培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化

培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化第一頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日探究：培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化目的要求1、學習利用血球計數(shù)板進行微生物計數(shù)的方法2、實驗探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化3、注意樣方法的應(yīng)用4、體會影響種群數(shù)量變化的因素第二頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日1、酵母菌的繁殖方式主要是:2、酵母菌的呼吸方式是:兼性厭氧(可進行有氧呼吸和無氧呼吸)回顧思考:出芽生殖3、酵母菌的培養(yǎng)條件要注意那些問題?比如要用適宜的溫度培養(yǎng),調(diào)節(jié)好PH值,溶氧量的控制等。第三頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日一、血球計數(shù)板第四頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日1、血球計數(shù)板的結(jié)構(gòu)

血球計數(shù)板是一種專門用于計算較大單細胞微生物數(shù)量的儀器，由一塊比普通載玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四條下凹的槽，構(gòu)成三個平臺。中間的平臺較寬，其中間又被一短橫槽隔為兩半，每半邊上面刻有一個方格網(wǎng)。第五頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日大方格中方格小方格第六頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日

方格網(wǎng)上刻有9個大方格，其中只有中間的一個大方格為計數(shù)室，供微生物計數(shù)用。

大方格的長和寬各為1mm，深度為0.1mm，即1mm×1mm×0.1mm，其容積為0.1mm3；大方格的長和寬各為2mm，深度為0.1mm，即2mm×2mm×0.1mm，其容積為0.4mm3第七頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日計數(shù)室通常也有兩種規(guī)格16×25型：即大方格內(nèi)分為16中格，每一中格又分為25小格25×16型：即大方格內(nèi)分為25中格，每一中格又分為16小格。

不管計數(shù)室是哪一種構(gòu)造，其每一大方格都是由16×25=25×16=400個小方格組成。

第八頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日2、計數(shù)16×25型：

一般取四角的四個中方格（100個小方格）計數(shù)25×16型：一般計數(shù)四個角和中央的五個中方格（80個小方格）的細胞數(shù)。

第九頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日3、計算

以1mm×1mm×0.1mm型為例計數(shù)室容積為0.1mm3，則每個小方格的容積為1/4000mm3

。100個小方格細胞總數(shù)/100×400×10000×稀釋倍數(shù)

酵母細胞個數(shù)／1mL=80個小方格細胞總數(shù)/80×400×10000×稀釋倍數(shù)

第十頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日例1通常用血球計數(shù)板對培養(yǎng)液中酵母菌進行計數(shù)，若計數(shù)室為1mm×1mm×0.1mm方格，由400個小方格組成。若多次重復(fù)計數(shù)后，算得每個小方格中平均有5個酵母菌，則10mL該培養(yǎng)液中酵母菌總數(shù)有

個。2×108第十一頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日例2檢測員將1mL水樣稀釋10倍后，用抽樣檢測的方法檢測每毫升藍藻的數(shù)量；將蓋玻片放在計數(shù)室上，用吸管吸取少許培養(yǎng)液使其自行滲入計數(shù)室，并用濾紙吸去多余液體。已知每個計數(shù)室由25×16＝400個小格組成，容納液體的總體積為0．1mm3?，F(xiàn)觀察到圖中該計數(shù)室所示a、b、c、d、e5個中格80個小格內(nèi)共有藍藻n個，則上述水樣中約有藍藻

個／mL。5n×105第十二頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日4、血球計數(shù)板的使用方法步驟③計數(shù)：稍待片刻（約5min），待酵母菌細胞全部沉降到計數(shù)室底部后，將計數(shù)板放在載物臺的中央，先在低倍鏡下找到計數(shù)室所在位置后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察、計數(shù)并記錄。①鏡檢計數(shù)室：在加樣前，先對計數(shù)板的計數(shù)室進行鏡檢。若有污物，則需清洗，吹干后才能進行計數(shù)。②加樣品：將清潔干燥的血球計數(shù)板的計數(shù)室上加蓋專用的蓋玻片，用吸管吸取稀釋后的酵母菌懸液，滴于蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液自行緩緩滲入，一次性充滿計數(shù)室，防止產(chǎn)生氣泡，充入細胞懸液的量以不超過計數(shù)室臺面與蓋玻片之間的矩形邊緣為宜。多余培養(yǎng)液可用濾紙吸去。第十三頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日5、血球計數(shù)板的使用注意事項①從試管中吸出培養(yǎng)液進行計數(shù)之前，要將試管輕輕震蕩幾下，這樣使酵母菌分布均勻，防止酵母凝聚沉淀，提高計數(shù)的代表性和準確性，求得的培養(yǎng)液中的酵母菌數(shù)量誤差小。②如果一個小方格內(nèi)酵母菌過多，難以數(shù)清，應(yīng)當對培養(yǎng)液進行稀釋以便于酵母菌的計數(shù)。具體方法是：搖勻試管，取1mL酵母菌培養(yǎng)液，加入成倍的無菌水稀釋，稀釋n倍后，再用血球計數(shù)板計數(shù)，所得數(shù)值乘以稀釋倍數(shù)。以每小方格內(nèi)含有4～5個酵母細胞為宜。特別是在培養(yǎng)后期的樣液需要稀釋后計數(shù)。第十四頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日③對于壓在方格界線上的酵母菌應(yīng)當計數(shù)同側(cè)相鄰兩邊上的菌體數(shù)，一般可采取“數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線”的原則處理，另兩邊不計數(shù)。④對每個樣品可計數(shù)三次，再取其平均值。⑤計數(shù)時應(yīng)不時調(diào)節(jié)焦距，才能觀察到不同深度的菌體。

⑥血球計數(shù)板使用后，用自來水沖洗，切勿用硬物洗刷，以免損壞網(wǎng)格。

第十五頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日1、研究過程測定定期取樣測細胞數(shù)目2、測定方法測重量濕重干重（一）研究方法二、微生物的種群數(shù)量變化在恒定容積液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)第十六頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日細菌數(shù)目的對數(shù)時間01234細菌的生長曲線（二）種群數(shù)量變化規(guī)律1：調(diào)整期2：對數(shù)期3：穩(wěn)定期4：衰亡期第十七頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日細菌數(shù)目的對數(shù)時間01234細菌的生長速率時間01234細菌生長曲線細菌生長速率曲線該怎樣畫呢？第十八頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日目的：使微生物的生長較長時間的維持在穩(wěn)定期。優(yōu)點：縮短了培養(yǎng)周期,提高設(shè)備利用率,便于自動化管理。連續(xù)培養(yǎng)第十九頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日例2（08江蘇卷）為研究酵母菌種群密度的動態(tài)變化，某同學按下表所列條件進行了A、B、C和D共4組實驗，用1000mL錐形瓶作為培養(yǎng)器皿，棉塞封口，在25℃下靜置培養(yǎng)，其他實驗條件均相同，定時用血球計數(shù)板計數(shù)。根據(jù)實驗結(jié)果繪出的酵母菌種群密度變化曲線圖如下，請分析回答以下問題。1）圖中曲線①、②和③分別是_____組、______組和______組的結(jié)果。D

BA2）B組和A組的實驗結(jié)果不同的原因是B組____________。培養(yǎng)液較多，與空氣接觸面積較小，故供氧較少

3）D組和B組的實驗結(jié)果不同的原因是D組____________。葡萄糖濃度較低，故營養(yǎng)物供應(yīng)較少

4）在整個實驗過程中，直接從靜置的培養(yǎng)瓶中取培養(yǎng)原液計數(shù)的做法是錯誤的，正確的方法是

和

。搖勻培養(yǎng)液后再取樣培養(yǎng)后期的樣液稀釋后再計數(shù)5）實驗結(jié)束后，用試管刷蘸洗滌劑擦洗血球計數(shù)板的做法是錯誤的，正確的方法是

浸泡和沖洗

第二十頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日細菌細胞數(shù)目的測定待測樣品等量的已知含量的紅細胞混勻涂抹紅細胞細菌測定：紅細胞數(shù)目細菌數(shù)目計算單位體積內(nèi)的細菌數(shù)目第二十一頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日細菌重量的測定取樣：取一定體積的培養(yǎng)液離心分離、反復(fù)洗滌稱濕重烘干稱干重第二十二頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日

1、調(diào)整期采用對數(shù)期的菌體作為菌種、增加接種量、代謝活躍；體積增大；分裂遲緩。適應(yīng)新環(huán)境1）主要特征：2）原因：3）人工控制（縮短調(diào)整期）：第二十三頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日個體：代謝旺盛；分裂最快；個體形態(tài)和生理特征穩(wěn)定。群體：繁殖＞死亡1）主要特征：2）應(yīng)用：作生產(chǎn)菌種，科研材料。2、對數(shù)期第二十四頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日3、穩(wěn)定期個體：積累有害代謝產(chǎn)物；有些出現(xiàn)芽孢。群體：活菌數(shù)量最多；繁殖＝死亡1）主要特征：