實(shí)驗(yàn)六血糖及血清膽固醇測(cè)定

一、酶法（GOD-POD）測(cè)血清葡萄糖含量當(dāng)前第1頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆掌咸烟茄趸阜y(cè)定血糖含量的原理和方法掌握測(cè)定血糖的臨床意義當(dāng)前第2頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)鄰甲苯胺法酶法：

血糖的測(cè)定方法：準(zhǔn)確度、靈敏度高，穩(wěn)定性好葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化物酶偶聯(lián)法（GOD-POD）實(shí)驗(yàn)原理當(dāng)前第3頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)偶聯(lián)酶法測(cè)血糖葡萄糖﹢O2H2O2葡萄糖酸﹢葡萄糖氧化酶（GOD）H2O2﹢4-氨基安替比林H2O醌亞胺染料﹢過(guò)氧化物酶（POD）紅色當(dāng)前第4頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)

紅色醌亞胺染料在500nm處具有吸收峰

采用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比法可計(jì)算得到樣品中葡萄糖濃度

紅色醌亞胺染料的生成量與葡萄糖含量成正比當(dāng)前第5頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)實(shí)驗(yàn)器材試管1.5×5cm（×3）、試管架吸量管2mL（×1）、洗耳球微量加樣器：20μl的Pipetman恒溫水浴箱離心機(jī)、離心管10ml（×2）當(dāng)前第6頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)實(shí)驗(yàn)試劑

葡萄糖測(cè)定試劑盒：原裝試劑在2～8℃避光保存，有效期15個(gè)月?；旌虾?～8℃可穩(wěn)定1個(gè)月，室溫可穩(wěn)定3天葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液：100mg/Dl(5.55mmol/L)實(shí)驗(yàn)樣品：新鮮無(wú)溶血血清當(dāng)前第7頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)實(shí)驗(yàn)操作1.酶工作液配置（直接用試劑盒）2.標(biāo)本處理抽取全血3-5mL37℃保溫15分鐘3000轉(zhuǎn)/min離心10min取上清液備用當(dāng)前第8頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)3.取3支干凈干燥的小試管按表加入試劑4.各管加好后混勻，置37℃水浴30min，0.5cm光徑比色杯，以空白試劑調(diào)零，在500nm波長(zhǎng)下比色先加體積少的，再加多的管號(hào)試劑空白管標(biāo)準(zhǔn)管待測(cè)管蒸餾水(μL）10————標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖(μL）——10——待測(cè)血清(μL）————10酶工作液(mL）1.51.51.5當(dāng)前第9頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)液吸取后應(yīng)立即上蓋，以防水分揮發(fā)工作液混濁或有絮狀物視為失效本法特異性高，維生素C，谷胱甘肽，左旋多巴引起負(fù)偏差

10μl液體必須全部溶于1.5ml酶工作液中注意

10μL液體不易精確加入，實(shí)驗(yàn)時(shí)要仔細(xì)檢查移液槍的密封性。此外，移液槍外壁不要沾有液體。當(dāng)前第10頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)二、酶法（COD-PAP）

測(cè)血清總膽固醇(TC)當(dāng)前第11頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆彰阜y(cè)定血清總膽固醇含量的原理熟悉酶法測(cè)定血清總膽固醇含量的操作方法了解總膽固醇測(cè)定的臨床意義當(dāng)前第12頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)膽固醇酯酶+FFA膽甾烯酮+H2O2膽固醇氧化酶COD實(shí)驗(yàn)原理+4-氨基安替比林+酚醌亞胺過(guò)氧化物酶H2O2PAP膽固醇酯

游離膽固醇當(dāng)前第13頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)紅色的醌型化合物在510nm處有吸收峰，顏色深淺與總膽固醇的濃度成正比。采用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比法可計(jì)算其含量?？偰懝檀己空⒖贾捣秶鸀楫?dāng)前第14頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)實(shí)驗(yàn)器材小試管（×3）、試管架刻度吸量管2mL（×1）、洗耳球微量加樣器(20μl)恒溫水浴箱離心機(jī)、離心管10ml（×2）當(dāng)前第15頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)實(shí)驗(yàn)試劑R1液：磷酸鹽緩沖液、對(duì)氯酚R2液：4-氨基安替比林、酶膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液：5.2mmol/L當(dāng)前第16頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)實(shí)驗(yàn)步驟

1.工作試劑配制：R110ml+R21ml混合，可保存1周

2.

標(biāo)本處理:抽取全血3~5ml37℃保溫15分鐘3000轉(zhuǎn)/min離心10min取上清液備用最適樣品為當(dāng)日空腹采集無(wú)溶血無(wú)乳糜的血清。當(dāng)前第17頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)3.取3支小試管編號(hào)，按表加入試劑管號(hào)試劑空白管標(biāo)準(zhǔn)管待測(cè)管蒸餾水（μl）10——標(biāo)準(zhǔn)液（μl）—10—樣品（μl）——10工作試劑（ml）0.60.60.6充分混合，37℃水浴15分鐘蒸餾水（ml）1.01.01.00.5cm光徑比色杯，以空白試劑調(diào)零，在510nm波長(zhǎng)下比色當(dāng)前第18頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)注意事項(xiàng)

最后加酶工作試劑，各管反應(yīng)時(shí)間應(yīng)一致工作試劑防止葡萄糖和甘油三酯污染若需檢測(cè)游離膽固醇含量，將酶試劑去掉膽固醇酯酶即可當(dāng)前第19頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論計(jì)算結(jié)果記錄結(jié)果A標(biāo)=標(biāo)準(zhǔn)管吸光度A待=待測(cè)管吸光度

C待=A待A標(biāo)×C標(biāo)C標(biāo)=血液中葡萄糖或膽固醇濃度C標(biāo)=標(biāo)準(zhǔn)液中葡萄糖或膽固醇濃度當(dāng)前第20頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)血清葡萄糖測(cè)定臨床意義病理性高血糖：常見于糖尿??；顱內(nèi)壓升高，如顱內(nèi)出血，顱外傷等；脫水引起的高血糖，如嘔吐、腹瀉和高熱等也可使血糖升高；胰島α細(xì)胞瘤等

病理性低血糖：常見于胰島素分泌異常、肝功能嚴(yán)重衰退等；嚴(yán)重肝病患者，肝臟不能有效地調(diào)節(jié)血糖；糖原累積癥。當(dāng)前第21頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)危險(xiǎn)閾值：高膽固醇血癥：＞6.2mmol/LTC增高：常見于動(dòng)脈粥樣硬化、高脂蛋白血癥、梗阻性黃疸、腎病綜合征、甲狀腺功能低下、慢性腎功能衰竭、糖尿病等TC降低：常見于低脂蛋白血癥、貧血、肝臟疾病、營(yíng)養(yǎng)吸收不良、惡性腫瘤等。血清總膽固醇測(cè)定臨床意義當(dāng)前第22頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)思考題

正常人的血糖為什么能維持在一定水平?胰島素和腎上腺素對(duì)血糖有何影響?

為什么?

測(cè)定血清總膽固醇的臨床意義有哪些？返回目錄當(dāng)前第23頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)

722型分光光度計(jì)能在可見光譜區(qū)域內(nèi)對(duì)樣品物質(zhì)作定量分析。廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥衛(wèi)生、臨床檢驗(yàn)、生物化學(xué)、石油化工、環(huán)境保護(hù)、質(zhì)量控制，是生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用分析儀器之一。當(dāng)前第24頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)原理不同的物質(zhì)對(duì)光的吸收具有選擇性，有其各自的吸收光譜。當(dāng)某單色光通過(guò)溶液時(shí)，能量會(huì)被吸收而減弱，能量減弱程度和物質(zhì)濃度有一定關(guān)系當(dāng)前第25頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)“MODE”鍵：用于設(shè)置測(cè)試方式“100%T”鍵：用于自動(dòng)調(diào)整100.0%T(100.0透射比)或零吸光度

“0%T”鍵：用于自動(dòng)調(diào)整零透射比“波長(zhǎng)設(shè)置”旋鈕：用于設(shè)置分析波長(zhǎng)722E型當(dāng)前第26頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)比色皿的使用方法拿比色皿時(shí)，只能拿毛玻璃面，不能碰透光面，以免污染

使用前，一般先用水沖洗，再用蒸餾水潤(rùn)洗，還要用所盛溶液潤(rùn)洗外壁的水用擦鏡紙或吸水紙沾干，以保護(hù)透光面

所盛液體量約占總體積的3/4，即距管口1cm左右

當(dāng)前第27頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)722E型分光光度計(jì)操作方法1.預(yù)熱儀器（關(guān)蓋，拉半檔，T模式）

2.選定波長(zhǎng)

5.調(diào)T=100％

(關(guān)蓋，拉桿全推進(jìn)，光路對(duì)著空白管）4.調(diào)T=

0%(關(guān)蓋，拉半檔，光路對(duì)著1、2格間的擋板）

3.放入樣品（光面對(duì)著光路的方向）7.將模式調(diào)至“A”，拉動(dòng)拉桿至標(biāo)準(zhǔn)管和樣本管，分別測(cè)定A值并記錄8.按回“T”模式，推回半檔的位置，拿出比色皿，關(guān)機(jī)

6.重復(fù)4-5步至儀器顯示數(shù)值穩(wěn)定。當(dāng)前第28頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)返回光路當(dāng)前第29頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)返回光路當(dāng)前第30頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)返回當(dāng)前第31頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)注意事項(xiàng)每更換一次波長(zhǎng)，重新調(diào)“0”和“100%”；每次做完實(shí)驗(yàn)后，應(yīng)立即洗凈比色皿

為了防止光電管疲勞，不測(cè)定時(shí)必須將光路切斷，以延長(zhǎng)光電管使用壽命

當(dāng)儀器停止工作時(shí)，切斷電源，并用套子蓋住儀器，做好使用登記

當(dāng)前第32頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)朗伯比爾定律：A=εclε：摩爾吸光系數(shù)

c：溶液的濃度

l：液層的厚度

A：物質(zhì)的吸光度

當(dāng)某單色光通過(guò)溶液時(shí)，其能量就會(huì)被吸收而減弱，光能量減弱的程度和物質(zhì)的濃度有一定的比例關(guān)系，也即符合于比色原理---朗伯-比耳定律

當(dāng)前第33頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論2.計(jì)算結(jié)果1.記錄結(jié)果A標(biāo)=標(biāo)準(zhǔn)管吸光度A待=待測(cè)管吸光度C待=A待A標(biāo)×C標(biāo)C標(biāo)=血液中葡萄糖濃度C標(biāo)=標(biāo)準(zhǔn)液中葡萄糖濃度當(dāng)前第34頁(yè)\共有36頁(yè)\編于星期四\17點(diǎn)

C標(biāo)

=5.55mmol