實驗過氧化氫酶活性測定

實驗過氧化氫酶活性測定第一頁，共十頁，編輯于2023年，星期二一實驗?zāi)康恼莆蘸蛯W(xué)習(xí)測定過氧化氫酶活性的原理和方法；2了解過氧化氫酶的作用。第二頁，共十頁，編輯于2023年，星期二二實驗原理

過氧化氫酶（catalase）屬于血紅蛋白酶，含有鐵，它能催化過氧化氫分解為水和分子氧，在此過程中起傳遞電子的作用，過氧化氫既是氧化劑又是還原劑?？筛鶕?jù)H2O2的消耗量或O2的生成量測定該酶活力大小。第三頁，共十頁，編輯于2023年，星期二

在反應(yīng)系統(tǒng)中加入一定量（反應(yīng)過量）的過氧化氫溶液，經(jīng)酶促反應(yīng)后，用標(biāo)準(zhǔn)高錳酸鉀溶液（在酸性條件下）滴定多余的過氧化氫。即可求出消耗的H2O2的量。反應(yīng)式5H2O2+2KMnO4+4H2SO45O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4第四頁，共十頁，編輯于2023年，星期二三實驗器材10%H2SO4；0.2mol/LpH7.8磷酸緩沖液；0.1mol/LKMnO4標(biāo)準(zhǔn)液：稱取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷卻蒸餾水配制成1000mL，再用0.1mol/L草酸溶液標(biāo)定；0.1mol/LH2O2：取30%H2O2（17.6mol/L）溶液5.68mL，稀釋至1000mL，用標(biāo)準(zhǔn)0.02mol/LKMnO4溶液（在酸性條件下）標(biāo)定。1試劑第五頁，共十頁，編輯于2023年，星期二2材料:小麥葉片3主要設(shè)備：離心機，恒溫箱，酸式滴定管第六頁，共十頁，編輯于2023年，星期二四方法步驟1、酶液提取

取小麥葉片2.5g加入pH7.8的磷酸緩沖溶液少量，研磨成勻漿，轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中，用該緩沖液沖洗研缽，并將沖洗液轉(zhuǎn)至容量瓶中，用同一緩沖液定容，4000轉(zhuǎn)離心15min，上清液即為過氧化氫酶的粗提液。

第七頁，共十頁，編輯于2023年，星期二2、滴定：取50mL三角瓶3個（2個測定，另1個為對照），測定瓶中加入酶液2.5mL，對照加煮死酶液2.5mL，再加入0.1mol/LH2O22.5mL，同時計時，于30℃恒溫水浴中保溫10min，立即加入10%H2SO42.5mL。

3、用0.1mol/LKMnO4標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，至出現(xiàn)粉紅色（在30s內(nèi)不消失）為終點。

第八頁，共十頁，編輯于2023年，星期二5實驗結(jié)果酶活性：每g鮮重樣品1min內(nèi)分解H2O2的mg數(shù)表示式中：A－對照KMnO4滴定mL數(shù)；B－酶反應(yīng)后KMnO4滴定mL數(shù)；VT－提取酶液總量（mL）；VS－反應(yīng)時所用酶液量（mL）；W－樣品鮮重（g）；T－反應(yīng)時間（min）；1.7－1mL0.1mol/LKMnO4相當(dāng)于1.7mgH2O2。第九頁，共十頁，編輯于2023年，星期二六