疫血液學(xué)實驗的質(zhì)量控制課件

免疫血液學(xué)實驗的質(zhì)量控制廣州血液中心

汪傳喜1醫(yī)學(xué)ppt2006年衛(wèi)生部頒布的《血站實驗室質(zhì)量管理規(guī)范》對血站免疫血液學(xué)實驗提出了具體要求。許多因素會影響免疫血液學(xué)實驗結(jié)果：儀設(shè)備器（離心機、冰箱、孵育箱、加樣器）；檢驗試劑（定型血清、標(biāo)準(zhǔn)細胞、其它試劑）；實驗方法（實驗的選擇、對照實驗、環(huán)境）；實驗室相關(guān)文件（標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程、標(biāo)記、登記、記錄、報告）等影響。如何對相關(guān)因素進行控制以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，對免疫血液學(xué)實驗具有重要意義。

2醫(yī)學(xué)ppt一、免疫血液學(xué)檢測基本要求

1.

對血液免疫血液學(xué)檢測項目、方法和結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)如下：ABO血型鑒定，檢測方法為直接血凝試驗，檢測結(jié)果以正反定型相符合方可確定其血型。如正反定型不符，應(yīng)作進一步試驗。ABO亞型鑒定，檢測方法為直接血凝試驗、血凝抑制試驗、吸收放散試驗，根據(jù)病史和以上試驗結(jié)果，確定被檢者血型。3醫(yī)學(xué)pptRH系統(tǒng)血型鑒定，檢測方法為直接血凝試驗或抗人球蛋白試驗，檢測結(jié)果以呈凝結(jié)反應(yīng)為陽性，無凝結(jié)反應(yīng)為陰性。RH(D)陰性確認，檢測方法為血凝試驗、抗人球蛋白試驗，以三個不同克隆株或不同人的IgG抗D血清進行檢測，全部不凝為RH陰性，部分凝結(jié)為D變異型。4醫(yī)學(xué)ppt抗體篩選和抗體鑒定，檢測方法為直接血凝試驗、抗人球蛋白試驗、聚凝胺試驗。檢測結(jié)果呈無凝結(jié)反應(yīng)，為抗體篩選陰性，反之，抗體陽性。并確定其特異性。交叉配血，檢測方法為直接血凝試驗、抗人球蛋白試驗、聚凝胺試驗。檢測結(jié)果呈無凝結(jié)、無溶血反應(yīng)為配合。5醫(yī)學(xué)ppt

2.對血液免疫血液學(xué)檢測項目，應(yīng)使用不同廠商生產(chǎn)的試劑，對每項試驗均要作陰陽性對照。3.實驗室的基本設(shè)備應(yīng)包括離心機、水浴箱、顯微鏡、各種冷凍冷藏設(shè)備及其他專用設(shè)備。集中化檢測實驗室應(yīng)配備與其功能相適應(yīng)的檢測設(shè)備。應(yīng)對實驗室的關(guān)鍵設(shè)備進行確認，定期校準(zhǔn)和維護。6醫(yī)學(xué)ppt4.

建立和實施試劑的管理程序，包括：4.1試劑的評估程序，包括生產(chǎn)商和供應(yīng)商的（國家規(guī)定的相應(yīng)）資質(zhì)，試劑的技術(shù)要求。4.2試劑的確認程序，包括實施確認的人員、方法、質(zhì)量控制方法、接受標(biāo)準(zhǔn)、每批試劑投入使用前應(yīng)進行確認。4.3試劑的庫存管理程序，應(yīng)包括試劑的貯存條件和庫存量的監(jiān)控，試劑應(yīng)在有效期內(nèi)使用。7醫(yī)學(xué)ppt5.建立和實施實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制程序，其基本要求如下：5.1在每次試驗時，觀查試劑是否有不正常外觀，包括試劑紅細胞有無明顯的溶血或混濁：血清試劑無沉淀物和顆?；蚰z狀物形成。5.2在每項試驗中，注意試劑敏感性和特異性：ABO正定型陰陽性對照細胞反應(yīng)需清晰明確：反定型與抗A、抗B（抗AB）反應(yīng)需清晰。5.3RH(D)血型試劑與已知的陽性和陰性質(zhì)控細胞反應(yīng)清晰。5.4抗人球蛋白試驗質(zhì)控細胞與抗人球蛋白試劑反應(yīng)有1+～2＋，與生理鹽水反應(yīng)陰性。8醫(yī)學(xué)ppt5.5抗球蛋白試劑（抗IgG和抗C3d）應(yīng)與任何ABO血型的非致敏紅細胞與相容的血清孵育后無溶血和凝集反應(yīng)；與被稀釋的抗IgG(D)和紅細胞的敏感性凝集在顯微鏡下可見1+～2+。5.6抗體篩選和鑒定細胞（純合子劑量效應(yīng)），需用在生理鹽水中反應(yīng)弱的抗P和抗人球蛋白中反應(yīng)1+～2+的抗D來測定。5.7應(yīng)實施日常的質(zhì)控試驗記錄，包括試驗的反應(yīng)性，商業(yè)來源試劑的批號，試驗日期和試驗者的簽名。9醫(yī)學(xué)ppt6.建立對新的試劑進行檢測程序，新的試劑應(yīng)在常規(guī)工作中試用一周，或至少做五十份標(biāo)本，包括2～3份ABO亞型和2～3份弱D抗原。7.完成檢測后的血清或血漿標(biāo)本，應(yīng)在2～8℃的條件下保存2周。10醫(yī)學(xué)ppt練習(xí)寫一份購買ABO血型試劑和紅細胞試劑的步驟說明，并設(shè)計試劑認證的策略11醫(yī)學(xué)ppt試劑認證的原則

注意：試劑必須具有：特異性可接受的親和力和效價無污染微生物檢測為陰性不引起溶血標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)識識別顏色盡可能是單克隆12醫(yī)學(xué)ppt試劑必須標(biāo)有：特異性批號生產(chǎn)日期有效期生產(chǎn)商廠保存條件13醫(yī)學(xué)ppt試劑的說明書中必須附有的其它信息：使用方法克隆的名稱/編號使用的限制條件儲存標(biāo)準(zhǔn)如果需要還可以有以下的內(nèi)容：CE/FDA的證書或相關(guān)的證書14醫(yī)學(xué)ppt說明書也要有實際運用時的考慮事項，如：體積一滴的體積瓶子質(zhì)地（玻璃/塑料）供應(yīng)和輸送如果購買試劑，需要給出派送的各個細節(jié)要求。相同批號的試劑至少能保證用到一年。15醫(yī)學(xué)ppt二、免疫血液學(xué)實驗的質(zhì)量控制

1、免疫血液學(xué)實驗的影響因素1.1設(shè)備包括離心機、水浴箱、顯微鏡、各種冷凍冷藏設(shè)備及其他專用設(shè)備。16醫(yī)學(xué)ppt離心機，應(yīng)使用血庫專用離心機。要注意的是離心力≠離心轉(zhuǎn)速，離心力還與轉(zhuǎn)子的半徑有關(guān)，標(biāo)準(zhǔn)的離心力900~1000g。不同的實驗要求的離心力是不同的，離心力過高，易形成亞型判斷失誤或假陽性離心力/離心時間也影響實驗結(jié)果：定型、各類判讀結(jié)果的試驗離心15秒（1000gor3400rpm）；各類洗滌細胞的試驗離心60秒。離心機每六個月應(yīng)校正一次，以保證其準(zhǔn)確性。水浴箱使用的關(guān)鍵是控制其溫度，有時其自帶的溫度計不準(zhǔn)確，要另用溫度計測試水溫。冷藏設(shè)備要注意溫度和電源，要定時記錄溫度，保證溫度在正常允許范圍。17醫(yī)學(xué)ppt1.2試劑常用的試劑有：試劑抗血清抗-A,抗-B,抗-AB,抗-D；其他血型試劑；抗人球蛋白血清。試劑紅細胞：A、B細胞；篩選細胞(O1,O2)，抗體篩選譜細胞，Coombs質(zhì)控細胞(IgG-致敏細胞)。反應(yīng)增效劑：Liss,LIM等。18醫(yī)學(xué)ppt嚴格試劑管理程序，包括：1、試劑生產(chǎn)商和供應(yīng)商資質(zhì)，生產(chǎn)的技術(shù)要求。2、試劑的確認程序，每批試劑使用前進行確認。3、試劑的包裝和運輸。4、試劑的庫存管理，包括試劑的貯存條件和庫存量，在有效期內(nèi)使用。19醫(yī)學(xué)ppt

ABO和Rh(D)抗血清的最低標(biāo)準(zhǔn)(衛(wèi)生部）

抗血清試驗細胞效價* 親和力(sec)Anti-A A1 128 15A2 64 30 A2B 64 45Anti-B B 12815Anti-D R1r（DdCcee)16 60*無稀釋血清與3％相應(yīng)紅細胞抗原在鹽水試管法3＋至4＋20醫(yī)學(xué)ppt用于ABO反定型的試劑紅細胞A細胞-與抗A，抗A1反應(yīng)4＋，與抗B無反應(yīng)B細胞-與抗B反應(yīng)4＋，與抗A，抗A1無反應(yīng)A&B細胞盡可能不表達M.Lewis，P1抗原21醫(yī)學(xué)ppt

1．3實驗方法常用的免疫血液學(xué)實驗是紅細胞凝集實驗，包括直接凝集實驗和間接凝集實驗。應(yīng)用于血型檢測和抗體篩選、鑒定、交叉配血。不同的檢測項目應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)膶嶒灧椒?。?yīng)制定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程并嚴格執(zhí)行操作規(guī)程。22醫(yī)學(xué)ppt1．4實驗記錄實驗記錄是免疫血液學(xué)檢測的重要過程，應(yīng)實時記錄，不可憑想象過后補記錄。23醫(yī)學(xué)ppt2、免疫血液學(xué)實驗質(zhì)量控制內(nèi)容任何試驗必須設(shè)置對照：包括陰、陽性對照。用已知的標(biāo)準(zhǔn)紅細胞或標(biāo)準(zhǔn)抗血清檢測未知的血清或紅細胞。只有當(dāng)對照試驗結(jié)果正確時，才可以判斷待檢測的結(jié)果。24醫(yī)學(xué)ppt（1）、血型檢測ABO血型定型：要同時進行正反定型，以互相驗證。正反定型不一致時，不能判斷結(jié)果，要重復(fù)試驗，以查明原因。25醫(yī)學(xué)ppt

處理:不同批號試劑、不同技術(shù)人員分別檢測，血型不一致一定要在輸血前解決。*正反定型時分別用各型標(biāo)準(zhǔn)血清,標(biāo)準(zhǔn)紅細胞對照比較*檢測分泌液(如唾液)中ABH血型物質(zhì)*用單克隆抗-A,抗-B檢測McAb:特異性強；效價高；親和力強，反應(yīng)速度快；易于標(biāo)準(zhǔn)化；無交叉反應(yīng)；成本低，可大量生產(chǎn)。*PCR檢測*家系調(diào)查26醫(yī)學(xué)ppt

血型定型差錯的原因有技術(shù)性的，也有血型系統(tǒng)本身特性造成的。技術(shù)性錯誤的原因：1.血液標(biāo)本弄錯，張冠李戴(無樣本送檢與驗收的SOP)27醫(yī)學(xué)ppt例：患者女，李×芝，39歲，農(nóng)民，因子宮肌瘤行子宮次全切除術(shù)。術(shù)前定血型為A型，Hb110g/L。術(shù)中失血約400mL，手術(shù)結(jié)束時輸A型新鮮全血400mL。輸完血后，回病房約10分鐘，患者寒戰(zhàn)、腰痛、發(fā)熱39℃，1.5小時后排出醬油色尿，手術(shù)切口滲血不止，即按急性溶血反應(yīng)治療，再次核定血型為B型。2天后出現(xiàn)急性腎功能衰竭。3天后，死于轉(zhuǎn)院途中。

問題：1.該患者是什么輸血不良反應(yīng)？

2.本例應(yīng)吸取什么教訓(xùn)？28醫(yī)學(xué)ppt調(diào)查發(fā)現(xiàn)

血庫人員誤將39歲看成39床，錯用39床的血標(biāo)本測定血型并作配血試驗。39床血型為A型，女，李×蘭。

實際上，患者為28床，血型為B型。29醫(yī)學(xué)ppt病例互不相識的一女和兩男因車禍而被同時送至某醫(yī)院急診室。女傷員(李某)清醒，右腿部創(chuàng)傷，傷口有少量出血；兩位男傷員均昏迷，初步檢查發(fā)現(xiàn)男傷員-I的下腹部有嚴重創(chuàng)傷和出血，血壓低，雙腿骨折；男傷員-II的頭、腹部多處外傷，并大量出血，深度低血壓。立即給兩位男傷員輸注大量晶體和膠體溶液，但低血壓未能糾正，未能復(fù)蘇。急診室醫(yī)師在對傷員進行急診處理的同時，將3位傷員的血標(biāo)本送血庫作輸血前檢查，分別標(biāo)記為“李某”，“男傷-I”，和“男傷-II“”，申請單上要求立即檢查血型，對兩位重癥男傷員急診配血，輸血搶救。血庫立刻按要求作輸血前有關(guān)檢查，結(jié)果如表30醫(yī)學(xué)ppt輸血前血清學(xué)檢查

抗-A抗-B抗-DA細胞B細胞Rh(D)血型男傷-I4+0004+陰性A

男傷-II003+4+4+陽性0

李某003+4+4+0

31醫(yī)學(xué)ppt根據(jù)有關(guān)檢查及交叉配血試驗結(jié)果，血庫發(fā)出3UA型Rh陰性紅細胞給“男傷-I”輸注；3UO型Rh陽性紅細胞給“男傷-2”輸注。“男傷-I”創(chuàng)傷最重，在送到手術(shù)室時，護士發(fā)現(xiàn)他的導(dǎo)尿管中有“紅色尿”流出，將此現(xiàn)象記錄后口頭通知手術(shù)醫(yī)師，醫(yī)師認為可能是腎臟和泌尿道創(chuàng)傷導(dǎo)致“紅色尿”而未重視。術(shù)中，醫(yī)師注意到傷口處呈現(xiàn)微血管大量出血，當(dāng)即給以補液、繼續(xù)輸血和使用升壓藥，但病人的血壓依然過低，平均動脈壓(MAP)為8kPa，體循環(huán)外周血管阻力（SVR）為4×10-3N/cm3，心博出量為9.8L/min。與此同時，患者體溫升高，血壓繼續(xù)下降，經(jīng)輸液、輸血和加用升壓藥以及開胸、心臟按壓后，無改善，搶救無效死亡。急診室和手術(shù)室先后取“男傷-I”的尿液和血樣送檢。32醫(yī)學(xué)ppt次日晨，“男傷-2”的身份查明，醫(yī)師要求繼續(xù)為其輸血，血庫人員對新抽血樣再作檢查，確認“男傷-2”為A型，Rh陽性，且在用抗-D作Rh定型時，發(fā)現(xiàn)有混合外觀凝集現(xiàn)象，與上次檢查結(jié)果有差異。33醫(yī)學(xué)ppt再次血清學(xué)檢查

抗-A抗-B抗-DA細胞B細胞Rh(D)血型男傷-I003+4+4+陽性0

男傷-II4+0004+陰性A

34醫(yī)學(xué)ppt是什么差錯?如何預(yù)防此類差錯？①對血樣標(biāo)記和處理:操作規(guī)程及核對制度②對涉及輸血工作的所有人員:完善的培訓(xùn)和再教育體系35醫(yī)學(xué)ppt2.紅細胞懸浮液過濃或過淡(未按實驗操作S0P進行)3.人為標(biāo)記、書寫或記錄錯誤（無血型鑒定試驗復(fù)核體系）病例：2006－7廣州市某醫(yī)院：病人紅細胞病人血清結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)A血清有反應(yīng)無反應(yīng)A型標(biāo)準(zhǔn)B血清無反應(yīng)無反應(yīng)36醫(yī)學(xué)ppt4.溶血現(xiàn)象和原因不能正確判斷（未進行嚴格的崗位技能培訓(xùn)）5.未加入試劑或加錯試劑（未按實驗操作S0P進行）6.未按照說明書操作（未按實驗操作S0P進行）7.離心機校準(zhǔn)不良或不正確使用.（儀器設(shè)置未過行核正與定期檢查）8.試劑受到污染或過期（缺乏試劑的認證與日常室內(nèi)質(zhì)控）9.反應(yīng)溫度不正確（員工未進行嚴格的崗位技能培訓(xùn)）IgM4CIgG37C抗A、抗B在37C條件下反應(yīng)活性是4C的1/337醫(yī)學(xué)ppt非技術(shù)性錯誤（血型系統(tǒng)特性或異常病理狀態(tài)）減弱或缺少的抗原反應(yīng)；A或B亞型；疾病狀態(tài)；過量可溶性血型物質(zhì)；未知的抗原；獲得性A或B抗原38醫(yī)學(xué)ppt病例ABO血型正、反向定型不吻合病例

（一）病例簡介陳××，男，66歲，因患結(jié)腸癌住院作切除手術(shù)。病人無輸血史，術(shù)前備血作血型鑒定和抗體篩選檢查時，發(fā)現(xiàn)其ABO血型正、反向定型不吻合，難以確定血型，結(jié)果見表1、2。改用其它多份不同批號抗-A、抗-B定型血清和A及B試劑細胞重作檢查，獲得同樣結(jié)果。39醫(yī)學(xué)ppt表1陳××血型正、反定型

紅細胞正反定型血清反定型抗-A抗-B抗-A，B抗-DA1CBC4+2+4+3+03+40醫(yī)學(xué)ppt細胞編號Rh-hrKiddLewisMNSP血清反應(yīng)DCEceJkaJkbLeaLebSsMNP1室溫ISAHGO1+o+++++o++++++ooO2o+o+oO+o++++o+oo自身

oo室溫IS：為室溫中細胞與血清反應(yīng)后立即離心的結(jié)果；AHG為球蛋白試驗結(jié)果

表2陳××血清與抗體篩選細胞及供體細胞反應(yīng)結(jié)果

41醫(yī)學(xué)pptABO血型正、反向定型不吻合，問題出在紅細胞正向定型還是反向定型?42醫(yī)學(xué)ppt分析病人陳××ABO正、反向定型不吻合，可能是因為紅細胞正向定型有問題。由表1、2結(jié)果可見，該病人的紅細胞與抗A有正常反應(yīng)(4+)，他的血清僅與B試劑細胞反應(yīng)，沒有其它意外的抗體被檢測到，這表明病人的紅細胞上確實存在A抗原，血清中確有抗B。然而，病人的紅細胞與抗B的反應(yīng)結(jié)果較預(yù)期要弱(2+)，從而推測病人紅細胞上可能存在弱的B變異型，但不可能是B亞型，因為其血清中確有抗B，而病人自身對照作抗球蛋白試驗結(jié)果陰性。43醫(yī)學(xué)ppt根據(jù)病人入院診斷和血清學(xué)檢查結(jié)果，病人正、反向定型不吻合的最可能原因是什么?44醫(yī)學(xué)ppt分析本病例正、反向定型不吻合的原因，可能是病人獲得了一個“類B”抗原。在某些微生物的酶的作用下，A抗原末端的N乙?；肴樘前返囊阴；磺腥?，成為半乳糖，形成“類B”抗原。出現(xiàn)這類異常情況的病人，大多數(shù)有消化道疾病或者是結(jié)腸癌、直腸癌或革蘭氏陰性菌感染的腸梗阻等病癥。45醫(yī)學(xué)ppt對這類病例應(yīng)如何確認其ABO血型46醫(yī)學(xué)ppt分析兩種快速的檢查方法能幫助鑒定A型紅細胞是否攜帶“獲得性B結(jié)構(gòu)”：①用單克隆抗B血清檢測病人的紅細胞，大多數(shù)不與“獲得性B結(jié)構(gòu)”反應(yīng)；②將病人的紅細胞酸化至pH6.0，酸化后，抗B不與“獲得性B結(jié)構(gòu)”的受體反應(yīng)。

47醫(yī)學(xué)ppt該類不正常情況是短暫性還是永久性的?根據(jù)“獲得性B結(jié)構(gòu)”的形成機理，一旦病人疾病治愈，該類異常情況即消失。48醫(yī)學(xué)ppt改變的抗原；T、Tn活化及Cad多凝集；低頻抗原抗體的反應(yīng)；減弱或缺乏的抗體反應(yīng)；年齡（老年或嬰幼兒）；丙種球蛋白過低血癥丙種球蛋白缺乏血癥；嵌合現(xiàn)象；未知的抗體反應(yīng)；緡錢狀形成；冷型自身抗體；未知同種抗體等。對非技術(shù)性錯誤，一定要查明原因，再作判斷。49醫(yī)學(xué)ppt（2