雙補劑。近年來國外已有報道十全大補湯可減輕腫瘤病人的化療反應，并可抑制結(jié)腸癌小鼠的肝轉(zhuǎn)移，延長荷瘤小鼠的生存期。本實驗以TA2移植性乳腺癌小鼠作為研究對象，分別給予50%SDT和白開水灌胃，并給予化療，以小鼠的體重、瘤重及脾內(nèi)B淋巴細胞、T淋巴細胞增殖指數(shù)、IL6、TNFα、IL2作為觀察指標，進一步研究十全大補湯對荷瘤小鼠抑瘤作用及對荷瘤小鼠免疫功能的影響，為該方的臨床應用提供用藥依據(jù)。

1材料與方法

藥品十全大補湯：黨參，白術(shù)，茯苓，甘草，當歸，川芎，白芍，熟地黃，黃芪，肉桂均購自保定市藥材公司，經(jīng)本院馮天鑄教授鑒定均為正品。根據(jù)《中國藥典》十全大補丸配方調(diào)配，按湯劑常規(guī)煎熬、過濾并濃縮成100%濃度滅菌后備用。RPMI1640細胞培養(yǎng)液，LPS，ConA，MTT均為Sigma公司產(chǎn)品。

動物

健康雌性TA2小鼠，5～6周齡，體重18～22g，由天津醫(yī)科大學實驗動物科學部提供。

瘤株

移植性小鼠乳腺癌MA737，購自天津醫(yī)科大學實驗腫瘤研究室。

細胞株及細胞因子標準品

TNF敏感細胞株為；IL6依賴細胞株為B9細胞株；IL2依賴細胞株為HT2；重組IL65×105u/ml及重組IL21×106u/ml。

方法

MA737移植

處死荷瘤小鼠，無菌操作下取瘤塊邊緣無壞死組織部分切成2mm×2mm×2mm大小瘤塊(約含2×106個瘤細胞)移植于右側(cè)腹股溝皮下。

動物分組及處理

將上述荷瘤小鼠隨機分為4組，每組8只，1組為對照組，ml/d，水灌胃，2組為單純中藥組，在接種腫瘤后的第3天用50%十全大補湯灌胃，ml/次，1次/d，共14d；3組為化療加中藥組，即在化療同時用50%十全大補湯灌胃，給藥劑量、時間同前；第4組為單純化療組?；煵捎肅MF方案。在接種腫瘤后的第3天開始給藥，1次/周，共兩次。

檢測指標①瘤重及體重的測定：電子天平及扭力天平稱重。②B淋巴細胞和T淋巴細胞增殖反應的測定：采用MTT法［1］。③細胞因子的測定：制備脾細胞懸液，分別設(shè)空白孔和LPS及Con-A刺激孔，CO2孵箱培養(yǎng)48h后，取LPS刺激孔的培養(yǎng)上清測定IL6和TNFα，取ConA刺激孔的培養(yǎng)上清測定IL2。TNFα的測定：采用敏感細胞株法，IL6和IL2的測定采用依賴細胞株MTT法，單位為pg/ml；TNFα測定采用敏感細胞殺傷法，單位為細胞殺傷活性［2］。

數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學處理

實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(±s)表示，采用SPSS軟件進行方差分析進行顯著性檢驗后，進行兩兩比較t檢驗。

2結(jié)果

十全大補湯對荷瘤鼠體重增長及瘤重的影響結(jié)果見表1。表1十全大補湯對荷瘤鼠體重增長及瘤重的影響(略)

結(jié)果顯示：50%SDT組小鼠體重增加明顯高于對照組(P＜)，中藥加化療組小鼠體重的增加明顯高于單純化療組；50%SDT組瘤重明顯低于對照組(P＜)，抑瘤率為44%，50%SDT組小鼠的腫瘤組織與周圍組織界限清楚，無粘連，易分離，而對照組小鼠的腫瘤與皮下組織粘連明顯，不易剝離；中藥加化療組小鼠的瘤重低于單純CMF組，抑瘤率為72%。

十全大補湯對荷瘤鼠T淋巴細胞、B淋巴細胞增殖反應的影響結(jié)果見表2。表2十全大補湯對荷瘤鼠T淋巴細胞、B淋巴細胞增殖反應的影響(略)

結(jié)果顯示：與對照組比較，50%SDT可使荷瘤小鼠的B淋巴細胞刺激指數(shù)下降而使T淋巴細胞刺激指數(shù)增高，50%SDT+CMF組動物的T淋巴細胞刺激指數(shù)亦明顯高于單純CMF組，說明十全大補湯可增強荷瘤動物的細胞免疫功能，改善化療藥物所致的細胞免疫功能損傷。

十全大補湯對荷瘤鼠脾細胞TNF-α及IL-6分泌水平的影響結(jié)果見表3。表3十全大補湯對荷瘤鼠脾細胞TNF-α及IL-6分泌水平的影響，CMF+50%SDT組小鼠的TNFα及IL6的自發(fā)分泌和刺激分泌水平均高于單純CMF組。結(jié)果表明，十全大補湯可增強荷瘤鼠IL6的自發(fā)分泌和刺激分泌水平。

十全大補湯對荷瘤鼠脾細胞

IL2分泌水平的影響結(jié)果見表4。表4十全大補湯對荷瘤鼠脾細胞IL2分泌水平的影響

結(jié)果顯示：SDT組小鼠的IL2的自發(fā)分泌水平明高于其它各組，SDT+CMF組小鼠的IL2自發(fā)分泌水平明顯高于單純CMF組，CMF組IL2自發(fā)分泌水平明顯低于腫瘤對照組，SDT組小鼠的IL-2的刺激分泌水平明高于對照組。表明化療藥物可降低荷瘤小鼠IL2自發(fā)分泌和刺激分泌，十全大補湯可拮抗化療藥物對IL2自發(fā)和刺激分泌的抑制作用，從而提高荷瘤小鼠的免疫功能。

3討論

荷瘤宿主的免疫狀態(tài)與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展存在著極其復雜的關(guān)系，宿主可通過免疫效應機制發(fā)揮抗腫瘤作用，而腫瘤生長過程中也會產(chǎn)生一系列降低或阻斷宿主抗腫瘤免疫的抑制因素，從而促進腫瘤在體內(nèi)的生長［3］。

十全大補湯是益氣補血的代表方，由人參(黨參)、白術(shù)、熟地、茯苓、甘草、川芎、白芍、當歸、黃芪、肉桂等10種生藥組成，具有補氣養(yǎng)血、溫腎陽、滋腎陰等功能?；A(chǔ)和臨床研究均表明，十全大補湯在抑制惡性腫瘤的增殖及轉(zhuǎn)移、增強機體免疫力、減輕放療和化療副作用、增強抗癌藥物的療效、提高患者的一般狀況、延長生存期等方面有較好療效。大西康晴等研究表明十全大補湯可抑制小鼠結(jié)腸癌的肝轉(zhuǎn)移，延長荷瘤小鼠的生存期，并證明其抗腫瘤轉(zhuǎn)移的機制是通過Mφ，T細胞抑制轉(zhuǎn)移通路或巨噬細胞直接作為效應細胞而發(fā)揮細胞毒作用或抑制腫瘤細胞生長的作用而與NK細胞作用無關(guān)［4］。

本實驗以荷瘤近交系小鼠作為研究對象，并與化療藥物對照研究，系統(tǒng)觀察了十全大補湯對荷瘤小鼠的一般狀況、腫瘤生長、脾內(nèi)T，B淋巴細胞增殖，IL2，IL6，及TNF的影響，結(jié)果表明：十全大補湯能改善荷瘤鼠的一般狀態(tài)，增加體重，明顯抑制荷瘤小鼠腫瘤的生長，單純應用十全大補湯可使抑瘤率達到44%，與化療藥物合用可使抑瘤率達到72%，高于單純化療藥物的作用。十全大補湯可改善化療藥物對B細胞增殖的抑制作用，并顯著增強T淋巴細胞的增殖，提高荷瘤小鼠脾細胞的IL2，IL6和TNFа的自發(fā)分泌和刺激分泌，拮抗化療藥物的免疫抑制作用。

【參考文獻】

［1］薛彬.免疫毒理學實驗技術(shù)［M］.北京：北京醫(yī)科大學、中國協(xié)和醫(yī)科大學聯(lián)合出版社，1995：42.

［2］沈關(guān)心，周汝麟.現(xiàn)代免疫實驗技術(shù)［M］.武漢：同濟醫(yī)科大學出版社