臨床生物化學(xué)常用技術(shù)

臨床生物化學(xué)常用技術(shù)1第一頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六

本章主要內(nèi)容光譜檢驗(yàn)技術(shù)電化學(xué)分析技術(shù)電泳技術(shù)干化學(xué)技術(shù)PCR技術(shù)

2第二頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六教學(xué)目標(biāo)和要求

掌握光譜分析中的對(duì)比法、摩爾吸收系數(shù)法、比濁法測(cè)定的方法原理，在生化檢驗(yàn)中的應(yīng)用及注意事項(xiàng)；區(qū)帶電泳的原理、應(yīng)用及影響因素；離子選擇性電極法測(cè)定的原理和注意事項(xiàng)。

熟悉離心技術(shù)，其它電泳技術(shù)和層析技術(shù)中的HPLC及親和層析的原理和應(yīng)用；免疫分析技術(shù)、生物傳感技術(shù)的概念和應(yīng)用原理。

了解色譜、層析等常用生化技術(shù)的應(yīng)用原理和方法，生物芯片技術(shù)的概念和應(yīng)用原理。

3第三頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六第一節(jié)光譜分析技術(shù)分光光度技術(shù)的基本原理分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)分光光度計(jì)的操作方法分光光度技術(shù)的定性和定量方法4第四頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六光的本性光的描述：波長和能量可見光：400nm~760nm紫外光:200nm~400nm紅外光:760nm~1000nm5第五頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六光譜分析技術(shù)原理：利用各種化學(xué)物質(zhì)都具有發(fā)射、吸收或散射光譜譜系的特征，以此來確定物質(zhì)性質(zhì)、結(jié)構(gòu)或含量。光譜分析技術(shù)分類：發(fā)射光譜分析技術(shù)：火焰光度法、原子發(fā)射光譜法和熒光光譜法

吸收光譜分析技術(shù)：紫外、可見光分光光度法，原子吸收分光光度法和紅外光譜法

散射光譜分析技術(shù)：比濁法

6第六頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六一、分光光度技術(shù)的基本原理（一）吸光度與透光度

A=-lgT=-lgI/I0=lgI0/I當(dāng)光線通過均勻、透明的溶液時(shí)可出現(xiàn)三種情況：一部分光被散射，一部份光被吸收，另有一部分光透過溶液。設(shè)入射光強(qiáng)度為I0，透射光強(qiáng)度為I，I和I0之比稱為透光度，即：T=I/I0T×100為T%稱為百分透光度。透光度的負(fù)對(duì)數(shù)稱為吸光度即：7第七頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六（二）Lambert-Beer定律Lambert-Beer定律是討論溶液吸光度同溶液濃度和溶液層厚度之間關(guān)系的基本定律，該定律是分光分析的理論基礎(chǔ)。其表達(dá)式為：A=KLC式中A為吸光度；K為比例常數(shù)，稱為吸光系數(shù)；L為溶液層厚度，稱為光徑；C為溶液濃度（Lambert-Beer定律適用于可見光、紫外光、紅外光和均勻非散射的液體。）8第八頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六吸收曲線（Ａ－Ｃ曲線）０１２３４ＣＡ1.00.80.60.40.2Y=ax+b9第九頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六吸光系數(shù)的應(yīng)用１、定性２、判斷方法的靈敏度３、定量測(cè)定物質(zhì)濃度10第十頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六偏離朗伯比耳定律的因素?1、光學(xué)因素2、化學(xué)因素3、為什么有的分光光度計(jì)使用雙波長或雙光束？11第十一頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六分光光度法的結(jié)構(gòu)光源及光源要求波長的選擇原則:可按“吸收最大，干擾最小”的原則進(jìn)行。2、單色器3、比色杯及要求4、檢測(cè)器與顯示器12第十二頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六分光光度計(jì)的使用1、開啟電源，將比色池蓋打開，通電20分鐘預(yù)熱2、調(diào)節(jié)波長3、將空白液、標(biāo)準(zhǔn)液及樣品液置于光路4、空白調(diào)節(jié)T為0、100%5、調(diào)A為06、重復(fù)4和57、測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)和樣品吸光度。13第十三頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六（二）吸光度的校正

鉻酸鉀的標(biāo)準(zhǔn)液可用于校正分光光度計(jì)的吸光度。在25℃，將4mg鉻酸鉀溶于100ml的0.05mol/LKOH中，放入比色池中，在不同波長下測(cè)定吸光度值，與己知的標(biāo)準(zhǔn)吸光度校正表進(jìn)行比較，可檢測(cè)儀器吸光度的準(zhǔn)確度。14第十四頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六四、分光光度技術(shù)的定性和定量方法（一）分光光度技術(shù)的定性方法定性依據(jù)：最大吸收波長λmax和摩爾吸光系數(shù)ε2.摩爾消光系數(shù)ε方法1.最大吸收波長λmax方法15第十五頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六（二）分光光度技術(shù)的定量方法1、對(duì)比法1、將已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)溶液有同一方法、在相同條件下同時(shí)進(jìn)行測(cè)定。2、當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)液與標(biāo)本用量可能不同時(shí)的測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)液的要求：其濃度盡量接近于樣品濃度。（雙標(biāo)準(zhǔn)）16第十六頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六（二）分光光度技術(shù)的定量方法2.標(biāo)準(zhǔn)曲線法用途：1、確定分析范圍2、減少系統(tǒng)誤差3、比較方法的靈敏度17第十七頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六根據(jù)Lambert-Beer定律，液體的濃度在一定范圍內(nèi)與吸光度成正比關(guān)系。配制一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液（濃度應(yīng)包含高、中、低濃度范圍），按標(biāo)本處理方法作相同處理，在特定波長下測(cè)定吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)液濃度為橫座標(biāo)，以吸光度為縱座標(biāo)，將對(duì)應(yīng)各點(diǎn)連成一條通過原點(diǎn)的直線，這條直線稱為標(biāo)準(zhǔn)曲線。待測(cè)溶液測(cè)定吸光度后，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上可查出其相應(yīng)的濃度。方法：18第十八頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六作圖法的步驟1、制備標(biāo)準(zhǔn)液2、顯色反應(yīng)3、比色4、作圖5、制作檢量表。19第十九頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六將一系列濃度不同的標(biāo)準(zhǔn)溶液按照、一定操作過程顯色后，分別測(cè)吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。從標(biāo)準(zhǔn)曲線找出相對(duì)應(yīng)的待測(cè)樣品的濃度，即標(biāo)準(zhǔn)曲線法。標(biāo)準(zhǔn)曲線法20第二十頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六制作和應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)注意下面幾點(diǎn)：（1）濃度范圍足夠大（2）減少偶然誤差（3）當(dāng)待測(cè)液吸光度超過線性范圍時(shí)，應(yīng)將標(biāo)本稀釋后再測(cè)定。（4）標(biāo)本測(cè)定的條件應(yīng)和標(biāo)準(zhǔn)曲線制作時(shí)的條件完全一致。（5）測(cè)定條件發(fā)生變化時(shí)（如更換標(biāo)準(zhǔn)品和試劑等），應(yīng)重新繪制。（6）標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)有高的純度，標(biāo)準(zhǔn)液的配制應(yīng)準(zhǔn)確。21第二十一頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六第二節(jié)電化學(xué)分析技術(shù)電化學(xué)法概述電化學(xué)分析：利用物質(zhì)的電化學(xué)性質(zhì)，測(cè)定化學(xué)電池的電位、電流或電量的變化進(jìn)行分析的方法。主要有：電位法、電導(dǎo)法、電容法。22第二十二頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六電位分析法基本原理電位分析法是利用電極電位和濃度之間關(guān)系來確定物質(zhì)含量的分析方法。電極電位由能斯特方程式確立。電極電位測(cè)定是通過構(gòu)建原電池電動(dòng)勢(shì)，其中一個(gè)電極的電位隨待測(cè)離子嘗濃度改變而改變（指示電極）；另一電極電位不受試液影響（參比電極），通過測(cè)定原電池的電動(dòng)勢(shì)便可求得待測(cè)離子濃度。23第二十三頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六Nernst方程。其方程式為：

′R為氣體常數(shù)、T為絕對(duì)溫度、n為離子電荷數(shù)、F為法拉第常數(shù)a為被測(cè)離子活度24第二十四頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六一、離子選擇電極法的原理離子選擇電極分析法（ionselectiveelectrode，ISE）是利用電極電位和離子活度的關(guān)系來測(cè)定被測(cè)離子活度的一種電化學(xué)分析法。ISE法的核心是指示電極上帶有對(duì)被測(cè)離子選擇性響應(yīng)的敏感膜，膜的一面與被測(cè)離子的溶液相接觸、另一面則與電極內(nèi)所充的一定活度的被測(cè)離子溶液和內(nèi)參比電極接觸，膜內(nèi)外的離子活度的差異引起離子從高濃度向低濃度遷移，從而產(chǎn)生電位改變，其數(shù)值可在等電流的條件下測(cè)定。25第二十五頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六離子選擇性電極結(jié)構(gòu)26第二十六頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六27第二十七頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六ISE的特點(diǎn)①選擇性好:多數(shù)情況下共存離子的干擾小，組成復(fù)雜的試樣往往不需分離處理即可直接測(cè)定；②靈敏度高：可達(dá)10-5～10-8mmol/L,

線性范圍寬，Na+為10-6～10-1mmol/L，K+為310-5～1mol/L，氯為510-5～1mol/L，Ca++為310-5～1mol/L；③溶血、脂血及黃疸不影響測(cè)定，對(duì)有色、渾濁溶液都可進(jìn)行分析；④設(shè)備簡(jiǎn)單，分析速度快，易于自動(dòng)化，標(biāo)本用量少，應(yīng)用范圍廣。28第二十八頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六離子選擇電極分析方法

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線法

2、標(biāo)準(zhǔn)比較法

3、標(biāo)準(zhǔn)加入法（消除基質(zhì)效應(yīng)）樣品測(cè)定方式：直接法與間接法29第二十九頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六三、離子選擇性電極法測(cè)定的影響因素1．離子強(qiáng)度2、溫度3、PH值4、共存離子的干擾30第三十頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六Attention!電解質(zhì)分析儀一般要求24小時(shí)開機(jī)，目的是為了保持電極膜很好的水化，增加電極的穩(wěn)定性。經(jīng)常關(guān)儀器，使得電極膜干燥，會(huì)加速電極膜的失效和產(chǎn)生測(cè)定中的漂移。儀器正常啟動(dòng)后，清洗管道，進(jìn)行兩點(diǎn)校準(zhǔn)，每隔2小時(shí)自動(dòng)單點(diǎn)校準(zhǔn)。每天用后進(jìn)行電極保養(yǎng)，去除附在電極膜上的蛋白質(zhì)。31第三十一頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六第三節(jié)

干化學(xué)分析技術(shù)

一、干化學(xué)分析原理

1、反射光度法Kubelka-Munk理論：光反射率與固相層的厚度、單位厚度的光吸收系數(shù)以及固相反應(yīng)層的散射系數(shù)有關(guān)系，當(dāng)固相層的厚度和固相反應(yīng)層的散射系數(shù)固定時(shí)，光吸收系數(shù)與待測(cè)物的濃度成正比。32第三十二頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六干化學(xué)的原理（1）

試劑結(jié)構(gòu)Sample反射層清除劑層支持層樣本擴(kuò)散層試劑層33第三十三頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六二、分析原理

（一）分析過程

1．樣本擴(kuò)散層待測(cè)樣品定量加到干片試劑，由展開層把樣品均勻展開，并且阻擋固體物質(zhì)如紅細(xì)胞和大分子物質(zhì)進(jìn)入試劑層。2、反射層光漫射層，為光檢測(cè)提供一個(gè)具有反射的背景。3、清除劑層：清除血清中內(nèi)源性干擾物34第三十四頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六4．試劑層樣品中的水分成為干式試劑的溶劑，試劑與待測(cè)物質(zhì)進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)。試劑層的結(jié)構(gòu)還能控制多步化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)次序。支持層為一透明膠片，僅起支撐試劑干片的作用。35第三十五頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六干化學(xué)的原理（3）

比色樣本擴(kuò)散層反射層清除劑層支持層

接收器36第三十六頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六干化學(xué)分析技術(shù)的影響因素儀器監(jiān)測(cè)：標(biāo)準(zhǔn)灰色試劑條/校準(zhǔn)條校準(zhǔn)頻度：每6個(gè)月校準(zhǔn)一次，質(zhì)控經(jīng)常做質(zhì)控物：用干化學(xué)分析儀生產(chǎn)廠家提供干片試劑的儲(chǔ)存與使用：0℃保存，平衡后用工作環(huán)境與溫度：15~30℃，濕度85%37第三十七頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六第四節(jié)電泳分析技術(shù)38第三十八頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六一、電泳技術(shù)的原理及其影響因素1．原理：帶電粒子在電場(chǎng)中的移動(dòng)現(xiàn)象稱為電泳(Electrophoresis)。帶負(fù)電荷的粒子向電場(chǎng)的正極移動(dòng)；帶正電荷的粒子則向負(fù)極移動(dòng)。各種物質(zhì)由于所帶凈電荷的種類和數(shù)量不同，因而在電場(chǎng)中的遷移方向和速度不同。利用物質(zhì)的這種性質(zhì)可以對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分離和鑒定。39第三十九頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六2．影響顆粒電泳遷移率的因素電泳遷移率？1、分子形狀體積大者慢，小者快2、E↑v↑Q↑E↓V↓擴(kuò)散明顯、區(qū)帶模糊、分辨率下降40第四十頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六3、緩沖液（1）緩沖溶質(zhì)性質(zhì)穩(wěn)定，緩沖容量大、電導(dǎo)低、離子移動(dòng)好（2）pH影響分子電荷性質(zhì)和電量

(3)離子強(qiáng)度（I）影響緩沖容量、速度和產(chǎn)熱效應(yīng)I↑、pH穩(wěn)定、速度慢、產(chǎn)熱多、時(shí)間延長、擴(kuò)散I↓、pH不穩(wěn)定、速度快、產(chǎn)熱少；區(qū)帶不整齊、分辨率下降

41第四十一頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六4、支持介質(zhì)

吸附作用：支持介質(zhì)對(duì)標(biāo)本的吸附作用吸附作用使電泳速度減慢，出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象。電滲：電場(chǎng)中液對(duì)固相的相對(duì)移動(dòng)電滲只影響電泳速度，不影響分辨率42第四十二頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六蒸發(fā)：支持介質(zhì)水份的蒸發(fā)導(dǎo)致緩沖液濃縮，離子強(qiáng)度增加，標(biāo)本分電流減少，電泳速度減慢；虹吸作用，使標(biāo)本區(qū)帶向中間集中并彎曲，導(dǎo)致分辨率下降。（所以，電泳時(shí)電泳槽要密閉）43第四十三頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六二、電泳類型及應(yīng)用電泳的分類方法很多，在這里電泳原理將電泳分離系統(tǒng)分為1、移動(dòng)界面電泳2、區(qū)帶電泳3、穩(wěn)態(tài)電泳44第四十四頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六（一）.醋酸纖維素薄膜電泳（celluloseacetateelectrophoresis）醋酸纖維素是將纖維素的羥基乙?；纬傻睦w維素醋酸酯，由它制成的薄膜稱為醋酸纖維素薄膜。它具有分辨力好，對(duì)蛋白質(zhì)吸附極少，拖尾現(xiàn)象輕微；不吸附染料，對(duì)區(qū)帶周圍的染料能完全洗去，不干擾測(cè)定；樣品需要量少、介質(zhì)又可以透明后定量掃描等優(yōu)點(diǎn)。臨床生物化學(xué)上分離血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、血紅蛋白、甲胎蛋白及同工酶等大分子物質(zhì)。45第四十五頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六缺點(diǎn)和注意事項(xiàng)：吸水性差，水份易蒸發(fā)。電泳槽要求密閉，維持水蒸氣飽和電流強(qiáng)度不宜過大，0.4~0.6mA/cm寬。46第四十六頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六（三）瓊脂糖凝膠電泳概述：瓊脂糖凝膠電泳是以瓊脂糖凝膠作為支持介質(zhì)的一項(xiàng)電流技術(shù)。常用于血漿脂蛋白、免疫球蛋白、同工酶和DNA酶切片斷的電泳分離。47第四十七頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六瓊脂糖凝膠電泳優(yōu)點(diǎn)電滲作用小吸附極微分辨率和重現(xiàn)性均較好

適合分離大分子物質(zhì)（分子篩效應(yīng)）電泳圖譜清晰便于掃描并可長期保存48第四十八頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六49第四十九頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六（二）.聚丙烯酰胺凝膠電泳

（polyacrylamidegelelectrophoresis,PAGE）聚丙烯酰胺凝膠是一種人工合成的凝膠，由丙烯酰胺單體和交聯(lián)劑甲叉雙丙烯酰胺在催化劑和加速劑的作用下聚合而成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。50第五十頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六常用的催化劑有過硫酸胺和核黃素，加速劑一般用四甲基乙二胺。凝膠網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)孔徑的大小，決定于丙烯酰胺單體的濃度和甲叉雙丙烯酰胺的濃度及兩者的比例。51第五十一頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六PAGE的三種效應(yīng)1、標(biāo)本濃縮效應(yīng)2、電荷效應(yīng)3、分子篩效應(yīng)52第五十二頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六電泳區(qū)帶的測(cè)定方法分類：直接法：紫外光掃描區(qū)帶，適用于透明介質(zhì)染色法：染料染色后，洗脫背景可見光掃描53第五十三頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六區(qū)帶染色法蛋白質(zhì)染料：麗春紅、氨基黑10B、考馬斯亮蘭、溴酚蘭、硝酸銀。同工酶的染料：常使用乳酸脫氫酶（LDH）-輔酶（NAD+）-酚嗪甲酯硫酸鹽（PMS）-NBT脂蛋白染料：蘇丹紅、蘇丹黑，油紅O核酸染料：溴乙啶54第五十四頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六區(qū)帶定量分析1、光密度掃描法2、洗脫比色法特殊電泳技術(shù)自動(dòng)電泳分析55第五十五頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六電泳的臨床應(yīng)用一、蛋白質(zhì)電泳血清蛋白電泳免疫固定電泳脂蛋白電泳尿蛋白電泳二、同工酶電泳分析56第五十六頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六57第五十七頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六58第五十八頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六第六節(jié)

自動(dòng)化分析技術(shù)59第五十九頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六教學(xué)目標(biāo)和要求掌握自動(dòng)生化分析儀的分析方法類型及其特點(diǎn)，連續(xù)監(jiān)測(cè)法的理論K值，必選的分析參數(shù)，雙波長測(cè)定的作用，雙試劑的優(yōu)點(diǎn)，分析儀與手工法比較的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。熟悉分立式自動(dòng)生化分析儀的基本結(jié)構(gòu)，備選的分析參數(shù)，測(cè)定過程的自動(dòng)監(jiān)測(cè)，校準(zhǔn)方式和校準(zhǔn)要求，影響分析儀分析速度的因素和分析儀性能指標(biāo)。了解某些分析參數(shù)的特殊意義，分析儀的工作過程和操作方法，干片式分析儀的結(jié)構(gòu)和分析原理，常用分析儀的分析性能。60第六十頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六三、自動(dòng)化分析與手工操作的比較

（一）優(yōu)點(diǎn)1.檢測(cè)速度快2.檢測(cè)靈敏度高3.檢測(cè)準(zhǔn)確度高4.檢測(cè)精密度高5.樣品和試劑用量減少6.其他:能精確地控制反應(yīng)時(shí)間;能精確地控制反應(yīng)溫度;能進(jìn)行復(fù)雜的結(jié)果計(jì)算。

61第六十一頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六（二）缺點(diǎn)

1.選擇次波長較困難2.操作時(shí)間受限3.操作復(fù)雜性受限:加試劑的次數(shù)受限制;無法做復(fù)雜的操作;選擇和改變反應(yīng)溫度困難4.樣品量/試劑量的比例受限制5.不適宜做參考方法6.儀器維護(hù)和保養(yǎng)較復(fù)雜

62第六十二頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六自動(dòng)生化分析儀由電腦控制，將生化分析中的取樣(sampling)、加試劑、混勻、保溫反應(yīng)、檢測(cè)(detect)、結(jié)果計(jì)算、可靠性判斷、顯示和打印、以及清洗(cleaning)等步驟組合在一起自動(dòng)進(jìn)行操作的分析儀器。

63第六十三頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六第二節(jié)生化自動(dòng)化分析方法一、分析方法分類（一）終點(diǎn)法（endassay）

被測(cè)物質(zhì)在反應(yīng)過程中完全被轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物，到達(dá)反應(yīng)終點(diǎn)，根據(jù)終點(diǎn)吸光度的大小求出被測(cè)物濃度，稱為終點(diǎn)法。該法稱為平衡法更為恰當(dāng)。從時(shí)間-吸光度曲線來看，到達(dá)反應(yīng)終點(diǎn)或平衡點(diǎn)時(shí)，吸光度將不再變化。終點(diǎn)法參數(shù)設(shè)置簡(jiǎn)單，反應(yīng)時(shí)間一般較長，精密度較好。64第六十四頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六終點(diǎn)時(shí)間的確定①根據(jù)時(shí)間-吸光度曲線來確定，②根據(jù)被測(cè)物反應(yīng)終點(diǎn)，結(jié)合干擾物的反應(yīng)情況來確定。65第六十五頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六1．一點(diǎn)法（終點(diǎn)法）

在反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)，即在時(shí)間-吸光度曲線上吸光度不再改變時(shí)選擇一個(gè)終點(diǎn)吸光度值，用于計(jì)算結(jié)果。結(jié)果計(jì)算公式：待測(cè)物濃度CU=（待測(cè)吸光度AU－試劑空白吸光度AB）×KK為校準(zhǔn)系數(shù)

適合蛋白、糖、膽固醇測(cè)定66第六十六頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六圖4-3

一點(diǎn)終點(diǎn)法反應(yīng)曲線

A單試劑一點(diǎn)終點(diǎn)法B雙試劑一點(diǎn)終點(diǎn)法67第六十七頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六2．兩點(diǎn)法（twopointendassay）

在反應(yīng)過程中測(cè)定兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)的吸光度，此兩點(diǎn)吸光度之差用于計(jì)算結(jié)果。計(jì)算公式為：CU=（待測(cè)吸光度A2－待測(cè)吸光度A1）×K。68第六十八頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六圖4-4

兩點(diǎn)終點(diǎn)法反應(yīng)曲線

A單試劑兩點(diǎn)終點(diǎn)法B雙試劑兩點(diǎn)終點(diǎn)法

69第六十九頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六

該法能有效地消除溶血(hemolysis)、黃疸（icterus）和脂濁（lipo-turbid）等樣品本身光吸收造成的干擾。圖4-5血紅蛋白、膽紅素和脂濁的

光吸收曲線

70第七十頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六（二）二點(diǎn)速率法（fixed-timeassay）

指在反應(yīng)過程中選擇適當(dāng)兩點(diǎn)（此兩點(diǎn)既非反應(yīng)初始吸光度亦非終點(diǎn)吸光度）測(cè)定吸光度，這兩點(diǎn)的吸光度差值用于結(jié)果計(jì)算。計(jì)算公式CU=(A2-A1)×K。71第七十一頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六圖4-6兩點(diǎn)速率法反應(yīng)曲線

該分析方法有助于解決某些反應(yīng)的非特異性問題。

72第七十二頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六（三）速率A法

（continuousmonitoringassay）又稱連續(xù)監(jiān)測(cè)法（rateassay），是在測(cè)定酶活性或用酶法測(cè)定代謝產(chǎn)物時(shí)，連續(xù)選取時(shí)間-吸光度曲線中線性期（各兩點(diǎn)間吸光度差值相等）的吸光度值，并以此線性期的單位吸光度變化值（ΔA/min）計(jì)算結(jié)果。73第七十三頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六圖4-7連續(xù)監(jiān)測(cè)法反應(yīng)曲線

A單試劑連續(xù)監(jiān)測(cè)法B雙試劑連續(xù)監(jiān)測(cè)法

74第七十四頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六酶促反應(yīng)的線性段

δ1及δ5值偏小，而δ2＝δ3＝δ4，故A1點(diǎn)至A4點(diǎn)屬線性段75第七十五頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六連續(xù)監(jiān)測(cè)法的優(yōu)點(diǎn)可以確定線性期并計(jì)算ΔA/min，根據(jù)此值再準(zhǔn)確地計(jì)算酶活性，因而使自動(dòng)生化分析儀在酶活性測(cè)定方面顯著地優(yōu)于手工法。連續(xù)監(jiān)測(cè)法也可用于測(cè)定呈線性反應(yīng)的代謝物濃度，一般是某些基于酶法測(cè)定的代謝物。酶活性（U/L）＝ΔA/min×理論（或校準(zhǔn)）K值。代謝物濃度CU=ΔA/min×校準(zhǔn)K值。76第七十六頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六1．理論K值

多用于酶活性測(cè)定中，因酶活性尚無公認(rèn)的校準(zhǔn)品可用。根據(jù)酶活性的國際單位定義得出酶活性的計(jì)算公式為：酶活性(U/L)=ΔA/min×將此式中以K來表示，即為理論K值可作為分析參數(shù)輸入到分析儀中。

77第七十七頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六采用理論K值的前提

應(yīng)當(dāng)是樣品和試劑的加量準(zhǔn)確、比色杯光徑準(zhǔn)確、溫度控制精確以及波長準(zhǔn)確等。但事實(shí)上由于各型分析儀在注射器容積步進(jìn)電機(jī)精度、濾光片帶寬等方面的差異，可造成樣品和試劑加量以及吸光度檢測(cè)的偏差，溫度的影響有時(shí)也非常大。78第七十八頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六由于摩爾吸光系數(shù)受比色杯光徑、波長等的影響，書本上或試劑廠家提供的理論摩爾吸光系數(shù)可能與實(shí)際所用分析儀所測(cè)的不同，因而有必要獲得實(shí)際的摩爾吸光系數(shù)，然后來計(jì)算理論K值。79第七十九頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六（1）NADH（NADPH）

摩爾吸光系數(shù)的測(cè)定NADH（NADPH）沒有標(biāo)準(zhǔn)純制品，而且配成溶液后穩(wěn)定性又較差，不能直接用NADH或NADPH標(biāo)準(zhǔn)液來校正儀器，須通過有NAD+(NADP+)參與的反應(yīng)途徑。80第八十頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六用已糖激酶(HK)或葡萄糖脫氫酶(GD)方法測(cè)定葡萄糖時(shí)，葡萄糖的消耗與NADH的生成呈等摩爾關(guān)系。葡萄糖有標(biāo)準(zhǔn)純制品。根據(jù)公式A=εbC，已知比色杯光徑b和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度，測(cè)得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度A后便可計(jì)算出NADH（NADPH）的摩爾吸光系數(shù)ε為A/bC。81第八十一頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六測(cè)定方法

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度為1Ommo1/L(0.01mol/L)，標(biāo)準(zhǔn)液加入量為3.5μL，酶試劑加入量為335μL，比色杯光徑為0.7cm，在340nm測(cè)得吸光度為0.465，則實(shí)測(cè)NADH摩爾吸光系數(shù)=＝6424，即在此臺(tái)分析儀上340nm波長處測(cè)得NADH（NADPH）的摩爾吸光系數(shù)為6424，而理論上NADH（NADPH）的ε為6220。

82第八十二頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六（2）“色素原”酶促產(chǎn)物

在405nm波長摩爾吸光系數(shù)的測(cè)定

有許多酶底物為人工合成的“色素原”底物，其本身無色，經(jīng)酶作用后釋放出有色的反應(yīng)產(chǎn)物，在405nm波長具有吸收峰。ALP底物磷酸對(duì)硝基苯酚(4-Nitrophenylphosphate，4-NPP)經(jīng)酶作用后釋放出黃色的對(duì)硝基苯酚(4-Nitrophenol，4-NP)GGT底物γ-L-谷氨酰對(duì)硝基苯胺(γ-L-Glutamyl-p-nitroanilide)或γ-L-谷氨酰-3-羥基-對(duì)硝基苯胺(γ-L-Glutamyl-3-carboxyl-p-nitroan)經(jīng)酶作用后釋放出黃色的對(duì)硝基苯胺(p-Nitroaniline，4-NA)或?qū)ο趸?5-氨基苯甲酸(2-amino-nitrobenzoicacid，ANBA)。

83第八十三頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六以對(duì)硝基苯酚的摩爾吸光系數(shù)測(cè)定為例試劑：①4-NP標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)存液(1Ommo1/L)②4-NP標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(2.5mmo1/L，以0.84mol/LAMP緩沖液稀釋而成)③底物緩沖液(l5mmol/L4-NPP配于0.84mol/LAMP-HCL緩沖液中，37℃,pHl0.09土0.02)。84第八十四頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六測(cè)定方法

4-NP標(biāo)準(zhǔn)液加入量為5μL，底物緩沖液加入量為350μL，波長405nm，光徑0.7cm，溫度37℃，測(cè)定得吸光度為A1；另用蒸餾水代替4-NP標(biāo)準(zhǔn)液，按上述方法測(cè)定其吸光度為A2，4-NP標(biāo)準(zhǔn)液吸光度ΔA=A1-A2，若測(cè)得ΔA為0.460，則實(shí)測(cè)4-NP摩爾吸光系數(shù)＝1866285第八十五頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六自動(dòng)生化分析儀的校準(zhǔn)方法1、K因素法：又稱標(biāo)準(zhǔn)化法或線性法，當(dāng)物質(zhì)的濃度與吸光度成正比時(shí)選用該法。原理：濃度=因素×吸光度2、非線性法：又稱曲線擬合法，或稱為多點(diǎn)定標(biāo)。86第八十六頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六校準(zhǔn)K值注意事項(xiàng)

酶活性校準(zhǔn)品經(jīng)校準(zhǔn)操作后由分析儀自動(dòng)計(jì)算得出。在進(jìn)行酶學(xué)測(cè)定時(shí)，如果分析條件的變化如溫度、樣品試劑加量和吸光度檢測(cè)偏差可同等程度地影響校準(zhǔn)物和待測(cè)樣品，則使用校準(zhǔn)品能進(jìn)行補(bǔ)償。一般來說以使用校準(zhǔn)K值為好，但必須有兩個(gè)先決條件：①必須使用配套的試劑；②必須使用配套的高質(zhì)量的校準(zhǔn)品，該校準(zhǔn)品應(yīng)具有溯源性。

87第八十七頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六（四）透射比濁法(多點(diǎn)校準(zhǔn))

抗原與相應(yīng)的抗體結(jié)合形成的免疫復(fù)合物，在反應(yīng)液中具有一定的濁度，可由一般分光光度法進(jìn)行透射比濁（transmissionturbidimetry）測(cè)定，可用于某些蛋白質(zhì)和藥物濃度等的測(cè)定。該法須做多點(diǎn)校準(zhǔn)，再經(jīng)非線性回歸，求出抗原或抗體的含量。88第八十八頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六二、常用生化檢測(cè)項(xiàng)目分析方法舉例

1．終點(diǎn)法檢測(cè)

常用的有總膽紅素（氧化法或重氮法）、結(jié)合膽紅素（氧化法或重氮法）、血清總蛋白（雙縮脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、總膽汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、總膽固醇（膽固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白膽固醇（直接測(cè)定法）、鈣（偶氮砷Ⅲ法）、磷（紫外法）、鎂（二甲苯胺藍(lán)法）等。89第八十九頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六2．二點(diǎn)速率法

苦味酸法測(cè)定肌酐采用此法。

90第九十頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六3．連續(xù)監(jiān)測(cè)法

對(duì)于酶活性測(cè)定一般應(yīng)選用連續(xù)監(jiān)測(cè)法，如：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、γ谷氨氨?；D(zhuǎn)移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。一些代謝物酶法測(cè)定的項(xiàng)目如：脲酶偶聯(lián)法測(cè)定尿素等，也可用連續(xù)監(jiān)測(cè)法。91第九十一頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六4．透射比濁法

透射比濁法可用于測(cè)定產(chǎn)生濁度反應(yīng)的項(xiàng)目，多數(shù)屬免疫比濁法，載脂蛋白、免疫球蛋白、補(bǔ)體、抗“O”、類風(fēng)濕因子，以及血清中的其他蛋白質(zhì)如前白蛋白、結(jié)合珠蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等均可用此法。92第九十二頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六第三節(jié)分析參數(shù)

(analysisparameter）設(shè)置

封閉式生化分析儀：各種測(cè)定項(xiàng)目的分析參數(shù)大部分也已設(shè)計(jì)好，存于磁盤中，供用戶使用。開放式生化分析儀：用戶可以更改這些參數(shù)。生化分析儀一般另外留一些檢測(cè)項(xiàng)目的空白通道，由用戶自己設(shè)定分析參數(shù)。93第九十三頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六一、分析參數(shù)介紹

（一）必選分析參數(shù)

1．試驗(yàn)名稱（testcode）2．方法類型（也稱反應(yīng)模式）(assaymode)3．反應(yīng)溫度

4．主波長（primarywavelength）5．次波長（secondarywavelength）雙波長優(yōu)點(diǎn)：減少噪音；減少雜散光；減少樣品本身光吸收噪音：從光源到比色杯、單色器及檢測(cè)器的整個(gè)光路系統(tǒng)中，均存在著隨時(shí)間發(fā)生變化的不穩(wěn)定的檢測(cè)信號(hào)，即噪音。94第九十四頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六6.反應(yīng)方向（responsedirection）

7．樣品量（samplingvolume）常量、減量和增量。8．第一試劑量（firstreagentvolume）一般20-300μl9．第二試劑量（secondreagentvolume）同上。10．總反應(yīng)容量（totalreactingvolume）一般180-350μl，個(gè)別儀器能減少至120μl。反應(yīng)時(shí)間11．孵育時(shí)間（incubatetime）12．延遲時(shí)間（delaytime）95第九十五頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六13．分析時(shí)間：參數(shù)設(shè)定中最重要的一部14．校準(zhǔn)液（calibrator）個(gè)數(shù)及濃度15．校準(zhǔn)K值（calibratecoefficient）或理論K值16．線性范圍（linearityrange）17．小數(shù)點(diǎn)位數(shù)（decimalpointdigit）

96第九十六頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六參數(shù)設(shè)置舉例1、某生化分析儀有關(guān)參數(shù)設(shè)置的范圍：樣品格2~35ul,第一和第試劑量均為20~270ul總反應(yīng)體積180~350ul，吸光度監(jiān)測(cè)驗(yàn)18s，總反應(yīng)時(shí)間為10min，各試劑可加入時(shí)間：1.5min,4.5min,9.5min.2、肌酸激酶試劑盒通用參數(shù)：樣品50ul，第一試劑1000ul，37℃保溫5min，加第二試劑500ul，延滯時(shí)間2min，在340nm讀第一點(diǎn)吸光度，連續(xù)監(jiān)測(cè)2min。97第九十七頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六根據(jù)以上條件進(jìn)行參數(shù)設(shè)置（1）按比例減少樣品和試劑的劑量，使反應(yīng)總體積在180~350ul范圍內(nèi)。選擇樣品質(zhì)10ul，第一試劑200ul，第二試劑100ul，總體積310ul。（2）確定第二試劑加入時(shí)間：根據(jù)通用參數(shù)，應(yīng)選擇4.5min為第二試劑加入點(diǎn).(3)確定各個(gè)吸光度選擇點(diǎn):由于第二試劑的加入點(diǎn)是4.5min,換算成監(jiān)測(cè)周期為第16~17之間,加上延滯時(shí)間2min,則在第24監(jiān)測(cè)點(diǎn)為第一點(diǎn)吸光度,并連續(xù)監(jiān)測(cè)量24~31監(jiān)測(cè)點(diǎn).98第九十八頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六計(jì)算K值:根據(jù)樣品量度10ul,第一試劑200ul,第二試劑100ul代入計(jì)算公式,則

K=也可以采用肌酸激酶的校準(zhǔn)品,執(zhí)行校準(zhǔn)程序來得到校準(zhǔn)方程:K=校準(zhǔn)品濃度/校準(zhǔn)品吸光度99第九十九頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六第四節(jié)自動(dòng)生化分析儀

工作過程和操作方法

一、工作過程在測(cè)定過程中所有機(jī)械步驟均由微處理器根據(jù)已設(shè)定的程序（procedure）進(jìn)行工作。100第一百頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六1．取樣加試劑和混勻2．保溫反應(yīng)和吸光度檢測(cè)3．計(jì)算并顯示或打印結(jié)果101第一百零一頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六二、操作方法

（一）操作前的各項(xiàng)檢查（1）正常開機(jī)以后，檢查沖洗用水裝置是否正常、各項(xiàng)分析試劑是否充足、各種清洗劑是否足夠，以及樣品針、試劑針和攪拌棒是否清潔。（2）確認(rèn)要進(jìn)行校準(zhǔn)的項(xiàng)目，確認(rèn)要做的質(zhì)控批號(hào)及項(xiàng)目，以及校準(zhǔn)品、質(zhì)控品是否足夠。（3）進(jìn)行光度計(jì)自檢來確認(rèn)光路與檢測(cè)系統(tǒng)是否處于正常工作狀態(tài)。102第一百零二頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六（二）校準(zhǔn)

分析儀在樣品分析之前都要對(duì)該分析項(xiàng)目進(jìn)行校準(zhǔn)（也稱定標(biāo)），得出一個(gè)該項(xiàng)目的校準(zhǔn)系數(shù)（K）。校準(zhǔn)前首先必須在反應(yīng)程序里設(shè)定有關(guān)校準(zhǔn)的參數(shù)，如校準(zhǔn)液的代碼、位置及濃度值等。執(zhí)行校準(zhǔn)程序，檢測(cè)得到該校準(zhǔn)品的吸光度值，再根據(jù)校準(zhǔn)濃度計(jì)算校準(zhǔn)系數(shù)（K=校準(zhǔn)品濃度/校準(zhǔn)品吸光度）。

103第一百零三頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六1．校準(zhǔn)方式

有單點(diǎn)校準(zhǔn)、兩點(diǎn)校準(zhǔn)和多點(diǎn)校準(zhǔn)單點(diǎn)校準(zhǔn)：校準(zhǔn)曲線呈直線且通過原點(diǎn)，用單個(gè)濃度的校準(zhǔn)液即可，兩點(diǎn)校準(zhǔn)：若校準(zhǔn)曲線呈直線但不通過原點(diǎn)，則需用兩個(gè)濃度的校準(zhǔn)液做兩點(diǎn)校準(zhǔn)；多點(diǎn)校準(zhǔn)：當(dāng)校準(zhǔn)曲線不呈直線而為真正的曲線時(shí)，應(yīng)做多點(diǎn)校準(zhǔn)，并按其線形選擇不同的曲線方程進(jìn)行擬和，如雙曲線、拋物線、冪函數(shù)、指數(shù)函數(shù)、對(duì)數(shù)函數(shù)等方程等。104第一百零四頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六如有下列情況發(fā)生時(shí)，必須進(jìn)行校準(zhǔn)：①改變?cè)噭┑姆N類或批號(hào)；②儀器或者檢驗(yàn)系統(tǒng)進(jìn)行一次大的預(yù)防性維護(hù)或者更換了重要部件；③質(zhì)控反映出異常的趨勢(shì)或偏移，或者超出了實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的接受限。105第一百零五頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六（三）質(zhì)控品測(cè)定

質(zhì)控是保證檢測(cè)結(jié)果可靠性的一個(gè)重要手段，因此每批樣品的分析測(cè)定均應(yīng)該有質(zhì)控樣品同時(shí)監(jiān)測(cè)。關(guān)于分析儀的批測(cè)定，是指一批樣品從開始測(cè)定到完成測(cè)定后停止的整個(gè)過程。其中如果進(jìn)行了添加或更新試劑、進(jìn)行了有可能改變吸光度的維護(hù)等操作，均應(yīng)進(jìn)行一次質(zhì)控樣品的檢測(cè)，以便及時(shí)監(jiān)測(cè)到分析系統(tǒng)的改變。106第一百零六頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六

所有分析儀都已設(shè)定或固化了有關(guān)質(zhì)控的分析程序：①設(shè)定有關(guān)質(zhì)控參數(shù)，如每個(gè)質(zhì)控品的批號(hào)、靶值和標(biāo)準(zhǔn)差；②選擇質(zhì)控圖的方式，如均值－標(biāo)準(zhǔn)差質(zhì)控圖；③質(zhì)控結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析，分析儀會(huì)保存每次測(cè)定的質(zhì)控結(jié)果，并對(duì)其進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，以列表及質(zhì)控圖的形式在屏幕上顯示。107第一百零七頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六可根據(jù)質(zhì)控結(jié)果在質(zhì)控圖上的位置判斷其是否在控。如果判為失控則應(yīng)從試劑、質(zhì)控品、校準(zhǔn)品和分析儀等幾方面尋找原因。通過對(duì)質(zhì)控結(jié)果的分析，可以了解某項(xiàng)目的分析精密度和準(zhǔn)確度的改變。108第一百零八頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六（四）檢測(cè)項(xiàng)目的輸入與測(cè)定

1．項(xiàng)目輸入（1）逐項(xiàng)輸入：每份樣品可以任選分析儀中已設(shè)置的且試劑室內(nèi)已預(yù)置試劑的項(xiàng)目中的一項(xiàng)、幾項(xiàng)或全部項(xiàng)目。109第一百零九頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六（2）項(xiàng)目組合輸入：把與疾病相關(guān)的檢驗(yàn)項(xiàng)目組合在一起，進(jìn)行組合檢驗(yàn)，這有利于方便病人，有利于疾病的診斷和預(yù)后分析，同時(shí)也簡(jiǎn)化了分析操作，提高分析效率。（3）批量輸入：對(duì)于有連續(xù)相同測(cè)定項(xiàng)目的樣品，可使用批量輸入的方法。110第一百一十頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六多數(shù)全自動(dòng)分析儀的操作非常方便，在開始測(cè)定畫面，輸入該批第一個(gè)樣品的樣品號(hào)，分析儀即會(huì)自動(dòng)逐個(gè)地對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定。一般在開始畫面還可選擇：①是否需要對(duì)結(jié)果超過設(shè)定的線性范圍、超過允許的吸光度上限等的樣品自動(dòng)進(jìn)行重復(fù)測(cè)定；②測(cè)定結(jié)果是否需要按照已設(shè)定的打印格式自動(dòng)打印與測(cè)定結(jié)果有關(guān)的選項(xiàng)。2．進(jìn)行測(cè)定111第一百一十一頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六3．急診檢驗(yàn)

幾乎所有全自動(dòng)生化分析儀都具備“急診優(yōu)先”的功能，儀器留有急診樣品的分析位置或?qū)Ｓ脴悠芳芤曰蚣痹\分析的專用編號(hào)。一旦在急診樣品位置上放置了樣品，并設(shè)定了急診檢驗(yàn)的項(xiàng)目，分析儀就會(huì)在常規(guī)樣品的測(cè)定過程中，優(yōu)先安排對(duì)該樣品進(jìn)行分析測(cè)定。112第一百一十二頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六四自動(dòng)生化分析儀性能評(píng)價(jià)

1．自動(dòng)化程度2、分析效率3、應(yīng)用范圍4、分析的準(zhǔn)確度113第一百一十三頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六二、分析儀性能指標(biāo)

（一）準(zhǔn)確度吸樣、加試劑、溫控準(zhǔn)確度，以及光路系統(tǒng)如波長、檢測(cè)器準(zhǔn)確度和波譜帶寬等，都影響檢測(cè)準(zhǔn)確度，這些因素往往使相同項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果向同一方向偏離。有關(guān)這些準(zhǔn)確度的指標(biāo)通常無具體說明，但可以通過相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)。應(yīng)當(dāng)說多數(shù)分析儀對(duì)有關(guān)這些部件的制作及其工作的準(zhǔn)確度比手工操作及其所用的儀器好得多。114第一百一十四頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六（二）精密度

以上影響準(zhǔn)確度的因素同樣可因其制作不精而使工作穩(wěn)定性較差，造成精密度不佳，吸樣精度以及樣品針、試劑針、攪拌棒、反應(yīng)杯的交叉污染是影響精密度的主要因素，有關(guān)分析儀的資料中通常會(huì)介紹防止和減少交叉污染的措施，主要是其沖洗系統(tǒng)各有特點(diǎn)，沖洗效果可能不同。

115第一百一十五頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六（三）檢測(cè)能力1．檢測(cè)方法多數(shù)分析儀能做終點(diǎn)法、固定時(shí)間法、連續(xù)監(jiān)測(cè)法和透射比濁法。2．檢測(cè)時(shí)間分析儀通?？蓹z測(cè)最長10min的反應(yīng)，個(gè)別最長能檢測(cè)15-22min甚至更長。3.加試劑次數(shù)能加1-4種試劑，多數(shù)為2種。

116第一百一十六頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六4.檢測(cè)范圍

能檢測(cè)吸光度的最高值及其準(zhǔn)確度決定檢測(cè)上限；檢測(cè)靈敏度則為能辨別待測(cè)物最小濃度差的能力，有時(shí)與最低檢出濃度一致，但后者主要取決于方法靈敏度。117第一百一十七頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六（四）速度

影響分析速度的因素，包括本節(jié)一中所述的試劑瓶數(shù)、取樣周期、反應(yīng)杯數(shù)量、一次可容納樣品數(shù)量、試劑瓶容量和模塊組合能力等。（五）檢測(cè)成本

反應(yīng)杯類型和壽命決定其耗費(fèi)，最小樣品量影響試劑用量，最小反應(yīng)杯液量可決定樣品和試劑用量，以及保養(yǎng)維護(hù)消耗。118第一百一十八頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六第五節(jié)、其他檢驗(yàn)技術(shù)自學(xué)為主119第一百一十九頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六四、干化學(xué)式自動(dòng)生物化學(xué)分析儀多采用以Kubelka-Munk理論為主要理論基礎(chǔ)的多層薄膜的固相試劑技術(shù)，僅需將樣品加在固相試劑上進(jìn)行測(cè)定。它不同于大家所熟知的在反應(yīng)容器中加入液態(tài)試劑和樣品,混合后發(fā)生物化學(xué)學(xué)反應(yīng)的“濕化學(xué)”(wetchemistry),所以“干化學(xué)”是相對(duì)于經(jīng)典的“濕化學(xué)”而言。干化學(xué)式分析儀是80年代問世的，其采用干化學(xué)（drychemistry）方法，將發(fā)生在液相反應(yīng)物中的反應(yīng)，轉(zhuǎn)移到一個(gè)固相載體上，利用分光檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)的一類新型儀器。（一）工作原理120第一百二十頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六優(yōu)點(diǎn)：它完全脫離了傳統(tǒng)的采用試管和吸管的分析方法，儀器操作簡(jiǎn)便，測(cè)定速度快，靈敏度和準(zhǔn)確度與典型的分立式儀器相近。原理分類：干化學(xué)分析儀大都采用反射光度法(reflectancespectroscopy)和基于離子選擇電極(ionselectiveelectrode，ISE)的差示電位法(differentialpotentiometry)及近幾年出現(xiàn)有采用熒光光度計(jì)的干化學(xué)分析儀。121第一百二十一頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六（二）儀器的類型及特點(diǎn)一種是使用試條的反射光度法系統(tǒng)（reflotronsystem）；另一種是采用膠片涂層技術(shù)的化學(xué)分析系統(tǒng)（vitroschemistrysystem），采用的是干試劑包進(jìn)行臨床化學(xué)分析，常稱為袋式分析儀。122第一百二十二頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六1．反射光度法系統(tǒng)：每一個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目都有各自專用的試劑條，由3個(gè)主要部分組成，①密碼磁帶：位于劑試條背面,是該項(xiàng)目的全部檢測(cè)程序,存貯了全部方法學(xué)所必需的資料,包括:英文縮寫符號(hào)、測(cè)試范圍、血漿分離時(shí)間、波長選擇、反應(yīng)時(shí)間、換算因數(shù)和誤差自檢等,插入后即傳送給微機(jī)。②血漿分離區(qū)：位于正面下部并標(biāo)以紅色,由玻璃纖維和紙層構(gòu)成。③反應(yīng)區(qū)：位于試劑條的正面上部。試劑條日常貯存在密封的盒內(nèi),每條的表面貼有一層錫箔,使用時(shí)再揭去。123第一百二十三頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六血漿運(yùn)輸層試劑層反應(yīng)層密碼磁帶血漿分離區(qū)輔助試劑層外膜層干試條的組成124第一百二十四頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六測(cè)定過程首先定量指尖肝素化毛細(xì)血管血或任何部位的穿刺血標(biāo)本加在紅色的血漿分離區(qū)上。首先通過玻璃纖維層，紅、白細(xì)胞被阻截，血漿被過濾到血漿分離區(qū)，另有輔助試劑層，當(dāng)血漿層中的血漿溶解滲透輔助試劑層后，通過轉(zhuǎn)移介質(zhì)層將血漿運(yùn)送到反應(yīng)區(qū)的底部。此時(shí)儀器給反應(yīng)區(qū)施加400Pa的壓力，此時(shí)，試劑層2、試劑層1和透明片相繼平貼于轉(zhuǎn)移介質(zhì)層(亦稱血漿池)之上。血漿中的待測(cè)物與干試劑相作用而呈色并顯示檢測(cè)結(jié)果，全部過程均在接受密碼信號(hào)后的微機(jī)控制下完成。125第一百二十五頁，共一百三十七頁，編輯于2023年，星期六2．膠片涂層技術(shù)的化學(xué)分析系統(tǒng)該干式化學(xué)系統(tǒng)使用的是試劑片（塊），它采用的是膠片涂層技術(shù),各種反應(yīng)都在干片(多層膜片)內(nèi)進(jìn)行。工作原理：應(yīng)用涂層技術(shù)制作膠片基礎(chǔ)的感光乳劑，將其均勻呈層狀地涂布在支持層或下層上。在該干片中多涂層被置于一張透明聚酯片基上,然后夾在一個(gè)塑料殼中間，共有4個(gè)功能層：即分布層，接受樣品；兩個(gè)