第十二章體外試驗與生物新技術(shù)

第十二章體外試驗與生物新技術(shù)在毒理學中的應(yīng)用體外試驗毒性試驗的目的在于獲取一定的數(shù)據(jù)，為社會需要的外源化學物的安全使用做出判斷。過去利用整體實驗動物模型或稱體內(nèi)試驗(invivotest)模型所提供的資料，判斷外源化學物及其制品和混合物等對人類健康是否具有損害作用。體外試驗?zāi)Ｐ?invitrotest)在上述過程中也起著重要的作用，尤其是機理研究方面。但是，在毒理學研究中整體試驗研究的觀點仍占主導(dǎo)地位。目前，此種觀點已發(fā)生變化，因為：①全世界每年約有千種以上的新化合物作為商品進入人類的環(huán)境。而且在現(xiàn)有的化合物中，還有相當數(shù)量沒有進行必要的毒理學評價。在此種情況下，利用經(jīng)典的整體動物試驗取得完整的毒理學資料極為困難。解決此種問題的重要方向是體外試驗。②現(xiàn)有的整體動物毒性試驗方法需消耗大量的時間和昂貴的經(jīng)費，而體外試驗則可節(jié)省時間和經(jīng)費。③動物保護主義運動的興起，要求盡量減少動物的使用，而且應(yīng)當盡量減少痛苦地處理動物。④更重要的是由于生物技術(shù)的巨大進步，不僅表現(xiàn)在細胞組織及器官培養(yǎng)領(lǐng)域，而且在生物分子技術(shù)方面，也為毒性試驗和研究提供了新的方法和工具。所以體外試驗在毒理學研究中所占的地位日趨重要，甚至有占主導(dǎo)地位的趨勢。但也需指出，體外試驗的發(fā)展，并不排斥體內(nèi)試驗本身的重要性，兩者必須相互補充、相互驗證才能為毒理學研究提供堅實的科學基礎(chǔ)。一、概述(一)分類毒性試驗的目的是提供一些適當?shù)馁Y料，以便確定有關(guān)化學物的毒理學性質(zhì)。在有些情況下，是要決定一種化學物在所預(yù)期的條件下使用是否安全，如新藥物開發(fā)即需要這一評價。在有些情況下，例如新工業(yè)品或日用化學品的開發(fā)，必須決定一種新化學物的接觸安全限量。了解體外毒性試驗在上述毒理學決策過程中有何意義，對于評價體外毒性試驗在毒理學中的地位極有幫助?？梢罁?jù)體外試驗在決策過程中所起的作用將其分為3類：①篩選試驗。它僅提供決策過程的最初的資料，還需要進行更權(quán)威的試驗，無論是整體還是體外試驗。②附加試驗。它可為協(xié)作部門或法律部門的最終決策過程提供有用的資料，如機理的研究，但僅有它是不夠充分的。③替代試驗。它是在大量實驗的基礎(chǔ)上，使體外毒性試驗?zāi)芴娲w動物試驗，以提供更多的信息。(二)基本原理體外試驗的基本原理是所觀察到的毒理學效應(yīng)均是毒物和／或反應(yīng)活性代謝產(chǎn)物在敏感性細胞上或敏感細胞內(nèi)某一分子靶部位作用的結(jié)果。如將敏感細胞或某分子靶部位例如酶，在體外條件下，維持其正常的生理功能，并觀察外源化學物對其的影響，即將毒理學中毒物中毒的啟動階段，在體外條件下，觀察其對外源化合物的反應(yīng)和外源化學物對它的作用。基于上述原理，體外試驗?zāi)Ｐ腿〔姆秶軐挘扇〔溉閯游锏碾x體臟器灌流、臟器切片溫育、細胞培養(yǎng)、亞細胞器組份以及提純的某些酶分子或DNA分子等等。(三)體外試驗的優(yōu)缺點體外毒性試驗的優(yōu)點可歸納在表12—1。表12-1體外毒性試驗系統(tǒng)的優(yōu)點能控制環(huán)境因素可排除相互作用的系統(tǒng)如免疫系統(tǒng)、神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的影響每一劑量水平可利用大量的生物樣品，如細胞，細胞器等試驗間的誤差較少種可同鳴時和蕉／或中反復(fù)橋多次掛取樣建可做兆成復(fù)玻雜的岸互相李作用調(diào)的試殘驗系譯統(tǒng)，尤如復(fù)羽合細鈔胞培秋養(yǎng)等跑較為乘快速征和經(jīng)鋸濟殺需要褲較小遍量的布受試即化合快物促產(chǎn)生她較小胸量的任有毒侍廢物惱可以督利用恩人體弟細胞裂減少梅整體壓動物呈的使鵲用甩溝景其中鑰特別慮值得前一提衛(wèi)的優(yōu)泳點是咬體外浙試驗川的簡像便和確易于問利用悉人體幣細胞避。體深外毒發(fā)性試職驗結(jié)殿果可工迅速崖得出帳，將粱減少蛇了解倉新化民學物頌毒理驕學資吊料所奉需的肝時間標，最抬終可乎以縮聚短從被新化畝學物鬼的合總成到停產(chǎn)品透進人元市場鳴的時逐間過竭程。跑此外歸，對活鑒定辯毒理典學資叔料有罩問題援的新屈化學命物，圈可及竹時終暗止開尤發(fā)，襖減少西由資處源到陪產(chǎn)品稈的投罵入。船在毒澡理學賠整體熱試驗躺中禁穴止直耍接進捕行人驗體試陜驗。他但毒艘理學尺試驗桐的目占的是漲關(guān)心嬸人類悅健康艇，目掉前主慘要是齊將動縱物試慈驗結(jié)怎果外臟推至受人類毅，物冊種間放差異仆為其圣不確攔定因遞素之庭一。跳在體庸外試證驗中疲，利次用人止體細貍胞組櫻織進廊行試庫驗，歡可較棕好地估解決耀物種競差異潔的問邁題。討腰藝體外許毒性硬試驗獸系統(tǒng)匆的利靈用在標目前稅尚有斥不足緩之處旨：森①傻體外銜到體桂內(nèi)外謹推的廈問題塑。體碑外試很驗是史依據(jù)定毒性幻作用執(zhí)的始亂發(fā)階質(zhì)段及腎繼續(xù)魄發(fā)生采的分叨子與住細胞己反應(yīng)鋪，其店與整盤體系那統(tǒng)有板差異賺，如融何將屋產(chǎn)生信體外財毒性幣的體略外濃喬度與低相應(yīng)漲體內(nèi)狠劑量彩聯(lián)系汽的問煤題是名最終德未解嘉決的汪難題梁。它肢需要地更好袍的工節(jié)具緞——踢預(yù)測擊性毒夸物代怠謝動其力學介來解扁決，更其關(guān)紗鍵在許于發(fā)掏展有丙生理尊學基定礎(chǔ)的稈毒物自代謝甚動力男學模顆型。按另一戲方面稠，體挪外毒坊性試懲驗中奇缺乏編毒理慢學反蝶應(yīng)的俊調(diào)控總因素氧，如反細胞舍與組榜織的射修復(fù)弄過程乓和免炕疫系并統(tǒng)的漢不同梨類型犧細胞康間的刑相互顫影響納等。續(xù)假如卻有了野更全愈面的浩毒理系學過發(fā)程的勞基礎(chǔ)鄙知識掘，可雨設(shè)計笨更符毫合整芳體動燭物模聰型的磁體外籮系統(tǒng)鑄。但撲現(xiàn)階邁段毒莊理學較作為督一個述學科溪的發(fā)收展尚絕缺少細許多隨重要灰的資耕料。濟②舊體外帥毒性配試驗嫌難以居預(yù)測南慢性憐毒性出。因親為，叢慢性扮毒性業(yè)病理便過程阻的機命理所被知甚曲少，物缺乏鑒發(fā)展堆體外剃試驗脹的理割論依筋據(jù)，積再者紡，某訓些體萌外系劫統(tǒng)仍驚難以毅達到殿長期誕維持技生理午狀態(tài)特的要規(guī)求。景譽二、程體外截試驗增系統(tǒng)航瓶切(一口)庫臟器伐灌流蟲暖奸1.賄肝肢臟灌仰流拾是垃毒理煎學中荷研究保外源販化合趟物對斜肝臟梯損傷睡及代雄謝的同常見皂方法碗。在陣灌流淚液中貴加入抵外源朝化學津物，火此外歪要維取持灌速流液歲的p位H值證、氧蔥含量何，還躺要控沃制適辯宜的知灌流維液流干速。罷一般震是以冶下腔全靜脈碰和門咬靜脈償為插校管灌望流通祥路，驢為此炎應(yīng)結(jié)宋扎肝懷動脈爐、上憤腔靜貼脈，根在恒宿溫條鍛件下墊灌流膀。有騙報道想用肝襪灌流村方法參研究擋四氯忘化碳造及其相氫取欄代衍誰生物伏三氯貼甲烷稅與二武氯甲智烷對知肝臟宋毒性雕，結(jié)嫁果發(fā)伸現(xiàn)隨掛著灌廣流時貌間延類長(違在4輛h之噸內(nèi))煤，灌毒流液裝的上練清液延中K儀+款、谷桌丙轉(zhuǎn)贊氨酶楊(S握CP副T)種、山籍梨醇它脫氫拉酶(范SD集H)促、谷討氨酸只脫氫乳酶(扎GD莫H)國增加圓，說王明三筆種化欄合物剖對肝輕細胞紅均有至損傷欺，而缺以四絞氯化棉碳為干最，贊且依擦氯原遭子被盲氫取設(shè)代肝忽毒減齡低。枝需指急出肝這灌流火時間盼不能鹽過久翻，以性4h裕之內(nèi)天為宜食，否于則肝敵細胞駛的功灰能與卡生存推不能爆維持眾。殘辦抵2.忽腸梁灌流喘久利用澇某一躁部分喪小腸彈體外霜灌流劫可以啦研究禾一些事化合晴物的尼吸收遞及動港力學胃過程營。如槽用大思鼠，豆則在偵麻醉位下切偏腹分悶離一媽段小您腸，摘在保掌持原握有血寫液循炕環(huán)體朋系下逐，將佩腸兩去端插難管，特清洗錢凈腸棍中內(nèi)定容物后，在諸恒溫紛環(huán)境榴中灌叔入灌期流液涂。例況如有干人研丑究鋅捉的吸厚收及崖其影戴響因圾素，督以大控鼠回低腸段喚為標擴本，負證實則鋅吸腥收呈也二室與模型菜(腸振腔為替Ⅰ貌室、渣腸粘染膜為余Ⅱ怪室)安，苯墳丙氨修酸能百增加泊腸腔祖與腸鑄粘膜謠之間四鋅的撕交換扇，且擴加速沿向血且流的仰清除至過程躁。勉計旗悔3.解膈島肌-投膈神冰經(jīng)標弟本般取諷完整芬的大腥鼠膈喬肌-謙膈神途經(jīng)置咸于恒崖溫灌逢流液纖中，所，在偉幾小鋒時之說內(nèi)可育青兇跌佛襯謠百境濕熔膀快公盡正都瘦販弄判貪行跡(二只)劍臟器懲切片疫晃騾肝臟紅、腎蓮臟、直腦部溉及心脾均可偵以制辰備切梁片。然例如致，腦渾片和停心肌縱條等診是將棋組織臥片置冤于恒門溫的敲孵育象液中面進行計有關(guān)覆試驗?zāi)难芯块w，但噴需注濱意切溫片中親的細脈胞需慢保持抽完好聽的細球胞基睬質(zhì)和料細胞圾之間垃的交拆流。很切片之厚度店一般吧在2撞50恐μ盲m。耕不同氣研究劈期間免有別左，如沿肝切寒片研騙究C躬yt北P-芽45棟0不價應(yīng)超團過8嗓h，吼腦切劣片一占般在冠6h皮左右扛。此盟系統(tǒng)柜的優(yōu)寇點是秤保持斷了細隸胞之援間的恥結(jié)構(gòu)失，其在操作孝也比賽臟器教灌流嫩容易葵。不叫足之朗處是樣切片炭內(nèi)的紹細胞和易于娃缺氧戒，且盲受試盜物也巧不易漸均勻凍到達套細胞咬內(nèi)。瓜照趨(三達)達原代懼細胞絕培養(yǎng)背劍1.棟肝腳細胞羞原代影培養(yǎng)方堂肝細喪胞尚掉未建饞成傳寶代的拋細胞農(nóng)株系退，多綢用原傷代培伍養(yǎng)。瀉肝細礦胞原突代培嫩養(yǎng)期宇間細噴胞不鉛分裂舉、不籃增殖嗓，但掃發(fā)現(xiàn)竟基因左轉(zhuǎn)錄逝是存頌在的犁(培晝養(yǎng)初決期2餅4h喝在1櫻％或堡以上臟)。資細胞括原代強培養(yǎng)突維持件生存瓶期1唇～2討周，襖但是潑Cy芝tP姿-4攝50治卻在豈24控～2薄8h逆活性致減少摟50推％左碼右。椅據(jù)報總道人乖肝細撿胞中賴Cy森tP潤-4純50捉活性汪穩(wěn)定鮮性比盡大鼠瞎強。迷宰禽利用磚原代艷培養(yǎng)識的肝豪細胞傷可以罷進行監(jiān)多種齒毒理繼學研烏究。展如研那究化塞學物霜的肝磁臟毒廁性，進一般珍認為坐，用禮原代涼肝細鳥胞培銳養(yǎng)篩餓檢與量鑒定僅是否盼化學隊物具堡有肝綁臟毒嶺性較談為可輪靠，徑與體蔥內(nèi)試綱驗相泡符合丟。有萌報道熊以肝合細胞財損傷伐后某嘴些酶油釋放諒為指扶征，套研究卷30魔個化畝學物襪，結(jié)孫果除夕少數(shù)買化學時物在盟肝細眼胞培嘆養(yǎng)中肆表現(xiàn)誦毒性搭比體罷內(nèi)試愧驗低五之外旦，多樓數(shù)化邊學物恥內(nèi)外頂毒性賣符合賤一致蘭。在砍體外式試驗謙表現(xiàn)棗毒性掉較低枕的化錘學物韻有環(huán)王已酰猴胺(錄cy劑cl周oh惜ex拒im重io昂le貍)、慘溴苯離(b賞ro油mo沃be外nz皇en燙e)淡和長眉春新寧堿(秩vi芹nc詳ri娘st訂in撒e)塊等。票鴨威紗荒2.積巨梳噬細挖胞遞豚嚇鼠或壞大鼠精都可削以肺糊灌洗古方法它獲取路肺巨嘴噬細漫胞，鍬小鼠腳可用傭腹腔妹灌洗包獲得渴腹腔望巨噬魄細胞筐，甚濱至人相也可式通過端肺灌債洗得掌到。屆巨噬顆細胞珍可以及用于燦多種崗體外錫試驗笨，例愉如利贏用巨煉噬細胞胞的轟免疫冤功能名檢測杠外源霜化學嫁物的膜免疫渾毒性著，又倒如利簽用巨煤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以野得到嫂良好五的結(jié)百果。傲芬嬸有報包道金爹屬離鋤子C架d什2+勒、H莖g鍬2+菜、P確b秩2+嫌對一婚些鈣體調(diào)素姿依賴筋酶就糟具有蹦雙向靠效應(yīng)勢，即醬在低鵝濃度趨時可刺以激鴉活這蒸些酶鹿，而哪高濃托度時銷又可盞抑制涼酶的亮活性災(zāi)。報亦值文獻卻中早百已證懂明有攤機磷端化合疫物的癥主要租靶酶燦是A福Ch填E。麗經(jīng)酶哥動力濃學分蠅析，尼有機建磷化木合物麻與A光Ch樂E底百物A唱Ch至呈競洽爭性嘉；即循有機今磷化歲合物陽對A皮Ch敬E為太競爭特性的洗不可顏逆性涌抑制鞋物。俯但是姿不同鳳結(jié)構(gòu)偏的有效機磷逼化合旗物對的AC押hE坊的親枝合力瀉可有京很大僻差別但。鬧沉哺乳伸動物陽細胞騙制備品和培雁養(yǎng)占一、暑概述遍泊驅(qū)鋪無到目垃前為笛止，委分離待的細唱胞是醋毒理火學中織使用后最廣印泛和釋最深浮入的盞體外販實驗簡系統(tǒng)滋。體收外系住統(tǒng)分磁離的之細胞盟包括筋懸浮噴液中洪的新媽鮮游朵離細剛胞、作原代控培養(yǎng)蚊細胞慣、細和胞株域、細領(lǐng)胞系云及復(fù)愿合培收養(yǎng)的爭細胞竄。在產(chǎn)毒理坡學中貫以哺克乳動婆物細見胞作密為實樸驗動演物的活替代票系統(tǒng)昌日漸矮廣泛驗，造貼成這惜種趨輪勢的席原因栽有三球：一晝是來百自公舍眾要碗求減廟少實褲驗中幕使用泡動物梳數(shù)量阻的壓詢力；派二是姥非整團體動緊物實信驗可躬顯著自地減駛少常務(wù)規(guī)整錯體動得物實燦驗所涼需的姨高額籍費用較；三蘆是人代們越隸來越擇不滿或意實減驗動猜物與蹈人體葡結(jié)果痛之間丑相關(guān)京性的交缺乏達。利槳用細緣胞，塊可更爭嚴格帳控制具實驗蟻條件疊，有挽效地肌研究絹毒性鏡作用遲的生泊化機津理。誓表1遠2-穩(wěn)2詳暫細列天出細壤胞在僅毒理誤學中總應(yīng)用頓的優(yōu)廚缺點縫。艙劍挨表1伯2-驢2繪體怪外系櫻統(tǒng)敘——除細胞踏在毒廈理學卵中應(yīng)及用的謀優(yōu)、壓缺點件救研防優(yōu)巡點釘春浪誤支伏改悔善效少率，呢減少衡費用睛慘早抹閃犧壺敵猾挺協(xié)敵遠使用瑞實驗矩動物目較少攜重逗功屠揀昨緒葡概襪捷個僅需類少量壓的受菜試物粒若盆耐爸掀狡克蜘誦叮錄洲派較大拼程度燒控制汁細胞唱族的蜘性狀鑒奮鞭教幣脊份痛刪薪郵對辮冠扔直接掃控制流胞外緣基質(zhì)線、化瞧學物猾濃度郊及接豈觸時肌間織他遣背泳悲跌陵銜冬顯那推排除偽可能叮的混哨淆因側(cè)素如槳激素德；神潔經(jīng)系擺統(tǒng)或現(xiàn)免疫橋系統(tǒng)伸的影哄響營看蘿抽撿剝步成繡次拳面就可從抗同一搞實驗否體系體重復(fù)預(yù)取樣亦矮適斧丈缺惡點醬里德持夠遺缺少葬整個統(tǒng)器官橡的形嫁態(tài)學蜜觀察亞封罵加咽米歉揉磁饑蟻犯勾選擇藍性喪柜失整獎體器待官特跡異性債功能斯，如朱毒性葛代謝彩酶的狂喪失輝款碎脹輸砌伶孔駐完舟舉圈缺乏艘可能公的調(diào)劑節(jié)影逼響因滲素如逮激素陵，神監(jiān)經(jīng)系寄統(tǒng)或抗免疫槐系統(tǒng)棋，投火乏廉博楊麥奪練盛近司莫一般裙為靜辟態(tài)系堪統(tǒng)，廟將導(dǎo)摧致營侍養(yǎng)物遞質(zhì)的泛逐漸雅減少擊和代炒謝終勁產(chǎn)物掙的逐克漸累賓積?？碱i辭襯年祥韻我兆雙桑秀英多為貪短期撓試驗駁，對挺亞慢歉性或靠慢性標毒性耀的評店估價每值不蹄大及表1昆2-怖3難毒爆理學故研究漲中常茅用細行胞暮各種贊物種飽的成驢纖維鹽細胞額淋巴鏈母細寨胞諒腹水肝瘤細育胞物淋巴錫細胞柳角質(zhì)各細胞餃肝擊細蟲胞彼肝癌霸細胞刪腎臟順髓質(zhì)們和皮喉質(zhì)細滔胞咱肺的陸各種扣類型普細胞拖培養(yǎng)歷的背犬根膠餓質(zhì)細按胞農(nóng)培養(yǎng)調(diào)的睪敗丸細掠胞瞞膀胱喪細胞闖心臟獻細胞堅脊髓仙微血稱管細女胞延脂肪踐細胞榨撫文由于秩哺乳是細胞亭作為負體外寧實驗稼系統(tǒng)屯的優(yōu)互越性沾，在胃毒理棍學中做，已跡有許介多不多同類鄙型細貴胞應(yīng)叢用于鉤毒理乏學實摸驗。站表1席2-醋3為鋼毒理侵學實儲驗中叫常用常的細糧胞類坊型，提其中司有些默細胞怕可來份源于鮮人體純組織階。胸利用金哺乳箱動物畝細胞好進行焦毒理判學體郊外實遮驗有集兩種較方法曠：一炭是建柿立正棗在迅于速生憂長的這細胞旅株，蝶用以侮觀察偶受試夫物對伏整體碧細胞需的一乳般毒晨作用槽和正捎在分滋裂組蛙織的犬毒作自用；奏二是環(huán)利用劑已高蒜度分火化的懇細胞鉤，無混論是繳原代飾培養(yǎng)查或是乖特定蹈的細尺胞株曾，研頭究受展試物驚對已肥分化某成熟衡的細擊胞或梅其功忠能的夸特殊釘毒作卸用；擱尖逗二、建基本策技術(shù)亞儀器年與設(shè)務(wù)備蔽搏1.銀培升養(yǎng)箱字蝕一般聽來說遲，在煩5％熔CO尾2甩，9億5％率空氣修和9豎9％障的相為對濕莖度的片條件階下，選許多垃細胞畏可存涼活。睬故細磚胞培酒養(yǎng)的子關(guān)鍵直設(shè)備豐是C奧O嬸2礎(chǔ)培養(yǎng)種箱。做其基迅本要蹤求：可①預(yù)精確膽地溫困度控夠制調(diào)覽節(jié)，展一般滿在土眉0.幫5杜℃貍，箱裳內(nèi)溫究度的揉均衡袍可依券賴風額扇；鹽②疊CO躁2傭濃度講調(diào)節(jié)彈，利墾用C迫O淚2薪傳感警器監(jiān)驕測箱多內(nèi)C豬O立2痛濃度妻；使必箱內(nèi)啄大氣眠為5威％C數(shù)O乳2疾，9存5％?？諝馀?；珠③唯箱內(nèi)姑濕度雅，可窯用水則盤來調(diào)維持挖。有識的細棕胞培衫養(yǎng)可棚以不走控制絮CO安2圖分壓訂。例渾如，掏原代仗肝細資胞培陣養(yǎng)，貍可用偷Le珠ib詢ov院it病zL刃-5級介質(zhì)森，不理需C鏡O薄2府，而盞要求擱敞開不培養(yǎng)剃瓶，呀以供佛給較委高的靈O柿2正分壓陷。弓嘗維2.蚊冰排箱和增冷柜卷籠冰箱授(由4庭℃諸)用框于存謀放培拋養(yǎng)介盒質(zhì)，勻冷柜衛(wèi)(礦—殃20欠℃麗)則吐存放導(dǎo)酶，私(如繼胰蛋醒白酶莫)和透某些速培養(yǎng)狂介質(zhì)瞎如谷障氨酸剩和血趴清。影怪烈3.蜜顯騰微鏡延災(zāi)最基慌本的攪配置秩是一脈臺簡葬單的倘倒置面顯微猶鏡，完用作怕日常裝觀察別培養(yǎng)辮中的改細胞霧，以減便依求據(jù)細德胞生直長狀窄況，坊進行陶調(diào)整終或?qū)α魑廴疽M行藝補救慶或處源理。譽進行守進一珍步的呈研究蒼，則得需要餓更高辮級的繁顯微旬鏡，創(chuàng)例如森，相嗚差顯潑微鏡紫或熒寧光顯惰微鏡苦，并堪附有遭照相攜裝置揀或攝植影裝征置。存股模能周4.絨超既凈工領(lǐng)作臺這煮在沒心有無罰菌操喜作室巡的條漆件下診；可羊用超川凈工嘆作臺低。它忘是一廣無菌貞操作疏裝置香，主充要是姿利用椅鼓風梢機，酸驅(qū)動趴空氣并通過結(jié)高效敘濾膜涂凈化易后，鹽緩緩鹽通過企工作照臺面號，使朵工作剪部位旅構(gòu)成釀無菌困環(huán)境絡(luò)。它摔具有拔占地資面積無小，撓操作侵方便貌等優(yōu)游點，悅但它化尚難鈔絕對郵除去綁病毒貫類微貍生物煌，而天且灰寶塵過默多對癢凈化英作用動不利利，故漫超凈巡工作薦臺最栗好安安置在式清潔劇無塵闖的房茄間。粗粘爪超解5.飄清山洗和查消毒疑設(shè)置牌：培悲養(yǎng)中稿所用極玻璃潛器皿疾可用瞇電熱芒干燥龍箱消庸毒，揮要求該溫度條16股0件℃雁以上懲，最微好使猜用較侵大規(guī)左格的謊干燥所箱，飾如6洽50趣×汁50艘0揀×刮50若0m與m推。雞對王器皿僚的清熄洗可偏用超反聲波貞洗滌漂器。栗吸管組的清局洗采衡用虹耐吸原作理制軍成的評沖洗頓裝置盈。金位屬器剖械如沒解剖蘆刀、插虹膜猜剪、憤鑷子眉、尖岔鑷、擦止血貓鉗等昏可用筑高壓單蒸汽肯消毒目。第因曾6.泡培脅養(yǎng)器裂皿疏為牌了清啞洗的睜方便帝，塑孫料瓶雨皿正撫逐步撇取代發(fā)玻璃奔瓶皿葬。特男制的鄭塑料鵲瓶皿俱具有廢透明伸、平祥滑、奪無毒桿性、墻有利梯于細滑胞生納長的殺優(yōu)點喜。主民要的秤塑料天瓶皿枯有；使①榴多孔排培養(yǎng)顯板，清其規(guī)溪格有燦4孔蒸、6壺孔、跑24乎孔及笑96考孔，秘它體悼積小刻，適懸于少談量細其胞或傘單個溝細胞棒克隆妖的生是長；抽②結(jié)培養(yǎng)僑皿，糟規(guī)格受有直握徑貞30阻mm迷、麗60墨mm首及l(fā)益00寫mm逆，與聰玻璃撈培養(yǎng)說皿相某同，政尤其常有利蘇于集秀落形扶成和即細胞陡轉(zhuǎn)化冠等試崗驗；榴③退培養(yǎng)菊瓶，苗帶有拴螺旋其蓋塞莫，規(guī)腸格有編30搏ml注、5廳0m步l、遇l0疏0m欣l及猾50氏0m槽l，吩適于蜻在C圍O偷2糖培養(yǎng)召箱中慚使用喂；濫④糞其它把：凍褲存細輝胞的喝塑料斧安瓿市及微版量加透樣器棵頭，熱后者監(jiān)的規(guī)暢格有帶20那0~沒10總00駱μ講1和律1協(xié)μ嘆l~貫10塵0廁μ奮l二槳種。女蜻往脊旬玻璃涉器皿榜在實肅驗室涼仍不扁能完視全被灣塑料格制品巖取代雄，除責培養(yǎng)水皿和看培養(yǎng)金瓶外吹，主果要還握有：遮①諷吸管堡，它需包括沙刻度球吸管頃和移紀液管勒，常艷用規(guī)槍格有已l0耍ml層，5粱ml吩和l姓ml估；淡②撓玻璃示瓶，罪用于詠配制峰各種粉培養(yǎng)捐液的提儲貯券存液出和血刺清等犬，可軌用生經(jīng)理鹽左水瓶辭或血辛漿瓶鼠代替晌，規(guī)墻格有案50想0m眼l、承25蔥0m挎l和杠l0旗0m綁l；懷③撐離心殺管，硬規(guī)格欲有5泛0m仗l、火l0辟ml澇和5厘ml喂，用視于細錢胞洗橋滌。韻藥捎7.歷液銳氮貯垃存器只鳥貯存墨細胞分多用歲液氮考，液緊氮溫旺度在鐵-1衡96?！嬲?，具亞有經(jīng)棗濟、食省力抹和能靈較好螺保持俊細胞滅生物紫學特刷性的求優(yōu)點斯。液詳?shù)A枝存器虎有緊25嗚L分和幕50滅L雪兩種低規(guī)格臣，它愧與液遭氮運甚輸瓶歉，或會稱杜斬瓦瓶篩不同次，因梁液氮餓貯存維器一算般每耗兩周早需補曲充一侵次液練氮。汁如有脈需要根可配扯置貯漂存器路和運段輸瓶叨。塑媽棟8.垃水英純化肆裝置耐暑細胞藏培養(yǎng)洋對水過的要黎求較錄高，謝通常定要求冒使用返三次輕蒸餾或水配夸制各傲種培偵養(yǎng)液燈。對克玻璃三器皿煎也應(yīng)持用純鑼水清肅洗。侄但是頁，在硬細胞苗培養(yǎng)晃中，歲不宜增使用諸去離條子純開水，敢因其怨不能藍有效刺地去夏除有擾機物神。劑交唇實驗諒室應(yīng)希配備攏自動葬加水奏石英生玻璃寇管加女熱的臣蒸餾因器，學具有刷蒸餾就速度腳快，碰使用曾安全狀等優(yōu)爪點。垂外購柏蒸餾胃水或避去離摟子，通應(yīng)在艷本實根驗室宜重蒸拿后使肥用。緊對水悟質(zhì)量委應(yīng)經(jīng)齊常檢妨測，澆如p字H和巾電導(dǎo)姨系數(shù)宜。同迫一實幣驗盡糊量使泄用同澡一水祖源，魔避免子水質(zhì)勒量造鉗成結(jié)貫果的字差異初。趨昂躍漏冠9.糟濾凈過消蕩毒裝舅置棚培掏養(yǎng)介河質(zhì)不劈能經(jīng)庫高壓毀蒸汽環(huán)消毒劍，而易需通逼過孔則徑為抬0.盟22季μ背l的狹濾膜影過濾禍消毒蝦。濾鏈過消擁毒裝爭置由狀抽氣使泵(個水流株玻璃矩抽氣隸泵或進真空督泵)紹、安駕全瓶刪、抽糖濾瓶兇和濾破器組脊成。俗10幻.帥一般合設(shè)備前必離心虛機，貿(mào)用于益對細狀胞懸縮液離討心處能理，圾以達亞到細撓胞洗屈滌、遼調(diào)節(jié)榆細胞縮濃度塵等。療炮擺天平握，包帶括普絡(luò)通臺壩秤、汽扭力付天平吹和分懸析天裙平，頸用于起配制波各種堪培養(yǎng)葉液、虜酶消春化液魚及生破理鹽膛水等氣。妙唉疊匆升酸度槐計，蜻用于眠準確辰調(diào)整比各種雨介質(zhì)扣及生胖理鹽朝水的訊pH絡(luò)。湖幟盈電磁匹攪拌悄器，比微量狡加樣胞器等慣。畢診呼(二興)營培養(yǎng)閘用液嘆濕燃指細孫胞培響?zhàn)B中柔所使截用的歡溶液扭，如遞培養(yǎng)更液、右消化祥液、摸pH省調(diào)整遣液、泥染液炮及細治胞洗斥滌液譜等。冊培養(yǎng)康液的激選擇膏取決答于細彼胞生系長的陰要求銜，故儉它是孫維持清細胞演生存方和生砌長所征需的覆基本技溶液裕，它需的主任要成直分為彼平衡屆鹽溶墨液和謝適應(yīng)潤細胞辛體外車培養(yǎng)接的各脈種溶巷液。普涌面件窮培養(yǎng)襯液在擠制備毀過程富中應(yīng)咽嚴格筆操作喝，避芝免混央入雜戴質(zhì)。穗應(yīng)特萬別注晴意下兇列問疼題：熱①耍容器今，應(yīng)挖仔細疫認真伏清洗萬，必塊要時久須消溪毒；于②章水，英三次舒重蒸凱蒸餾爆水；促③緩嚴格稿選擇諒品質(zhì)免優(yōu)良好的藥鐮品；信④晉制備掩好的艱培養(yǎng)痛介質(zhì)搶要標豆明名羞稱、撓配制支日期歷及配系制者與；焰⑤躺貯存勺與消釘毒。生袋績鳴猾1.霉平規(guī)衡鹽場溶液最筑常用住的有驢Ha支nk罵s液疲、E搞ag低le燥液及維磷酸低鹽緩尚沖液屠(嫩PB老S)魯?shù)?。運它具激有維咐持滲感透壓哥、控葛制酸擴堿度允平衡疫的作吉用及洪供給營細胞冷生存及所需獨的能謝量和舟無機躬鹽的留成分徒。它首是配南制各存種培價養(yǎng)介免質(zhì)的釋基礎(chǔ)攀溶液報，也淹是洗挎滌細憂胞的梳溶液故。唐滋鏟綱為2.脹小翼牛血噸清生是才細胞彼培養(yǎng)床中最摘常見邪的天還然培蓄養(yǎng)基執(zhí)，它隱具有襪豐富趙的營吼養(yǎng)物連質(zhì)，端對細限胞附炸著和刪保護蜻也有雨明顯黑的作約用。廊但它驢有成魄分較老為復(fù)續(xù)雜、特個體葵差異取較大慌、來巷源也不有一握定的宵限制耽等不駐足。哥彌補惹個體巖差異砌的辦念法是歷對血仍清進粘行無輝菌檢德測和獻支持梁生長秋能力疲測定騰后，慌混合刃使用豐。天情然培真養(yǎng)基筑除小碑牛血萌清外皇，還堂有雞園血漿則、雞喘胚浸法出液求、水攻解乳市蛋白掉和鼠需尾膠兆原等向。臭佳需3.壽合歸成培棉養(yǎng)基桃施系依建據(jù)天旅然培小養(yǎng)基丑的成待分，項用化考學物莫質(zhì)模臘擬合驅(qū)成的妹。如概最簡遍單的包ME成M嫌Ea翁gl神e培巾養(yǎng)液奴，包辛括1疏2種究必需愧氨基弟酸、譽谷氨插酸胺夫和8懸種維恐生素科。根址據(jù)需留要可界添加越某些紫成分半，如贈碳水哨化合河物(斜葡萄袖糖、忠核糖版、脫墳氧核泡糖及聾丙酮糾酸鈉這等)層、核巷酸的否前體壺物(瀉嘌呤劃和嘧遇啶類梨化合拋物)孝及氧濟化還肯原劑柔，抗母壞血餡酸、膏谷胱煙甘肽違等。姻怨則如進異行無轟血清計培養(yǎng)刻，除乘上述貧營養(yǎng)貿(mào)成分申外，命還應(yīng)圾加入量纖維壟連結(jié)估素、殊多聚愚賴氨淹酸和幟膠原散等成賓分以車促進顆細胞臺貼壁助。有遮時，騾還需溫要加草入酶供的抑絨制劑駕，如蛛大豆蠟胰酶針抑制離劑。蝦乏難為了亞防止嫌由于命操作奉不慎謊所致喉的污旅染，柜可加俱入抗傅生素季。常得用抗仇生素劈有青饞霉素忙、鏈告霉素約及慶端大霉棚素等湖。仿趨朋4.顧消忌化液脹紙進行嘴傳代叨細胞警培養(yǎng)打時，忽為了貿(mào)使細即胞脫鴨離生喂長表蟲面和瓜細胞棄離散膝成單興個細歐胞，柄通常旋使用偉消化姑液。圓常用喜的消錦化液原有胰財?shù)鞍状芤猴?0款.2梳5％唯或0害.1電25猾％)疫和乙本二胺枕四乙誰酸二短鈉(挨Na騾2讓-E亮DT揭A)需溶液數(shù)(0跟.0語2％殼)。正墓?jié)u四身5.邁其案它缸p劫H調(diào)姨整液萍，為宣了營過養(yǎng)成景分穩(wěn)凱定和外延長示貯存?zhèn)}時間堪，配悟制生炸理鹽悟溶液起，和嗎培養(yǎng)壽液時禽，均綠在臨涼用前卻加入喚Na渣HC朋O晃3綢溶液窗。常點用濃種度有女3.鼠7％問、5基.6叔％和絡(luò)7.地4%搶。此柳外，縫還有劍HE伸PE黃S溶矮液，帳是一劑種氫永離子鵲緩沖精劑，館能較否長時寧間保豈持恒拆定的虎pH寒值范硬圍。理使用摧終濃露度為手10阿～1徒5m確mo播l／遲L。寧店霉染色慨液：房常用巨的有艇①譽蘇木姥精-世伊紅別染色叼液或獸稱H傾.E面染色應(yīng)；誕②個Gi脈em用sa令染色你液。床本插固定栗液：繁常用固的有騎①眾中性壇緩沖家福爾錘馬林朋，相或當于圍10讀％的有福爾叛馬林絲；離②象Bo濱ui至n氏責固定革液；威③風醋酸乓甲醇到，臨百用前弦配制盤，結(jié)逢合G課ie拆ms三a染徒色效沉果較反好；訂④淘FA餓A固棵定液翁，由敢福爾嗎馬林紹、冰耕醋酸驅(qū)及8爐0％刑酒精絨組成徒，用膨于蓋章片單質(zhì)層培庫養(yǎng)的械固定隊。餓爪溪(三態(tài))去消毒憶技術(shù)異鄉(xiāng)饑在細茶胞培虜養(yǎng)中殃，消夫毒是裳最基愉本的較一項硬工作右，它養(yǎng)直接出影響秘實驗節(jié)的結(jié)勻果。財消毒搖措施溝應(yīng)在船細胞拋培養(yǎng)闖的每憐個環(huán)饞節(jié)嚴用格執(zhí)特行。同細胞兔培養(yǎng)折的微評生物害污染隔，包楚括細園菌、繼真菌睡及病雙毒，跌它們速主要躺來源批于：書操作懼者的這粗心激；操謀作表囑面或偉周圍瘡的環(huán)熔境；它培養(yǎng)群液及鑼培養(yǎng)鐘器皿撓的滅爽菌不融徹底饒或存豈放時斗間過霜久等匠。顆榴賴對不綿同的圓細胞蜜培養(yǎng)茂所用赴物品犧，可財采用處不同專的消仰毒滅奉菌的側(cè)方法清。一劣般有地兩類臨：一征是物聾理滅睛菌法握，即構(gòu)利用百紫外末線、喉干熱凡及微扁孔過湊濾等通；二拜是化裕學滅盞菌法礙，即偉利用悅化學輪消毒億劑。朽主要您消毒程方面圍法介中紹如艙下：手斧劇1.蔬紫勤外線哄季適于柱消毒蓄空氣捧、操汁作表考面及隸一些忽不宜儲用其爐它方險法消棋毒的榜物品紀和培辭養(yǎng)板悔等，棗使用出方便偵，效作果較沃好?；脩?yīng)注瞎意其君可產(chǎn)撓生臭鍋氧，康影響壟健康組。壤犬津登燃2.遇高它壓蒸倍氣消靠毒垮它屈適于單金屬策器械萄、膠倆塞、型布類續(xù)及某晨些培秧養(yǎng)液賺。一仁般要莊求躬15乖磅頁壓力撞下2怠0m偏in忘?；蜣p者更苦簡單兩的，翻煮沸稀消毒稿，其弄不足尸是濕遮度大端，不沿易久董存。緒笑賓3.尤干遙熱消筐毒唇適嚷于玻含璃器唯皿，恐消毒雜后器杠皿保最持干塌燥并籍便于級使用月貯存晉。加船溫應(yīng)姜到等16商0壺℃蘿，保擱持9籌0-始12莫0m蒜in陽。鈔黎預(yù)4.懼濾士過消吼毒射適謎于大忽多數(shù)裕培養(yǎng)球用液沒。選置擇孔嬸徑為蓬0.節(jié)22饅μ象m的竿微孔欄濾膜押，過陜?yōu)V除道菌效汪果較熟佳。缺貢隱5.嶺消升毒劑條促適于額操作摧者的累皮膚脅、操橫作表第面和立臺面尾、桌撲椅及典墻壁恒等，愁常用臭的消悼毒劑毒有來絨蘇兒鳳、新扣潔爾模滅、賓過氧鍵乙酸右及7惰0％真酒精栗。倉三、流培養(yǎng)燙細胞遣的鑒猛定滴督熱臨汽對培嗽養(yǎng)細鞠胞的浴鑒定芽有兩秀個目解的：疾一是扭觀察省培養(yǎng)鑼有無收變化閣，以許決定屈是否符終止叫培養(yǎng)找，并怕從冷肢凍貯派存的錯樣品扒重新豐建立諸新的孩培養(yǎng)猛細胞丈；二潔是培單養(yǎng)條拿件(中如培搭養(yǎng)液脾)變省化，題對培炒養(yǎng)細豬胞的路影響談。因辨為培給養(yǎng)條驢件的擱一致菠性，別對于波實驗輛結(jié)果家的可先信性推有極置為重痛要的礦影響災(zāi)。對隨于培跪養(yǎng)細股胞的乳鑒定汁包括籮污染鄙鑒定婦、生洋存指縣標及哲細胞革性質(zhì)端(如醬細胞兄形態(tài)督、生堤長特斥性、盯染色猜體數(shù)就目及病結(jié)構(gòu)騾等)沿。燕潤躬(一序)崗污染賞鑒定狐縮囑細胞席培養(yǎng)丑中常繩見的逐污染慨有真匙菌、高細菌棍和支箱原體慌等，繞此外脊有化壺學物洗和非倆同一客種細餡胞的閃污染句。受離到污千染的企細胞山培養(yǎng)忽可明君顯地久改變絕生長于特性即，引敵起p紫H變款化和戒生長氧遲緩朗。污抗染常超常表瓜現(xiàn)為鑄pH稻變化候，培毯養(yǎng)液擊表面顧起泡嚇或起貝膜，勺培養(yǎng)攔液中啞的絮遼狀物腿及細齊胞生偉長表年面的栽斑點尿，搖療動培剃養(yǎng)器接皿可旅消失請。肉禿眼見殊不到不的污細染可懸影響陵細胞哥的代幕謝。灑桐匙1.盲鑒誼定方榮法忠真雪菌或種細菌摧的污蹈染可伏用肉判眼或寇低倍帖光學癥顯微擴鏡觀牙察，童支原譽體僅訊能用譯特別膠的熒織光染汗料如侄Ho管ec敘hs茅t津33蘇25達8染慨色后浪在光懶學顯巧微鏡嗚下，鎖或用滔掃描恥電子插顯微元鏡觀餡察。巷由于笨用肉眼眼無梅法發(fā)氏現(xiàn)支測原體聰?shù)奈壑?，懸在細肌胞培墓養(yǎng)過敗程中餃應(yīng)經(jīng)燭常定瞞期檢約查，鹽例如比每三臣個月斜。最聲簡便巖和最堂可靠樓的檢辨測支喂原體糧的方根法是窯用熒竟光染霸料染綢色在顯顯微等鏡下這觀察腫。獄信撲2.鈔處滲理狹基角本的變良好押消毒回技術(shù)嫌并不碼一定糕能防榮止污幣染，鞠還應(yīng)刻注意靜下列扁方面玉：消耐毒步舟驟(疾如高術(shù)壓鍋粱和干堤熱消海毒柜隔)的避效果花；多指層流仆防護泡罩的鴨消毒乖效果翅；經(jīng)燭常檢奉查培影養(yǎng)器激皿；饒每個袍工作裁者有姥自己減配制倒的培燒養(yǎng)用錫液，糖處理乏受污偉染的愁培養(yǎng)枕用具松和環(huán)局境。罩對于仙已污符染或蜓懷疑晨污染秒的培惑養(yǎng)用允具均仔可用睜2.疲5％箭高氯胳酸處枝理。元用抗切生素架對預(yù)掌防或稠去除閘細菌搭污染乏較為夠有效廚。對常支原哄體污團染，餓消除爪方法擔較多嶼，如堵抗生侍素、蘇加溫匙及動積物體捷內(nèi)接雹種等悼，但碎都較聚為繁終瑣，街且效閑果不瘋甚滿頂意，托最好太的辦秘法是白棄去星，再日重新馬培養(yǎng)略?？部?二譯)鼻生存雪指標寶王光1.都臺翅盼藍嫌排斥評試驗而打是判俱定細慕胞損誤傷的諸快速聚試驗分，它毒還可巷很方戲便進圓行細蔑胞計賓數(shù)。笛具體罪方法芹如下存：愛①主取少劫量細纏胞混裳懸液豎，加點人等郵量的夸0.琴5％流臺盼死藍溶下液。楚②叮放置柴1-震5m單in捆后，輛將混右合液釋滴入論血細梨胞計更數(shù)池圍內(nèi)。裕③押顯微本鏡下慣，細郊胞顯設(shè)藍色隊的為躲死亡掛細胞跡，尤職其是疾核深添染，括而未壺染的安細胞青為存毒活細蔬胞。葛統(tǒng)計涌出細遲胞總墓數(shù)后只，可絨計算啞出細夫胞存嚇活率伙。殊戶柏2.惱酶門漏出銹的檢卡測闊胞叫漿酶迎如乳弦酸脫統(tǒng)氫酶縫(L青DH悅)的過漏出圾檢測鍵也與膽染料謊排斥綠試驗棟有同哥樣的幸靈敏呈度，師同時軟，可按更精挪確地勢進行史定量角，但排操作巴時間并較長暈。忙里部(1駕)哭儀器遲：分出光光言度計神，最懷好配補有溫顫育(針37寫℃仇)的謊裝置騰。刑回零(2譜)鏟試劑導(dǎo)：紐汽岸溶液木凱0.頁9％輸Na欺Cl耍，0露.1睡％T槐ri灑to雷rX雀-1樸00室和0佳.1倡％牛否血清短白蛋登白。際衡漂底物墳謎3.滑5g濟K湖2確HP謝O挨4挨，0攔.4潑5g葡kH旁2盈PO蓋4博和3助1.損0m襯g丙滲酮酸蜘鈉溶僑于4弓50譯ml訪的蒸高餾水粒。配鴿好后邊，可漁貯存廁于猴-2耕0終℃放的冰哈箱內(nèi)餐。棉裂遍NA添DH級，稱古42鏟mg凳，溶狀于4挎.5婚ml攜的1界％N狂aH凱CO協(xié)3夾，臨房用前執(zhí)配制典。誘思床(3狹)定操作貞步驟攝：離鞋心，貸以適善當速食度使胡所有啊細胞頓沉淀之而不稱引起繪細胞劉損傷私。例錯如肝瞎細胞畫用愈50諷g吸×欣2m廣in胳。取牽出上動清，謙放人素干凈死試管儲，并省保持瘦0逃℃療以下陜備用暈，加虎入等寺量的壩溶液發(fā)至細喜胞沉霜淀，竹用漩但渦混厚合器涌混合帽。保醋持在錫0洲℃全以下飛，備性用。單贏怠取一由比色答杯，案加3防m(xù)l筋底物佩，5訂0通μ以l的他NA利DH笨和2百5~弱20結(jié)0肢μ紫l的企樣品遇(取金決于棉培養(yǎng)倦細胞啊的種膊類)借，迅蠻速混輪合后充，在隸34遣0n術(shù)m處蜜進行咱比色鉗。整輝個過泳程應(yīng)聚在病37稼℃齡條件葛下完獎成。射計算己上清孔或沉堆淀(走即溶暗液中磁細胞腿)的袋LD郵H活奔性，削漏出血率表照示方報法為壺培養(yǎng)憤液中散LD足H活渣性占論總的堆LD訓H活青性的盲百分斬率。律研射3.榆其烘它方佩法險鉻租的釋盤放，天利用收51符Cr抖3+只可被僵活細艘胞吸夸收，腎并還天原成張51悔Cr騾3+孔，留描在胞耳內(nèi)，煩而死淘亡細團胞則艇釋放榜51橡Cr鐮3+京。用備r-花計數(shù)恢器檢雁測無役細胞襯上清丸液中醒51場Cr淡3+集的量雕，即培可判越斷培顯養(yǎng)細動胞的騙存活首情況粥。還輝有貼布壁效底率和館AT干P含波量等過指標正可鑒朋定培送養(yǎng)細望胞的臨存活寒情況壯。融尤造(三廉)遺細胞球特性大鑒定等幟價在連連續(xù)培詞養(yǎng)期糾間，易細胞爬可能懲發(fā)生房某些艘變化大，如虧細胞渴與原呢始細毀胞的跌差異癢逐漸桂加大肢。但鑼每一嚇細胞愿株具身有一濾系列傳細胞頭特性國“糠正常旗”美的參柳數(shù)，志可供射鑒定浴評價項。例桌如，引形態(tài)你學參于數(shù)、季生長殊特性戒及染訪色體膊分析量等皆繡為細爺胞特尖性鑒撿定的腔指標臣，其擊中形糟態(tài)學懇與生輕長特幅性的隆測定譯相對繞容易幼進行脫。胸榆左1.法形喪態(tài)學龜檢查浙繼評價代細胞沃正常艦與否凳的最典簡單躺方法那是形司態(tài)學此檢查烏；應(yīng)俊在每注次傳軟代時鬧用倒撓置顯敗微鏡置進行餡觀察符，最絞好拍豆照記窄錄細旦胞的雁形態(tài)器。要擱詳細保地描奴述每誘一細妹胞系鐮的形弟態(tài)。草若因糖限于堤篇幅襲，不侄能詳被述，屠可掌光握兩即個述議語，雖即提“都成纖遲維樣璃”芝和鏡“俱上皮湖樣范”盈細胞蘭，即害可描藍述所瞧觀察籍的細犧胞。孕成纖禮維樣秋細胞孝系指倍在單街層細舊胞培唯養(yǎng)時但，細煉胞的誠長度戴要大圈于其刊寬度條的兩扇倍的糧細胞親，而巧上皮逼樣細校胞系像指呈圓多角賄形的塔細胞月。塑健啟2.銜生用長特撕性的漿檢查刑廢在培卸養(yǎng)細氧胞時乏，其假生長區(qū)特性笑的檢偉查較直易進洲行，柏主要勵通過抵測定巖更換敏培養(yǎng)史液的擾時間搜和傳壺代的究時間顯來完忽成。墊雖然摧不同勇的細埋胞其輝傳代偽時間屯和更憐換培派養(yǎng)液遭的時玻間不沙同，蜜但對植于每化一細貍胞系牧應(yīng)該體較為川固定廈，因五為主限要取章決于睬細胞集生長著速率棕。攔列肚瞇南每個咱細胞副系均約有其靈自己寒的生鍵長循巴環(huán)周爛期，民這取糾決于掩接種范進行開培養(yǎng)和的細嫂胞數(shù)蓮目。吊一般坊認為階，在爭培養(yǎng)澆中的濤細胞錘，是鴿處于宜不同煩的生瓦長階斧段。擋進行饞生長凍分析簽，應(yīng)皮觀察懂單個企細胞膀的生愿長速月率?？自趯嶆?zhèn)際工離作中藝，是施測定鏈克隆夜效率在或者布接種話效率涼?？舜衣⌒{率是春測定偉由單傍個細弦胞生澇長的頌克隆揚。接頃種效源率是遍測定爽植入嬌小量餓細胞蜻(2業(yè)~5耍0個印／c雁m缸2難)后逢，等燙生長具至可警分辨踢的小張克隆勉時，騙經(jīng)用琴生理說鹽水照洗滌叮，甲嚷醇固樹定，奸吉姆僵沙染恭色(未2m蝴l／誕25柴cm描2符)和玩清水戀沖洗燃后，魯計算青克隆圍數(shù)。涂接種悄效率優(yōu)=豎占合一般并認為疫，傳母代效銳率小回于3拘0表境示生笨長不伐正常纖。此葵項指播標可遺用于叮正常臥細胞溪生長慌的監(jiān)續(xù)測，耐貯存香細胞睛的復(fù)蠅蘇及剝鑒定笛每一孟批血肢清等何。掉債概在細廢胞培土養(yǎng)試扣驗中殊，一午般監(jiān)來測指訪標可凡采用債形態(tài)柴學、避生長配模式舞及接鉤種效幻率即鼻可。扁玉蒸3.誤其振它檢罰查盞除流上述偷指標鏈外，尤在細豬胞培跨養(yǎng)時昨，可熟進行設(shè)染色血體分叔析，箏包括適染色學體的治數(shù)目斯和結(jié)濕構(gòu)以蹲及D宗NA常、R著NA豈和蛋黨白質(zhì)債的含豆量測旗定，斷來判熊斷培霸養(yǎng)細正胞的蠅特性膽。洲七、故細胞幕培養(yǎng)飛在食辨品毒梁理學涂中應(yīng)關(guān)用蜂稍壽利用馳培養(yǎng)酬的細皆胞，止可進鄙行多隱方面乓的毒碰理學掃研究甚，如鞠表1芬2-泛4中曬所列倍。季表1功2-惰4桿培碰養(yǎng)細崇胞用顛于毒按理學疏體外抓實驗雜的實段例傾挺巡廊一般挨毒性斷：主再要為告急性演細胞獄毒性茄同遺器官沙特異扮性毒幼性：獎利用青有代則表性揉細胞擔類型冶如肝嶺細胞邪、腎企近曲宣小管挪細胞擔、神業(yè)經(jīng)細匹胞及穗心肌確細胞澤等：造煉帝恨毒作敵用機逼理戴悅經(jīng)眠生物猜轉(zhuǎn)化懷、毒早性代杏謝產(chǎn)耐物的滅形成雖候蘆懂遺傳千毒性媽，如類程序昏外D誓NA雄合成掩測定穗債勸陜繁殖磨毒性挪沖艙傍聯(lián)合傳毒性龍顫精東不同版物種躍間的墾比較勝毒性披滑茂秒光敏或毒性偶院改以下首重點肌討論升毒理樂學中再應(yīng)用縫細胞究培養(yǎng)趕技術(shù)啊時應(yīng)校注意刪的幾煎個問妖題。紡倘殲1.縮細凳胞類氧型的燥選擇山笑細胞娘類型夏的選拐擇取釋決于置實驗主的目叨的。宴一般最性篩勺選系潔列化漂合物辯的一裁般毒輕性時斑，應(yīng)見選擇凍生長恐迅速離且易貢于處遣理的埋細胞長系。襖機理作研究排多不沈用細花胞系甩，因骨為培邁養(yǎng)的溪細胞難會逐意漸喪亡失許近多功巷能，衛(wèi)如細級胞色盯素P旨-4洋50響的活智性。葵捉街泡邁細胞顯培養(yǎng)峽的優(yōu)匙點之列一是鳥可選緒擇來雀源于誰人體先的組蒼織細懲胞，斥可減被少試樣驗結(jié)留果的曉物種歡差異燃。成偶纖維銜樣細所胞和惡上皮觀樣細班胞均尿可選趴用。缺常用篇的細檢胞系老有C祖HO俘、V性79蓋、H爹el暈a、蹤BH悟R及墻L9揭29豆等。對許政2.甚代洗謝活馳化速細理胞經(jīng)遞8-歉24源h培玩養(yǎng)后堅，細訓胞色敏素P禁-4仿50迫活性登將迅伯速下犬降。潮而在拔CH堵O細拖胞系右中，片涉及潛代謝易活化南的酶膜活性丹下降怨。所敲以，牛培養(yǎng)水細胞征對需旅代謝有活化舍的化反學物愿不能險夠敏介感。度告母解決于這個霸問題退有兩享個方銅法，鴨一是餡加S晌9，溪二是折與原總代肝監(jiān)細胞奪復(fù)合誰培養(yǎng)路。S慶9需結(jié)要N糠AD介PH江才具睬有代鍛謝活潮化作葛用，陵故在黑培養(yǎng)廈液中正應(yīng)加遠有N頸AD報PH旨生成娘系統(tǒng)媽(葡將萄糖罵-6壽-磷成酸脫可氫酶牢、葡摸萄糖耳-6還-磷鑒酸和恰NA滑DP所)。繡與原鑄代肝鐮細胞豈進行奸復(fù)合菌培養(yǎng)膊時也坦可采哀用其品它不逮同的濁細胞棵系，腿如V桐79脖、中劃國地禾鼠肺扒成纖終維細獎胞和歐人成捷纖維傘細胞唯。守盜媽慢澤3.龍受紡試物旁的給失予許參多瓣受豬試物房由于擱水溶門性較巧低，辨在加喇入培倚養(yǎng)液典前，腔常需建溶于元有機零溶劑厭有機暮溶劑作對細龜胞有蹲損害洲作用誤，故田應(yīng)限膊制有籌機溶沾劑濃蠶度在留1％若以下登。在收試驗命中可求設(shè)立險適當東的有滅機溶鹿劑對扮照和準培養(yǎng)勻液對涂照。謀例如雀，需搜用S都9混略合液研；有要機溶溫劑的腸濃度伯應(yīng)限免制在營0.遣1％資，因須為許節(jié)多有耍機溶衰劑可瀉抑制未酶的您活性廊。不促溶性周的受膏試物濁如，鋸顆粒哪和油堂劑在炒給予色培養(yǎng)澆液時膝仍存睬在問莊題。文一般網(wǎng)是混店懸于疤培養(yǎng)傅液或腦者先賢溶于未溶劑轟，再索加人武培養(yǎng)趁液，幫但有結(jié)時會葛產(chǎn)生軌不同變的毒兆性結(jié)子果。迷例如敲，黃謊樟醚賺和降額脂乙芳醚等床油性仔受試湯物，杯假如鐵使用墓高劑乞量時羞將有占某些擊塑料絮培養(yǎng)啊皿成尤分的恥溶出申，則郵所觀袖察到針的毒奉性作濱用可緒能部份分地換是由遙于某望些塑椒料成狐分所餐致。博牛暈4.挑設(shè)味立陽肅性對事照組槳翅實驗呼系統(tǒng)科的重沈現(xiàn)性村應(yīng)該踢用陽迫性對殖照物耳來檢邊查。府陽性李對照河物指繩采用涼經(jīng)過膜研究甜或公干認有圖特定權(quán)作用課的化論學物追。例污如在墨代謝齒活化挪研究母中常四選擇婦環(huán)磷皆酰胺戀為陽險性對頑照物叔，在鳳細胞莫毒性元篩檢泥時可西選二勾甲基巡環(huán)己喚基烴際乙基依戊二蔥酰亞害胺和扮二硝竹基苯基酚為閱陽性禽對照訂物。廉硬止哨5.塵毒萄性指剝標的式選擇適粘依據(jù)譯不同布的試尚驗?zāi)砍降暮蛽囼灱l件逗，可泳選擇濤不同納的觀注察指堪標。蠟下列恒指標波在毒蛙理學安中經(jīng)懲常采驅(qū)用：登菌補(1局)沙IC乏50固：即長經(jīng)3屯天培群養(yǎng)后雙，引斃起生鎖長速抵率減什至對綠照組艇一半匠時所很需受智試物涌的濃保度生帆長速宅率可狀用蛋診白總陸濃度佳來表虧示，并可用天于細啞胞毒干性的蕉常規(guī)裙篩檢凝。此臘外，講前述故評價嗚細胞犁特性環(huán)的指馳標，性如形處態(tài)學蹦和接啊種效披率等含，均拳可采縮用。禿丸箱(2肉)糾細胞澤膜損沫傷：光可選疤擇臺滴盼藍辦攝取刮、胞坦?jié){酶淘漏出群、C漲a距2+伴的釋靜放以笨及鈣努泵的云變化煤等指畜標來績評價堪細胞絨膜的暈損傷農(nóng)。蛛副許(3丑)鋪大分尸子物蓋質(zhì)合補成與超降解簡的改排變：鐵可選烘用[同14孫C氏]亮擇氨酸寄蛋白束試驗豪和[顏3局H]榮尿嘧采啶參拘入R站NA網(wǎng)試驗錯等指俗標，靈以判尖斷受刑試物予對培刮養(yǎng)細撒胞的麥大分耐子合燭成與柳降解廉的有默無作及用。惱盾攜(4嚴)士代謝控能力期：除商可選冬擇A昌TP梳濃度嗚、N筑AD披P／汁NA蔥DP旬H比催、谷劇胱甘淺肽含禮量、踏氧消補耗量徒等指衛(wèi)標外皇，還謎有毒軍物代徹謝酶滋的活死性、至細胞級膜脂潔質(zhì)過秀氧化玻作用茫及[售14跌C及]宗-葡拍萄糖野氧化悄代謝僅成反14題CO壘2恭的速童率，昨均可但反映養(yǎng)出細旁胞的坑代謝噴能力寨。驅(qū)蕉葵挑震(5做)膜形態(tài)茄學觀陵察：說通過撇光學枕顯微凡鏡和批電子慚顯微幟鏡觀話察，太可了榮解受帽試物股對培絞養(yǎng)細疼胞的考形態(tài)受改變持情況黃。輩堤亞細廈胞組侮分制去備及寶其檢總測方族法勵痛煮細胞譽由許置多亞糧細胞雕組分塑組成叢，如溉核、蕩線?？俭w、作內(nèi)質(zhì)嫂網(wǎng)膜執(zhí)、溶憤酶體施及高鍛爾基鑼氏體觀等，梢它們田在維配持細備胞正慘常生貞理功污能方勞面起乞著重宵要的原作用絹。故草許多泛外源報化學斃物引休起機側(cè)體的牲損害省作用絕，有編可能墓與亞惹細胞建組分網(wǎng)的結(jié)扛構(gòu)與睡功能恥損傷彩有關(guān)普。在晃毒理甘學中蒸，亞封細胞厘組分屈作為膊遺傳況毒性佳測定制中的室代謝深活化震系統(tǒng)秩，如歇S9島已普所遍運您用。輔此外統(tǒng)，亞虜細胞叛組分橫主要刊用于百中毒祖機理門的分頂子水友平研怨究，險因它揪們是禍從整稱體細巡胞上除在自欲然環(huán)課境下撕分離診出來停的，腳使毒也理學建家在途體外避條件沫下，暫有可淋能更閉深入皺了解承外源到化學咽物在拾毒作鋤用部倍位的樣作用討機理沿。但停它離遞開子與整體肥細胞硬，也會有其貓局限昂性；炎即它倚僅提柄供有門關(guān)一嚇些特丹殊作爪用能喇力的英特定捏信息遞。對連外源瞞化學廊物毒薄作用日機理溪研究臥，還滴應(yīng)結(jié)罰合其顛它研犧究如爺整體閉試驗域、細們胞試頃驗等替，綜閣合作到出評翻價。凍現(xiàn)就志微粒忠體和美線粒笨體的赤制備活及其堪檢測沒方法摩加以房介紹房。忽一、泳基本豈技術(shù)培斬做(一企)乞設(shè)備級散注1.踐勻旺漿器拒(h迎om郊og獎en瞎iz連er化)槍常悼用勻酷漿器縣為P弟ot斯te惡r型麗，由榆一聚錘四氟椒乙烯赴杵和次玻璃某套管井組成據(jù)。它滲是利霜用兩欺者的搖間隙講將細增胞破叉碎，殲其間隨隙一趁般在澤0.面15否~0腎.2吊5n垂m。是杵是征由馬拳達傳浸動，吹其速除度在案20進00勻rp壓m以膚內(nèi)，扭且可已調(diào)節(jié)舟。它珠較適搭合肝桑細胞怨、腎惕細胞請及腦擁細胞崇的破詢碎，避而對河肺、企甲狀晶腺等聰結(jié)締避組織逢較多物的組員織效它果不遺佳。鉛勻漿漁器可抄從5票ml她至5侮0m燭l大冬小不盞等，造依實敲驗需孤要加沿以選娃擇。笛使用夜本法冊破碎錢細胞哨應(yīng)注帳意：全①甲在低圾溫下蒙操作果避免繭勻漿烏磨擦紐生熱忍和室倒溫影清響實攏驗結(jié)燭果；弦②售馬達棄速度份不宜揉過快動，慢腎速可榜獲更看大的輝扭力客矩；謙③騎勻漿俯上下隙次數(shù)你，即快杵由吧玻璃民套管蠶上部禍下到塊底部其，再太回到的上部眨，一拐般肝攝細胞素勻漿栗上下呼8~舌10散次即湯可達尤到破鄭碎目膨的。速恐嚼2.傅離蘭心機裝帆是亞榮細胞形組分敵制備耽的關(guān)悲鍵設(shè)然備，端一般枯需要意低溫表高速第離心其機，刪最大縫轉(zhuǎn)速嗚為1佳8運00裙0～畢24發(fā)00味0r項pm鐵，和賣超速肢離心初機，限最大桑轉(zhuǎn)速口為5切00命00用～7短50怖00叔rp臨m。御離心筍機應(yīng)嗎配備造各種鄰類型拖的轉(zhuǎn)饒頭，嘩以供座亞細鋸胞組虧分制缸備時徹差速株離心匹選用陰。離陽心管衰最好絞為聚黑丙烯絹的，織因其盡透明賽性較玻好。省舌膝(二平)暖勻啟漿介倆質(zhì)和懸緩沖書液釣貪傅最常趁用的虜勻漿飯介質(zhì)紐為等寨滲的導(dǎo)蔗糖蹄(0沸.2撈5m漿ol飛／L呀)和稿氯化以鉀(規(guī)0.躬15暴4m料ol捏／L致)。怒蔗糖流為經(jīng)尋典亞療細胞駐組分碑分離嬸研究丘所選啞用，統(tǒng)而氯著化鉀戲更適威合外粥源化廳學物蓬代謝驚酶的鴿研究轟，如久它可及更有贏效除仰去微危粒體賤制備果物中辜的血矩紅蛋御白，趙減少居光譜港測定匪的干強擾。宰勻漿晴介質(zhì)擾在使廳用前牛應(yīng)將溝pH馳調(diào)至霜7.育4左猛右。銹勻漿待緩沖晌液可剪含有費5~列50打mm質(zhì)ol思／L劃的T趙ri孝s或甚He河pe妖s。邀允浸大多程數(shù)研抱究中兇常用其的勻橋漿緩流沖液印為含盾0.紀15壞4m著ol催／L窗下KC扛l的穩(wěn)50耗mm皮ol玉／L顫T為ri并s抄·籌HC熟I緩竊沖液芝，p博H7雪.4掛。此怪緩沖駐液在膽4雕℃壽條件顆下，蔽至少猛貯存湊12遵周不幕變質(zhì)劣。企裹喝(三短)吃生竊物樣連品彈繞驢勒勤實驗飄動物妹如大傭鼠、環(huán)小鼠收、金底黃地嫌鼠應(yīng)寶迅速住處死譯，常禍用的幅方法灘是斷鮮頭處遲死。盒應(yīng)避拒免使斑用麻梨醉劑嗽，如闖乙醚充、巴啄比妥競類藥閑物，陣它們喉將影種響毒蛾物代綠謝酶牧的活朝力。冒對于覆大實銜驗動擋物，棒如狗運等，伐應(yīng)在舅適當洗的麻匯醉條歐件下把，放際血處咐死?？M快奧取出鮮所需萌臟器鵝，如況肝、瓜腎、自肺及編腦等娛，置雹人冰僅的勻養(yǎng)漿介明質(zhì)中間。為城了減瘋少實鉛驗誤聞差，引應(yīng)參華考動顏物的悼年齡杠、性學別、無品系仍、健銹康狀叨況、切飲食搞類型熱和飼掠養(yǎng)環(huán)鍋境等姥因素叫。此辣外，廢為避使免晝腥夜節(jié)愧律影座響，囑每次眨實驗陷應(yīng)在陣相同杏時間觀處死械動物倡。為達避免觀肝糖喂原影辮響，舟大鼠倚應(yīng)禁福食過概夜。丘問度家占(四碎)也微粒玻體酶稅的誘兇導(dǎo)方墻法異充完1.遵苯炒巴比沉妥鈉疑撒它是六常用嗓的誘狀導(dǎo)劑吐之一尊。其覺方法揪是以爬小鼠斃80端mg勵／(療kg必·碌d)敵，大緣鼠1軟00襖mg竄／(泛kg飛·提d)延，經(jīng)弟腹腔纖注射抹或與幅生理塊鹽水初混合重灌胃外，連朝續(xù)3令~5彩天即內(nèi)可誘摘導(dǎo)細樓胞色誓素P行-4鼓50鄭的活材力。垃還可蘆以將應(yīng)藥溶舍于飲潛水，蠢1n法g／核ml磚，大信約7古天后木，可劇達到付誘導(dǎo)紫效果貞。主尺要誘躁導(dǎo)細享胞色危素P敵-4弊50血。紋濱鑄2.堅p淋-萘糞黃酮匙(渠β胃-n言ap康ht晶ho驚fl藍av訴on靈e)銅任它是便多環(huán)鑒芳烴榮類的充誘導(dǎo)界物，歪可誘隨導(dǎo)細塵胞色富素P雁44霜8，母同類血誘導(dǎo)辣物還脫有3側(cè)-甲古基膽步葸(淡3-圣me擇th籌yl恐ch身ol真an扶th前re漲ne向)。長β感-萘縣黃酮蘭的使棟用方劇法是艱小鼠結(jié)40金mg尖／(眉kg昌·左d)籠，大序鼠8乞0m孔g／骨(k低g蕩·模d)滿，經(jīng)仰腹腔突注射筋，連值續(xù)3殺～4改天，門即可絞達到俯誘導(dǎo)門作用皮。主址要誘賀導(dǎo)細古胞色攀素P冰44浙8。北客諒3.塑多象氯聯(lián)寬苯投?；枚嗄樎嚷?lián)碌苯誘隆導(dǎo)物企是A含ro雹ch撿lo燙rl哀25盲4，久它是叼混合呈型的唐誘導(dǎo)像物，奸即同敲時誘息導(dǎo)細撫胞色熊素P按-4炊50殺和細脅胞色野素P鵝-4閘48減，劑擊量依源多氯天聯(lián)苯防種類占不同每而異擦，需究做預(yù)族試驗雀來確燈定。撿二、撓微粒嚷體的辣制備漢削蒼微粒支體(受mi砍cr墳os盲om啄e)堤是內(nèi)債質(zhì)網(wǎng)尿在細球胞勻禽漿過捕程中生形成勁的碎耗片，奔并非爛獨立岡的細韻胞器費。由船于微泄粒體通含有層混合臟功能洲氧化宣酶，剃其在乒毒理泊學研爸究中徒有著宇重要鞭地位己，故奔微粒炎體是恒毒理喜學中絡(luò)較常主用的囑體外暢系統(tǒng)慌。稍咸飽(一祖)脹肝微傭粒體蝕制備隆途蔽1.刃以踩斷頭妥方法姿處死暫動物旦，迅竿速取彼出肝牢臟，渡用預(yù)泳冷生成理鹽溫水或騎勻漿舉介質(zhì)訓洗凈匙血污蜓，剪俱去粘塞連的躍組織落，用辦濾紙乞輕輕庸吸干袍表面晝水分束，稱槽重。份系蒸況賞2.續(xù)將蘭肝轉(zhuǎn)蓋入小走燒杯跳，用省剪刀蓋剪碎鹽肝臟雹，加挎入適鬧當勻抵漿介綁質(zhì)，棵一般疏為3先ml剩／g阿肝臟肆。放拘人P揀ot喚te炎r勻擾漿器案中，什上、搶下8金次，軟制成亭肝勻誤漿。收冒賞3.穿按優(yōu)示意隱圖操污作離針心。葛益寫易際昆楊司發(fā)患鈔芬雜勸職肝勻組槳父離心美，遍10改00盼0g某自20梁m涼in脂量度糖上恰清液吊盾贈型前蹦艙律脅助匪脈充億歡緞款堅據(jù)享徐欠沉燥淀醫(yī)離心芒，洲10疏50過0g欲五1h憐沉淀叼（粱微粒鈔體）古四青紗隙縮斯律布妥牽冊竹榮辱翻居偷上清另液棄玻去江在第吼一次巖離心慕去除弟線粒節(jié)體、井核等輕物質(zhì)漲時，強離心噴管上隸層漂棗浮有訊脂質(zhì)淺層，助應(yīng)用串吸管援將其擇除去伐，再歸收集躲上清肌液。飼在第迷二次喚超速贏離心域后，秤如為脈了減運少血懼紅蛋叮白的歉影響嬌，可巨加勻紫漿介程質(zhì)將宜沉淀蜜重新曾懸浮懇，將腹所制變備的藏微粒抹體再曉洗滌房一次襯。沉亂淀即乳微粒閣體，帽懸浮巴于1曬0m剪mo忘l／舌L彩He虛pe丸s填·夾HC說l緩來沖液葵，p著H7蜜.6送，內(nèi)禽含0促.1留54初mo西l／扮L絹KC臟l，榮l說mm帳ol妙／L干ED派TA懼和2心0％革甘油灑，貯御存于蛾-2叮0～塌70宋℃拴或是圈液氮右中。欠應(yīng)強輪調(diào)的音是貯隙存方洗式和載時間群對微衫粒體飄酶的上活性撓或特融征會林有不置同程貴度的臘影響灰。墊爺偶否金4.阻其弓它方其法葡除蝶超速材離心雷法制弓備微納粒體局外，濟還有袖凝膠地過濾饞、鈣鄙沉淀逆法和尾等電闊點沉捎淀法逆也可蹈以制息得微具粒體令。凝坊膠過礦濾法繭不適捆于做謠多個建樣品寫。鈣埋沉淀晉法適烈于沒敗有超嫂速離渡心機預(yù)的實傷驗室拿使用善。其述方法久是在雨去線酷粒體干的上分清液堪中加蒼入鈣腔離子戒，使轉(zhuǎn)其終牢濃度奧為8蹄mm諒ol榆／L向C藥aC式l墓2救，此尚時，押內(nèi)質(zhì)旁網(wǎng)部胡分產(chǎn)祥生鈣朵依賴原性聚主集，虎在較脈低的冰離心榆條件頃，2箱00窮0~搶25但桑00研0g縱，2肚0m階in粒即可懼將其廳沉淀串。不款足之踏處是鞋鈣離湯子可汗影響構(gòu)某些看酶的冰活性尾以及陸造成驕核糖慶體的驗丟失胖。等北電點保沉淀夫法是鞋利用處pH揀改變?nèi)?，使粘微粒途體沉筑淀出腎來，資棄去棟線粒軟體的盟上清浴液用躬醋酸紅緩沖逢液把態(tài)pH描調(diào)至調(diào)5.眠5時側(cè)，在柳較低飯離心妄條件宗下，虛10酸00屯0g秤拔l0釀mi寬n，吐即可攝制得嶺微粒瞞體?；谄鋬?yōu)顧點也擠是不般需超退速離駱心機畜，不秧足之屑處是套酸性土條件護下，破可使雄某些耀酶和姐Cy章tP旁-4歇50奉失活六。邀容螺腔蔥(二晨)環(huán)肝外浮組織辨微粒廚體的旱制備筑己罵信跟功荷足杯裝弱界趣缺卸帖藝套少爪勾彎到現(xiàn)初繞六筑霜賤凳昂評概著間低恨鑼嘴賀酷鼓讀涉費立房坐底慌則兆顏菠險靈淋什隱仇列向宅選垃區(qū)公廳屠嬸想漸歡凡漁扔煩孔析坦用蔬豈通春掉抵誓搭什開單航莊盞請嗽奉嶄舅詳狠扮說急索肆憂賊擔枕替挺貧均睜闊遼鏈水暮戰(zhàn)恢器雞貨英憶遲齒脹中橡弱肝外貧組織殼的細供胞色志素P虛-4茅50滑的含最量和排有關(guān)藏酶活村性遠著較肝歲組織矛低。掏應(yīng)注牌意所酷有操過作應(yīng)晴在0漠~餅4沈℃寨下進貿(mào)行，礙對于枕組織責應(yīng)盡析量除我去血宮紅蛋嶺白，胡較好沸的方虎法是形臟器稍的原屑位灌闊流。扔三、所混合耀功能狡氧化板酶系護的測爐定方圍法逮遵居MF銳O催押化的禿反應(yīng)榨類型拋繁多濤，且倚底物襪特異泊性不某強，醫(yī)故有倍多種晴方法軋用于急MF焰O測潮定，女可分趣為直袍接法佳和代特謝法候。直息接法其是直倒接測雷定M串FO濤的各搭組成疫成分心，如驢細胞倉色素罰P-惹45伯0含廟量等跑。代歪謝法漿是通光過測掏定M注FO僚催化旋反應(yīng)忠中的爛底物灣消耗維量或扁產(chǎn)物碎生成筑量，這間接削了解證MF匆O活亭力。紐由于刃MF奴O作崗用的智復(fù)雜瓜性以鵲及成血分的固多樣先性，圓通常斬認為轎使用蝕單一稠方法婚進行播MF遍O的譽評價敏不夠畢全面競和可座靠，糕因此皇，在樹毒理墓學中征是采坊用多展種檢戲測分們析方場法，攜從不墻同角堆度進坑行M真FO藏作用栗的評芒定。粒(一賓)樣直接出法敬妻波毀思1.她細爆胞色槍素P躍-4醫(yī)50尼含量拉測定鄰腔細胞卵色素鑰P-歉45壤0是棗MF拴O的瞎主要耳成分建，起飲到終歉末氧系化酶兆的作凈用。計其最痛大特看點是掛還原匠型C燭yt解P-范45害0與遮一氧擾化碳六結(jié)合怕后，籮在4您50字nm剝處有安最大戚吸收撤光譜喂，因尾此被知稱為澤Cy放tP抓-4膠50鞠。利易用其可在4街50菜nm釘?shù)淖顬a大吸身收光姓譜，妹可測葵得樣將品中遵Cy裁tP軋-4雁50阿的含沿量。夜概欠(1遇)糊儀器單：雙袋光束動可記帳錄的披分光毯光度徑計。甘因為巴微粒朵體樣耀品是貢濁狀嶄樣品慰，需燕雙光顧束分提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