蠶豆微核實(shí)驗(yàn)

方便面調(diào)料對(duì)蠶豆根尖細(xì)胞的遺傳毒性研究姓名：周敏同組者：白霞、閆媛媛、郭凱紅、胡雅琦、孔麗娜（生物系 生物科學(xué)102班學(xué)號(hào)2010131234 指導(dǎo)老師:郝雪峰）摘要運(yùn)用蠶豆根尖細(xì)胞微核技術(shù)，以微核千分率和污染指數(shù)作為指標(biāo)，研究豫竹方便面調(diào)料的水溶液對(duì)蠶豆根尖細(xì)胞的遺傳毒性效應(yīng)。豫竹方便面調(diào)料水溶液對(duì)蠶豆根尖進(jìn)行污染處理后，通過觀察微核的形態(tài)，記錄微核的數(shù)目，測(cè)定蠶豆根尖細(xì)胞的微核率，并且在實(shí)驗(yàn)中以未經(jīng)污染處理的蠶豆根尖作為對(duì)照，來比較測(cè)定該方便面調(diào)料的毒性.該方便面調(diào)料的水溶液具有輕度傷害，利用蠶豆根尖微核技術(shù)對(duì)其污染效應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測(cè)和評(píng)價(jià)既簡(jiǎn)便又比較可靠。GenotoxiceffectsofaqueoussolutionofViciafabaroottipcellsusingViciafabaroottipcellswithmicronucleus,themicronucleusrateandthepollutionindexasanindicatorofHenanbambooinstantnoodles.OnViciafaba,pollutiontreatment,Henanbambooinstantnoodlessolutiontoobservetheformofmicronuclei,thenumberofrecordedmicronucleimeasuredmicronucleusrateofViciafabaroottipcellsofViciafabaroottipandintheexperimentwithoutpollutiontreatmentasacontrol,tocomparethedeterminationofthetoxicityoftheinstantnoodles.aqueoussolutionoftheinstantnoodleswithamildinjury,theuseofmicronucleustheirpollutioneffectsmonitoringandevaluationofbothsimpleandrelativelyreliable.關(guān)鍵詞蠶豆微核實(shí)驗(yàn)豫竹方便面調(diào)料 核變異引言微核（Nicronucleus，MCN）是真核生物細(xì)胞中的一種異常結(jié)構(gòu)，它是由于細(xì)胞受到損傷后，由細(xì)胞分裂過程中喪失著絲粒的染色體斷片或落后染色體產(chǎn)生的。這些斷片或染色體在分裂過程中行動(dòng)滯后，在分裂末期不能進(jìn)入主核，便形成了主核之外的核塊。蠶豆根尖細(xì)胞微核技術(shù)已發(fā)展的相當(dāng)成熟，具有較高的靈敏性和可能性，作為檢測(cè)化學(xué)品遺傳毒性的方法，得到了廣泛應(yīng)用［1-2］。而且在測(cè)定監(jiān)測(cè)淡水污染物和檢測(cè)化學(xué)誘變劑的研究已列入國家生物監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范（水環(huán)境部分），并推廣應(yīng)用于大氣、廢水、土壤等的致突變活性檢[3]。但目前關(guān)于檢測(cè)食物的誘變活性報(bào)道較少。方便面作為一種速食小吃早已被人們接受，但其調(diào)料中的一些成分會(huì)在食用過程中滲透到血液中，導(dǎo)致人體細(xì)胞的染色體畸變。此外，含調(diào)料的廢水排出后，會(huì)造成水環(huán)境方面的污染。因此，本文以蠶豆根尖作為實(shí)驗(yàn)材料，來探討調(diào)料的遺傳毒性，旨在為其存在的隱患提供一個(gè)參考依據(jù)。1、材料與用品1.1實(shí)驗(yàn)材料：蠶豆1.2實(shí)驗(yàn)器材和試劑顯微鏡、試管、蠶豆培養(yǎng)盆、紗布、毛巾、三角瓶、載玻片、蓋玻片、溶有豫竹方便面調(diào)料的水、卡諾氏固定液（用乙醇和冰醋酸以3:1（v/v）混合配制）、鹽酸（1mol/L）;Giemsa染液2、實(shí)驗(yàn)方法2.1浸種按實(shí)驗(yàn)需要選取大小均勻、飽滿的蠶豆種子30粒，直接放入盛水的塑料盆中，在常溫下浸泡1天，期間要注意換水。2.2催芽待種子吸脹后，用潮濕的紗布松散包裹置于盆中，紗布上載蓋一層濕水的毛巾，催芽約1—2天。2.3處理根尖選取初生根生長良好的種子，放入盛有被測(cè)液的紗布中，進(jìn)行根尖處理。另一些繼續(xù)清水培養(yǎng)（作為對(duì)照組）。2.4根尖細(xì)胞恢復(fù)培養(yǎng)處理后的種子用自來水浸洗，洗凈后再置入潮濕紗布中，再恢復(fù)培養(yǎng)一天左右。2.5取材、制片2.5.1固定

將恢復(fù)后的種子，從根尖頂端切下1cm長的幼根，用甲醇：冰醋酸（3：1）液固定24小時(shí)。2.5.2解離用蒸餾水浸洗固定好的幼根，吸凈蒸餾水，加入6mol/L鹽酸將幼根浸沒，室溫下酸解10分鐘，幼根軟化即可。2.5.3染色吸去鹽酸，用蒸餾水浸洗幼根三次，每次1?2分鐘。滴加染液，染色20?30分鐘，截下1?2mm左右長的根尖，加蓋玻片，壓片觀察。3、結(jié)果記錄及處理首先在顯微鏡低倍鏡下找到分散均勻的分生區(qū)組織細(xì)胞，分裂相較多的部位，再轉(zhuǎn)至高倍鏡下進(jìn)行觀察。微核識(shí)別的標(biāo)準(zhǔn)：①微核大小在主核1/3以下，并與主核分離；②小核的著色與主核一致或稍淺；③小核形態(tài)呈圓形、橢圓形或不規(guī)則型。每一處理觀察3個(gè)根尖，每個(gè)根尖數(shù)1000個(gè)細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)其中含微核的細(xì)胞數(shù)，然后平均，即為該處理的MCN%，即微核千分率，以其作為指標(biāo)按下述公式測(cè)出水樣的污染指數(shù)，計(jì)算各測(cè)試樣品（包括對(duì)照組）微核千分率（MCN%。），采用“污染指數(shù)”判別計(jì)算各測(cè)試樣品微核千分率，可避免因?qū)嶒?yàn)條件等因素帶來的MCN%。本底的波動(dòng)。對(duì)于蠶豆微核實(shí)驗(yàn)中的有關(guān)計(jì)算可采用以下公式:微核千分率（MCN%o）二某測(cè)試樣點(diǎn)（或?qū)φ战M某測(cè)試樣點(diǎn)（或?qū)φ战M）觀察到的MCN數(shù)微核千分率（MCN%o）二某測(cè)試樣點(diǎn)（或?qū)φ战M某測(cè)試樣點(diǎn)（或?qū)φ战M）觀察到的MCN數(shù)）觀察到的細(xì)胞數(shù)X1000%。污染指數(shù)（PI）=樣品實(shí)測(cè)微核千分率平 均值標(biāo)準(zhǔn)水（對(duì)照組）微核千分率平均值根據(jù)《全國生物技術(shù)監(jiān)測(cè)規(guī)范一蠶豆根尖微核技術(shù)》規(guī)定的污染指數(shù)劃分標(biāo)準(zhǔn)，采用污染指數(shù)（PI）值來劃分受污染程度。此方法可避免因?qū)嶒?yàn)條件等因素帶來的MCN%本底的波動(dòng)，標(biāo)準(zhǔn)見表1[5]。凡數(shù)值在上、下限時(shí)定為上一級(jí)污染。表1 污染指數(shù)PI值評(píng)價(jià)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)表TablelPollutionIndexforevaluationofwaterqualitystandardsvalueofPItable污染指數(shù)PI值 水質(zhì)污染等級(jí)

0?1.5基本無污染1.5?2.0輕污染2.0?3.5中污染3.5以上重污染表2 誘變劑誘發(fā)蠶豆根尖細(xì)胞產(chǎn)生微核統(tǒng)計(jì)表根尖實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組123123微核數(shù)（個(gè)/1000）644233MCN%4.6672.667污染指數(shù)（PI）1.749顯微鏡下觀察的微核實(shí)物圖Observedunderthemicroscopeofmicro-verificationplans4、分析與小結(jié)由圖可知：微核是喪失著絲粒的染色體片斷，著色與主核一致，呈圓形或杏仁狀的結(jié)構(gòu)，有的近似橢圓形，微核游離于主核之外，大小在主核的1/3以下。由表可知：被污染的根尖MCN%為4.667,未處理的根尖MCN%為2.667。則污染指數(shù)（PI）為1749，屬于輕度污染。由實(shí)驗(yàn)可知，方便面調(diào)料對(duì)人體細(xì)胞遺傳物質(zhì)損傷有潛在危險(xiǎn)，其水樣排入水體也對(duì)水環(huán)境有潛在的隱患，應(yīng)引起人們的高度重視，在食用方便面時(shí)，盡量不放調(diào)料包，將其存在的毒性作用降到最低，達(dá)到安全、保護(hù)健康的作用?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】［1］ 鐘曉芝，錢曉薇.明磯對(duì)蠶豆根尖和大蒜毒性效應(yīng)的細(xì)胞遺傳學(xué)比較研究】J］.江西科學(xué)，2003,21：101---105［2］ 張江麗，陳海峰，菅立峰，等硫酸鎂對(duì)蠶豆根尖細(xì)胞遺傳毒性的研究［J］，環(huán)境與健康雜志，2008,25(5)：420---422［3］ 王蕊芳，金志玉，孔祥生，吳玉平，李玉蘭，羅明.撫仙湖無機(jī)污染物化學(xué)背景值及動(dòng)物體內(nèi)致突變性評(píng)定［J］動(dòng)物學(xué)研究1999［4］ KongZM