第八章分子熒光光譜法320課件

第八章分子發(fā)光分析法

Molecularluminescencespectroscopy

概論分子熒光和磷光光譜分析法

化學發(fā)光分析法FirstobservedfromquininebySirJohnFrederickWilliamHerschelin1845,bluefluorescence@450nm.QuinineSolutionBlueglassFilter<400nmYellowglassofwineEmfilter>400nm1575年西班牙內(nèi)科醫(yī)生和植物學家N.Monardes，提到貯存在由菲律賓紫檀木“LignumNephriticum”制成的杯中的水，呈現(xiàn)了極為可愛的天藍色。8.1概論

1852年，Stokes在用分光光度計考察奎寧和葉綠素的熒光時，觀察到其熒光波長比入射光波長稍長些，判斷這種現(xiàn)象是物質(zhì)在吸收光能后重新發(fā)射不同波長的光，從而導入了熒光是光發(fā)射的概念，他還由發(fā)熒光的礦石“螢石”而提出“熒光”這一術(shù)語。GeorgeGabrielStokes（1819-1903）

1858E.Becquerel

第一次發(fā)現(xiàn)磷光。

1867年，Goppelsroder進行了熒光的首次應用分析，應用鋁—桑色素配合物的熒光進行鋁的測定。

19世紀以前，熒光的觀察是靠肉眼進行的，直到1928年，才由Jette和West設計了第一臺熒光計。ManymaterialsemitsfluorescenceLiquids,solids,gasOrganiccompoundsaromatichydrocarbons

(anthracene,perylene,naphthalene…),fluorescein,

rhodamines,aminoacids(tryptophan,tyrosine…),etc.Inorganiccompoundslanthanideions(Eu3+,Tb3+),dopedglasses(e.g.withNd,Mn,Ce,Sn,Cu,Ag),crystals(ZnS,CdS,ZnSe,GaS…),etc.OrganometalliccompoundsFluorophoreSamples熒光燈管-電激發(fā)發(fā)光3-Br-Carbazole磷光熒光棒-化學反應發(fā)光水母-生物發(fā)光按激發(fā)的模式分類：按分子激發(fā)態(tài)的類型分類：光致發(fā)光Photoluminescence

化學發(fā)光/生物發(fā)光熱致發(fā)光場致發(fā)光摩擦發(fā)光

分子發(fā)光分子發(fā)光熒光磷光瞬時熒光遲滯熒光按光子能量分類：斯托克斯熒光(Stokes)：λex<λem反斯托克斯熒光(Antistokes)λex>λem共振熒光(Resonance)：λex=λem熒光

8.1.1

分子發(fā)光的類型8.1.2

分子發(fā)光分析法的特點基于化合物的熒光/磷光測量而建立起來的分析方法稱為分子熒光/磷光光譜法?！镬`敏度高,比吸收光譜法低1~3個數(shù)量級；★試樣量小,

線性范圍寬；★選擇性比吸收光譜法好，因為能產(chǎn)生紫外可見吸收的分子不一定發(fā)射熒光或磷光；★應用范圍不如吸收光譜法廣;★在傳感器,生物醫(yī)藥和環(huán)境科學等方面的研究具有優(yōu)越性。

GroundsingletstateExcitedstate1熒光和磷光的產(chǎn)生泡利不相容原理8.2

分子熒光和磷光光譜分析法8.2.1基本原理激發(fā)后分子的多重性可能改變(S/T兩態(tài)).

單重態(tài):

所有電子自旋都配對的分子的電子狀態(tài)。大多數(shù)有機物分子的基態(tài)是單重態(tài)。當基態(tài)一對電子中的一個被激發(fā)到較高能級，其自旋方向沒有改變，分子仍處于單重態(tài)。三重態(tài):

有兩個電子的自旋不配對而平行的狀態(tài)。激發(fā)三重態(tài)能量較激發(fā)單重態(tài)低?！钫駝映谠ィ杭ぐl(fā)態(tài)分子由同一電子能級中的較高振動能級轉(zhuǎn)至較低振動能級的過程，其效率較高，10-14～10-12s內(nèi)完成?！顑?nèi)轉(zhuǎn)換：電子在相同多重態(tài)的兩個能級間，由高能級回到低能級的過程。

☆系間竄越：不同多重態(tài)間進行的躍遷,激發(fā)態(tài)分子的電子自旋發(fā)生倒轉(zhuǎn):S1→T1。在10-2～10-6s內(nèi)完成。無輻射躍遷過程：激發(fā)態(tài)分子的失活:

激發(fā)態(tài)分子不穩(wěn)定，要以輻射或無輻射躍遷的方式回到基態(tài)。輻射躍遷:

熒光Fluorescence：受光激發(fā)的分子從S1的最低振動能級回到基態(tài)S0所發(fā)出的輻射。壽命10-8~10-10s，是相同多重態(tài)之間的躍遷，躍遷幾率、速度較大，速率常數(shù)kf為106~109s-1。

磷光Phosphorescence：從T1態(tài)的最低振動能級回到基態(tài)S0所發(fā)出的輻射。由于磷光的產(chǎn)生伴隨自旋多重態(tài)的改變，輻射幾率、速度遠小于熒光，壽命長（10-4~10s）,能量更低！

除極少數(shù)例外，通常在發(fā)生輻射躍遷之前便發(fā)生了非輻射躍遷而回到S1態(tài)，不論開始處于哪個激發(fā)S態(tài)，最后到達S1最低振動能級。所以熒光是來自S1態(tài)的最低振動能級的輻射躍遷。10:05:18去活化演示ee吸收振動馳豫ee10:05:18去活化演示e內(nèi)轉(zhuǎn)換e產(chǎn)生熒光eS0S2S1GroundStateElectronsS1S2PhosphorescenceT1IntersystemCrossing1)熒光(磷光)壽命分子在激發(fā)態(tài)的平均時間或者說處于激發(fā)態(tài)的分子數(shù)目衰減到原來的1/2所經(jīng)歷的時間。處于S1(T1)電子態(tài)的熒光體平均壽命()可以表示為：

2.熒光\磷光壽命及量子產(chǎn)率KF（P）是熒光/磷光發(fā)射過程的速率常數(shù)Ki

是非輻射躍遷的速率常數(shù)發(fā)光壽命及量子產(chǎn)率是兩個重要的參數(shù).2)熒光(磷光)量子產(chǎn)率物質(zhì)分子發(fā)射熒光/磷光的能力用熒光(磷光)量子產(chǎn)率（Φ）表示：kF\kp

熒光或磷光發(fā)射速率常數(shù)，主要取決于物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)；Ki

非輻射躍遷的速率常數(shù)，主要取決化學環(huán)境，同時也與物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)有關(guān)。使kF增大而使其他失活過程（系間竄越、外轉(zhuǎn)換、內(nèi)轉(zhuǎn)換）的速率常數(shù)Ki

減小都可使熒光增強。

大多數(shù)熒光物質(zhì)的量子產(chǎn)率在0.1～1之間；φf>0.1具有分析應用價值。例如：0.05mol/L的硫酸喹啉，F(xiàn)=0.55；熒光素,F=1躍遷的類型:

熒光\磷光與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系

對于有機熒光物質(zhì):π*→π

n→π*εmax＜100平均壽命10-5~10-7secπ→π*

εmax≥104平均壽命10-7~10-9secπ*→n

π*→π是有機化合物產(chǎn)生熒光的主要躍遷類型。強熒光有機化合物具備以下特征:①具有大的共軛π鍵結(jié)構(gòu)；②具有剛性的平面結(jié)構(gòu)；③具有最低的單重激發(fā)態(tài)S1為π*→π型；④取代基團為給電子取代基。①共軛效應產(chǎn)生熒光的有機物質(zhì)，都含有共軛雙鍵體系，通常>1個苯環(huán)。共軛體系越大，離域大π鍵的電子越容易激發(fā)，熒光與磷光越容易產(chǎn)生?；衔锉捷凛於∈∥焓ˇ薳xmax(nm)205286365390580λemmax

(nm)278321400480640F0.110.290.460.600.52

芳香族化合物的熒光最常見且最強;隨著環(huán)的數(shù)目和稠合程度增加，大多數(shù)未取代芳烴熒光峰紅移，Φ↑。簡單雜環(huán)化合物不發(fā)熒光，但具有稠環(huán)結(jié)構(gòu)的雜環(huán)化合物都發(fā)熒光。

有剛性結(jié)構(gòu)的分子容易發(fā)熒光，熒光物質(zhì)的剛性和平面性增加，有利于熒光發(fā)射。②剛性平面結(jié)構(gòu)

芴

F=1聯(lián)苯

F=0.2不產(chǎn)生熒光產(chǎn)生熒光熒光黃F=0.92不產(chǎn)生熒光萘VAF(萘)=5F(VA)

酚酞偶氮菲偶氮苯1）給電子取代基加強熒光3.取代基的影響—NH2，—NHR，

—NR2，—OH，—OR，

—CN產(chǎn)生p→π共軛化合物苯苯酚苯胺苯基氰苯甲醚λemmax

(nm)278~310285~365310~405280~390285~345相對熒光強度1018202020化合物熒光強度苯10C6H5COOHC6H5NO230C6H5ClC6H5BrC6H5I7502）得電子取代基減弱熒光、加強磷光—C=0，—COOH，—NO2等，硝基苯：不產(chǎn)生熒光、弱磷光二苯甲酮：弱熒光、強磷光S1→T1的系間竄躍產(chǎn)率接近1重原子取代基效應：—Cl，—Br，—IS1→T1的系間竄躍增強，熒光減弱，磷光增強。

化合物萘1-甲基萘1-氟萘1-氯萘1-溴萘1-碘萘λFmax(nm)315318316319320~λPmax

(nm)470476473483484488P/F0.0930.0530.0685.26.4>1000空間位阻3）取代基的位置反式二苯乙烯強熒光物質(zhì)F=0.75F=0.03立體異構(gòu)體順式二苯乙烯非熒光物質(zhì)電離效應OH-H+pH=1,有熒光pH=13,無熒光4.最低電子激發(fā)單重態(tài)的性質(zhì)（p212）大多數(shù)芳香化合物的激發(fā)態(tài)比基態(tài)極性大，溶劑極性增大，則激發(fā)態(tài)能量降低，熒光波長紅移并使熒光強度增強。除溶劑極性的影響之外，若溶劑和熒光物質(zhì)發(fā)生了特殊的相互作用，如形成氫鍵或使熒光物質(zhì)電離狀態(tài)改變，會使熒光強度、波長改變。形成氫鍵能力越大，熒光波長發(fā)生更大的位移，向短波移動。例：奎寧在苯、乙醇、水中的熒光強度比為1:30:1000

另，含重原子的溶劑（碘乙烷、四溴化碳）使熒光體熒光減弱。1.溶劑效應

影響分子發(fā)光的環(huán)境因素2.介質(zhì)酸堿性的影響當熒光物質(zhì)是弱酸或弱堿時，帶有酸性或堿性取代基,溶液的pH值對熒光強度有較大的影響。因為弱酸或弱堿在不同酸度中，分子和離子的電離平衡發(fā)生改變，因此熒光強度也有差異。例如苯胺在pH7-12溶液中會發(fā)生藍色熒光，在pH小于2或大于13的溶液中都不發(fā)生熒光。3.溫度和黏度

溫度影響非常大。溫度降低會使熒光強度增大；磷光影響更大。如熒光素的乙醇溶液在0℃以下每降低10℃，熒光效率增加3%，冷至-80℃時，熒光效率為100%。4.有序介質(zhì)的影響另外，溶解氧的存在往往使熒光強度降低。表面活性劑或環(huán)糊精屬于有序介質(zhì)，對分子的發(fā)光特性有著顯著的影響。

熒光磷光的猝滅

Quenchingoffluorescence/phosphorescence

發(fā)光分子與溶劑或溶質(zhì)分子之間發(fā)生的使發(fā)光強度下降的物理或化學作用過程(狹義)。使熒光物質(zhì)熒光強度下降/熒光量子產(chǎn)率下降的作用;熒光物質(zhì)的熒光強度與濃度偏離線性關(guān)系(廣義).實質(zhì)--與發(fā)光過程相互競爭從而縮短發(fā)光分子激發(fā)態(tài)壽命的過程.猝滅劑--使發(fā)光分子發(fā)光強度下降的物質(zhì)。鹵素離子、重金屬離子、氧分子、硝基化合物、重氮化合物、羰基化合物等吸電子極性物質(zhì)。動態(tài)猝滅：Collisionalquenching

猝滅劑與發(fā)光物質(zhì)的激發(fā)態(tài)分子之間的相互作用。屬碰撞作用，有能量轉(zhuǎn)移和電荷轉(zhuǎn)移。靜態(tài)猝滅：Staticquenching

猝滅劑與發(fā)光物質(zhì)的基態(tài)分子之間的相互作用。形成不發(fā)光的絡合物。猝滅類型：熒光猝滅的主要原因是碰撞猝滅。 *

轉(zhuǎn)入三重態(tài)猝滅

分子由于系間跨越躍遷，由單重態(tài)躍遷到三重態(tài)。轉(zhuǎn)入三重態(tài)的分子在常溫下不易發(fā)光。*

發(fā)生電子轉(zhuǎn)移反應猝滅

某些猝滅劑分子與熒光物質(zhì)分子相互作用時，發(fā)生了電子轉(zhuǎn)移反應，引起熒光猝滅。*

熒光物質(zhì)自猝滅

在濃度較高的熒光物質(zhì)溶液中，單重激發(fā)態(tài)的分子在發(fā)熒光之前和未激發(fā)的熒光物質(zhì)分子碰撞而引起的自猝滅。有些熒光物質(zhì)在濃度較高時會形成二聚體或多聚體，使它們的吸收光譜發(fā)生變化，也引起溶液熒光強度的降低或消失。熒光猝滅法是利用隨著猝滅劑的加入，熒光體熒光強度的減少與猝滅劑的濃度呈線性關(guān)系而用于測定猝滅劑的含量。猝滅現(xiàn)象的應用:

一般說來，熒光猝滅法比直接熒光法更靈敏，并具有更高的選擇性；猝滅效應還可用以揭示猝滅劑的擴散速率，或在生物化學研究中用以推測小分子與蛋白質(zhì)/DNA的結(jié)合位點、構(gòu)象變化等。猝滅常數(shù)公式動態(tài)猝滅方程F0和F分別為不存在猝滅劑和猝滅劑濃度為[Q]時的熒光強度。0為沒有猝滅劑存在時熒光分子的平均壽命（s）.KSV為Stern-Volmer猝滅常數(shù)（molL-1）.kq

為雙分子猝滅速率常數(shù)（Lmol-1s-1）.

Stern-Volmer方程表明，

F0/F（或0/）與猝滅劑的濃度[Q]呈線性關(guān)系。方程的斜率KSV即猝滅常數(shù)。作為有效的猝滅劑,KSV約為100～1000L·mol-1.靜態(tài)猝滅方程K為絡合物的形成常數(shù)，且絡合比為1：1時才符合此式。區(qū)分方法：*

改變溫度溫度升高，猝滅常數(shù)增大為動態(tài)猝滅，相反為靜態(tài)猝滅。*

考察吸收光譜的變化

吸收光譜變化為靜態(tài)猝滅；不變化為動態(tài)猝滅。*

測量熒光壽命猝滅劑加入熒光壽命不變?yōu)殪o態(tài)猝滅，改變?yōu)閯討B(tài)猝滅。F0/Fand0/[Q]Slope=kq0=KSVF0/F[Q]Slope=K0/1.01.0T1T2T1T2動態(tài)猝滅靜態(tài)猝滅T1<T2熒光(磷光)均為光致發(fā)光.在光輻射作用下任何發(fā)光化合物都具有兩種特征光譜。A.激發(fā)光譜固定某一發(fā)射波長，掃描激發(fā)波長,測定該波長下熒光強度隨激發(fā)波長變化所得的光譜。熒光激發(fā)光譜與紫外-可見吸收光譜類似.

激發(fā)光譜和發(fā)射光譜

B.發(fā)射光譜固定某一激發(fā)波長,掃描發(fā)射波長，測定熒光發(fā)射強度隨發(fā)射波長變化得到的光譜。固定em=620nm(MAX)ex=290nm(MAX)激發(fā)波長和熒光波長如何選擇?若無散射光的干擾，一般以最大激發(fā)波長為激發(fā)波長，最大發(fā)射波長為熒光的測定波長，此時測定的靈敏度最高。熒光光譜的特點：①斯托克斯位移（Stokesshift)。與激發(fā)光譜相比，熒光光譜的波長總是出現(xiàn)在更長的波長處；其數(shù)值為激發(fā)和發(fā)射波長的波數(shù)之差。②熒光光譜與激發(fā)波長無關(guān)。無論用280和350nm作激發(fā)光源，所得熒光發(fā)射光譜形狀和峰位置都相同;只是強度有所變化。最大激發(fā)波長下產(chǎn)生的熒光最強。③熒光光譜通常只含一個發(fā)射帶分子的激發(fā)光譜可能含有幾個激發(fā)帶，但發(fā)射光譜通常只含一個發(fā)射帶；因為分子如被激發(fā)到高于S1的電子態(tài)，由于經(jīng)過極快的內(nèi)轉(zhuǎn)換和振動弛豫降到S1電子態(tài)的最低振動、轉(zhuǎn)動能級，然后以輻射形式釋放能量回到基態(tài),與分子被激發(fā)到哪個能級無關(guān)。

④熒光物質(zhì)的激發(fā)光譜與紫外吸收光譜形狀相似ex=290nm(MAX)固定em=620nm(MAX)固定ex=290nm(MAX)em=620nm(MAX)⑤吸收光譜與發(fā)射光譜大致成鏡像對稱1.熒光強度與濃度的關(guān)系

If=ФfIa

Ia=（I0—It）;I0——入射光強度；

It——透射光強度；熒光量子產(chǎn)率（Фf）。

發(fā)光強度與溶液濃度的關(guān)系

分子熒光分析和分子磷光分析是基于光致發(fā)光現(xiàn)象而建立起來的分析方法。熒光強度與熒光物質(zhì)的吸光程度及其發(fā)射熒光的能力有關(guān)。t根據(jù)朗伯-比爾定律:It/Io

=e-abc

If=2.303Фf

I0

εbc當I0一定時,If=K·C。在低濃度時(當A＜0.05)，溶液的熒光強度與熒光物質(zhì)的濃度成正比，這是熒光法定量的基礎。If=Фf(I0-It)=ФfI0(1-It/Io)FCsFxCx測定最佳濃度范圍為：10-5μg/ml～100μg/ml當濃度較濃時（A>0.05），熒光強度同濃度的線性關(guān)系將向濃度軸偏離。10:05:18光源單色器1樣品池單色器2檢測器放大與記錄垂直方向8.2.2

熒光/磷光分析儀器熒光分光光度計可用于測繪激發(fā)光譜和熒光光譜,并用于定量分析，熒光分光光度計(spectrofluorometer)紫外-可見分光光度計:光源樣品池單色器檢測器數(shù)據(jù)處理儀器控制熒光(磷光)分光光度計:光源樣品激發(fā)單色器檢測器數(shù)據(jù)處理儀器控制發(fā)射單色器

熒光儀與分光光度計的主要差別：

垂直測量方式，消除透射光影響.

高靈敏度原因.

兩個單色器（激發(fā)和發(fā)射）常用光柵.10:05:18PerkinElmer1.光源發(fā)射強度高且穩(wěn)定光輻射強度隨波長的變化小有足夠長的使用壽命1)弧光燈和白熾燈A.高壓氙燈：波長范圍：400~800nm

使用壽命：2000~4000h

目前應用最廣泛的一種光源。發(fā)射波長范圍寬,強度大.B.汞燈:應用廣泛的線光源.2)固態(tài)光源3)激光光源

第一單色器選擇激發(fā)光波長,波長落于紫外區(qū)，稱為激發(fā)單色器。第二單色器（熒光單色器）與激發(fā)光入射方向垂直，用來選擇熒光波長，把激發(fā)光所發(fā)射的容器表面的散射光、瑞利散射光、拉曼散射光以及溶液中雜質(zhì)熒光濾去，讓熒光物質(zhì)發(fā)出的熒光通過照射到檢測器上。可提高方法的選擇性和準確度。2.單色器平面衍射光柵3.樣品池吸收池的形狀：通常都為1X1cm的柱型液池

紫外-可見分光光度計吸收池兩面透光

熒光分光光度計樣品池四面透光2.樣品池的材料：根據(jù)測量波長范圍，紫外-可見分光光度計吸收池在可見光區(qū)采用玻璃，在紫外光區(qū)采用石英。熒光分光光度計樣品池采用石英。紫外-可見分光光度計的吸收池與熒光分光光度計的樣品池（熒光池）有什么區(qū)別？紫外-可見分光光度計吸收池熒光分光光度計樣品池I0ItI0ItIF,p使用注意事項10:05:184.檢測器大都采用光電倍增管放大倍數(shù)：2n~5n;n=10,103~107，最大108~1095.讀數(shù)裝置光源樣品池激發(fā)單色器檢測器數(shù)據(jù)處理儀器控制發(fā)射單色器切光器（斬波器）磷光：10~10-4sec磷光分析儀器磷光鏡:一種機械切光裝置.轉(zhuǎn)筒式和轉(zhuǎn)盤式。10:05:18磷光儀中的2種機械切光器

樣品池與熒光分光光度計的區(qū)別：室溫下樣品池與熒光樣品池相同;在低溫情況下，樣品池需要放在盛液氮的石英杜瓦瓶內(nèi)，來測定低溫磷光。8.2.3熒光的常規(guī)測定方法直接測量法間接測量法熒光衍生法熒光猝滅法敏化熒光法多組分混合物的熒光分析

應用無機物：已有～70種元素可分析。鰲合物法：BeAlBGaSeMg

與熒光物質(zhì)締合猝滅法：FSFeAg

催化熒光法：CuBeFeOsH2O2

有機物：簡單有機物與其他有機試劑作用后產(chǎn)生熒光芳族通?？芍苯訙y定10:05:188.2.4磷光的測定方法低溫磷光分析由于激發(fā)三重態(tài)壽命長，激發(fā)態(tài)分子發(fā)生非輻射去活化過程、與周圍溶劑分子間發(fā)生碰撞和能量轉(zhuǎn)移過程，或發(fā)生某些光化學反應的幾率增大，這些都將使磷光強度減弱，甚至完全消失。為減少這些去活化過程的影響，通常在低溫測量磷光。低溫磷光分析中，液氮是最常用的冷卻劑。因此要求所使用的溶劑，在液氮溫度（77K）下具有足夠的粘度并能形成透明的剛性玻璃體，對分析試樣具有良好的溶解特性。溶劑應在所研究的光譜區(qū)域內(nèi)沒有很強的吸收和發(fā)射。試樣的剛性可減少熒光的碰撞猝滅，磷光強。室溫磷光分析10:05:18由于低溫磷光需要低溫實驗裝置，溶劑選擇的限制及操作繁瑣等因素，從而發(fā)展了多種室溫磷光法（RTP）。但是室溫下，T1態(tài)分子與溶劑碰撞失活，很難產(chǎn)生磷光。除了分子的結(jié)構(gòu)要求外，實驗條件非?？量?尤其是除氧。室溫下測量吸附于固體基質(zhì)上的有機化合物的磷光。所用的基質(zhì)種類較多，有纖維素載體（如濾紙、玻璃纖維）、無機載體（如硅膠、氧化鋁）以及有機載體（如乙酸鈉、聚合物、纖維素膜）等。

理想的載體能將分析物質(zhì)牢固地束縛在表面或基質(zhì)中以增加其剛性，并能減小三重態(tài)的碰撞猝滅等非輻射去活化過程，而本身又不產(chǎn)生磷光背景。1.固體基質(zhì)表面室溫磷光（SS-RTP)當溶液中表面活性劑的濃度達到臨界膠束濃度后，便相互聚集形成膠束。由于這種膠束的多相性，改變了磷光團的微環(huán)境和定向約束力，從而強烈影響了磷光團的物理性質(zhì)，減小了非輻射去活化過程的趨勢，明顯增加了三重態(tài)的穩(wěn)定性，從而實現(xiàn)在溶液中測量室溫磷光。利用膠束穩(wěn)定因素、結(jié)合重原子效應、并對溶液除氧，是MS-RTP的三個要素。2.膠束增穩(wěn)室溫磷光法（MS-RTP）分析物質(zhì)被激發(fā)后經(jīng)過系間跨越衰減至最低激發(fā)三重態(tài)，當有某種合適的能量受體存在時，發(fā)生了由分析物質(zhì)到受體的三重態(tài)能量轉(zhuǎn)移，最后通過測量受體所發(fā)射的磷光強度而間接測定該分析物質(zhì)。在這種方法中，分析物質(zhì)本身不發(fā)磷光，而是引發(fā)受體發(fā)磷光。3.敏化室溫磷光分析（S-RTP）含重原子的溶劑，由于重原子的高核電荷增大了S0T1吸收躍遷和S1T1系間跨越躍遷的幾率，有利于磷光的發(fā)生和增大磷光的量子產(chǎn)率。這種作用稱為外部重原子效應。分子中引入重原子取代基，會發(fā)生內(nèi)部重原子效應，導致磷光量子效率的提高。

重原子效應heavy-atomeffect引入重原子,熒光增強嗎?熒光對微環(huán)境敏感，用于表征研究體系的理化性質(zhì)，并可用于物質(zhì)的定性或定量分析。定性分析：依據(jù)不同結(jié)構(gòu)的物質(zhì)所發(fā)射的熒光波長不同；定量分析：同種物質(zhì)的稀溶液，其產(chǎn)生的熒光強度與濃度呈線性關(guān)系。8.2.5熒光/磷光分析法的應用靈敏度高、選擇性好，可用于痕量分析，但是能發(fā)生熒光的化學體系不多。在有機化合物中應用較廣。芳香化合物多能發(fā)生熒光，可直接測定。脂肪族化合物往往與熒光試劑作用后才可產(chǎn)生熒光。無機物已有～70種元素可分析。通過與熒光試劑作用生成熒光螯合物而進行熒光分析，熒光試劑具有兩個（或以上）與MZ+形成螯合物的電子給體官能團結(jié)構(gòu)。非過渡