免疫組化結果判斷及常見問題的分析演示文稿

免疫組化結果判斷及常見問題的分析演示文稿當前第1頁\共有46頁\編于星期五\2點免疫組化結果判斷及常見問題的分析當前第2頁\共有46頁\編于星期五\2點當前第3頁\共有46頁\編于星期五\2點肝臟：CK8理想著色，膽管上皮細胞強陽性，肝細胞呈不同層次陽性。當前第4頁\共有46頁\編于星期五\2點

panCK（AE1/AE3）在肝臟理想的染色，采用了熱修復。肝細胞膜、膽管強而清晰的著色。背景干凈。當前第5頁\共有46頁\編于星期五\2點一、特異性染色的判斷1.特定的定位

細胞陽性——根據(jù)靶抗原不同而呈現(xiàn)胞膜型、胞漿型或胞核型間質(zhì)陽性——表現(xiàn)為細胞外著色，局限性或彌散性2.染色的不均一性陽性細胞的染色分布不均，片狀或點狀散在分布染色強弱不等，顏色深淺反映抗原量的多少3.排除人為造成的非特異性染色

切片的折疊、刀痕，色素沉著，組織細胞壞死。4.顆粒性顯色

DAB顯色在高倍鏡下呈顆粒狀而非均勻著色。當前第6頁\共有46頁\編于星期五\2點免疫組化標準化照片CK10CD44v6ER當前第7頁\共有46頁\編于星期五\2點當前第8頁\共有46頁\編于星期五\2點當前第9頁\共有46頁\編于星期五\2點當前第10頁\共有46頁\編于星期五\2點當前第11頁\共有46頁\編于星期五\2點當前第12頁\共有46頁\編于星期五\2點合格的免疫組化染色切片

是正確判斷染色結果的基礎和前提

不合格的免疫組化染色切片

容易導致誤判當前第13頁\共有46頁\編于星期五\2點C-erbB-2優(yōu)良中差當前第14頁\共有46頁\編于星期五\2點4321ER當前第15頁\共有46頁\編于星期五\2點子宮內(nèi)膜PR染色，修復不足子宮內(nèi)膜PR染色，修復良好

PR當前第16頁\共有46頁\編于星期五\2點編號陽性片待檢片陰性對照結論12345－＋－＋＋－＋＋－＋－＋－－－操作失誤，抗體失效非特異性著色陽性片不含靶抗原待檢片不含定位抗原待檢片含定位抗原二、染色結果的判斷當前第17頁\共有46頁\編于星期五\2點PCNAS-P×400S-P×4001-dayCM4-dayCM陽性強度20×10視野下，隨機選取5個視野，測100個陽性細胞的平均光密度即為此片的陽性強度。三、結果分析當前第18頁\共有46頁\編于星期五\2點P53陽性細胞百分比計數(shù)100個瘤細胞，其中陽性細胞的比例：＜5%（－）5%~30%（＋）30%~50%（＋＋）＞50%（＋＋＋）當前第19頁\共有46頁\編于星期五\2點PCNABarnes法A：瘤細胞顯色有無及深淺0（不著色）1（淺黃色）2（棕黃色）3（棕褐色）B：顯色細胞的比例1（1%~10%）2（11%~50%）3（51%~80%）4（＞80%）評分=A×B0分：陰性1~4分：弱陽性＞4分：強陽性當前第20頁\共有46頁\編于星期五\2點膠原染色陽性面積百分比40×10視野，選取5個視野，計算陽性區(qū)域面積占整個參考面積的百分率。當前第21頁\共有46頁\編于星期五\2點CD34Weidner法（MVD計數(shù)）孤立的棕黃色細胞族代表一條微血管。低倍鏡下找到組織內(nèi)密度最高區(qū)域。40×10視野下計數(shù)微血管數(shù)目。當前第22頁\共有46頁\編于星期五\2點K-rasVEGF當前第23頁\共有46頁\編于星期五\2點附：定量分析——圖象處理系統(tǒng)

1、圖象處理：利用儀器按照不同的目的進行圖象的修正、變換、特征提取和測量。1）“狹義”指消除圖象的模糊不清部分，校正畸變。2）“廣義”包括對圖象的結構分析，提取特征進行測量。

當前第24頁\共有46頁\編于星期五\2點2、圖象處理系統(tǒng)組成圖象輸入（顯微鏡、掃描儀）圖象處理運算（病理圖文分析軟件）圖象、數(shù)據(jù)輸出

當前第25頁\共有46頁\編于星期五\2點

3、圖象處理系統(tǒng)功能

幾何形態(tài)學定量分析細胞核、漿的大小、面積、核漿比；細胞分布密度、個數(shù)；血管、腺體的面積、密度；間質(zhì)的面積

免疫組織化學分析按著色灰度分類，計算陽性、陰性細胞的面積含量DNA倍體分析計算正常細胞及腫瘤細胞DNA含量，給出倍體參數(shù)、DNA參數(shù)分布直方圖

AgNOR分析顆粒分析：數(shù)目、大小、面積、比例

當前第26頁\共有46頁\編于星期五\2點當前第27頁\共有46頁\編于星期五\2點四、免疫組化異常著色及對策1.非特異性著色及其對策非特異性著色原因對策操作過程沖洗不充分每步?jīng)_洗3×5min內(nèi)源性過氧化物酶3％H2O2封閉內(nèi)源性生物素使用生物素阻斷試劑盒阻斷電荷吸附非免疫動物血清封閉抗體不純采用單克隆抗體切片制片不當改善取材和制片加試劑后切片干燥防止切片干燥當前第28頁\共有46頁\編于星期五\2點內(nèi)源性生物素—腎小管當前第29頁\共有46頁\編于星期五\2點內(nèi)源性生物素—淋巴結轉移性甲狀腺腺癌當前第30頁\共有46頁\編于星期五\2點蛻膜組織部分胞核PR陽性，血管內(nèi)紅細胞過氧化物酶顯色當前第31頁\共有46頁\編于星期五\2點嗜酸性粒細胞中細胞色素顯色當前第32頁\共有46頁\編于星期五\2點吞噬細胞內(nèi)

含鐵血黃素

當前第33頁\共有46頁\編于星期五\2點壞死組織著色：AE1/AE3當前第34頁\共有46頁\編于星期五\2點壞死組織著色當前第35頁\共有46頁\編于星期五\2點交叉反應：乳腺ki-67組織細胞胞漿著色當前第36頁\共有46頁\編于星期五\2點黑色素瘤，細胞內(nèi)含黑色素，呈紫黑色，HE染色當前第37頁\共有46頁\編于星期五\2點灶狀著色：機械原因著色當前第38頁\共有46頁\編于星期五\2點CyclinD1套細胞淋巴瘤全片著色當前第39頁\共有46頁\編于星期五\2點全片著色當前第40頁\共有46頁\編于星期五\2點邊緣著色當前第41頁\共有46頁\編于星期五\2點“陰陽臉”著色當前第42頁\共有46頁\編于星期五\2點氣泡當前第43頁\共有46頁\編于星期五\2點非特異性著色原因對策操作過程沖洗不充分每步?jīng)_洗3×5min內(nèi)源性過氧化物酶3％H2O2封閉內(nèi)源性生物素使用生物素阻斷試劑盒阻斷電荷吸附非免疫動物血清封閉抗體不純采用單克隆抗體切片制片不當改善取材和制片加試劑后切片干燥防止切片干燥非特異性著色及其對策當前第44頁\共有46頁\編于星期五\2點無信號片CD30