關愛生命呵護健康紅細胞血型理論與技術

紅細胞血型理論與實驗技術長春博德生物技術有限責任公司童軍

主要內容紅細胞血型相容性檢測紅細胞血型血清學檢測方法紅細胞血型系統(tǒng)介紹紅細胞血型抗原為同種異型抗原，是人類遺傳多態(tài)性標志之一。自二十世紀初Landsteiner發(fā)現(xiàn)ABO血型以來，已陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了許多新的紅細胞血型抗原。國際輸血協(xié)會（ISBT）2008年報告中已確認了308個紅細胞血型抗原。并將其分為血型系統(tǒng)、血型集合和血型系列。輸血關系最大的是ABO及Rh血型系統(tǒng)。人類紅細胞血型研究背景血型系統(tǒng)血型系統(tǒng)ABO血型發(fā)現(xiàn)歷史1901年，Landsteiner把幾份血液標本中的紅細胞分別與他人的血清交叉混合后，發(fā)現(xiàn)有的血液之間發(fā)生凝集反應，有的則不發(fā)生。將人的紅細胞血型分為A、B、C(后稱為O)三種類型。1902年他的學生Decastello及Sturli發(fā)現(xiàn)了第4種血型，即AB型。ABO血型的發(fā)現(xiàn)，開啟了血液免疫學及免疫遺傳學的新紀元。

ABH抗原的生化結構編碼巖藻糖轉移酶添加巖藻糖到血型多聚糖前體的終端半乳糖上特異性H抗原形成編碼A或B轉移酶構建完成A或B抗原H基因ABO基因

ABO抗原的發(fā)育

在胚胎早期A和B抗原就開始產生。但到出生時，還沒有完全發(fā)育，與抗A和抗B試劑血清反應比成人弱，2～4歲時才能充分表現(xiàn)出抗原性。

ABO抗體的發(fā)育出生時，正常的抗A和抗B還沒產生或較弱，到三個月時，反應基本上與成年人的一樣。5～10歲時，抗體的產生達到高峰，具有較高效價。孟買型與類孟買型孟買型Bombayphenotype紅細胞上沒有A、B、H抗原，血清中存在抗-A、抗-B和抗-H抗體。表型標記為：OhO、OhA、OhB、OhAB類孟買型Bombay-likephenotype表型標記為:Ah、Bh、ABhABO血型的亞型ABO亞型（subgroups)，也稱變異型，紅細胞同屬于一種血型抗原，但在結構上有一定的差異，性能也不完全相同。由于抗原弱，在用已知抗體檢測抗原和用已知抗原檢測被檢血清時不符合血清學反應特征。A亞型：A1和A2是血型血清學方法確定的最重要的A型紅細胞亞型，一般認為有兩種抗原A和A1，A1型人紅細胞上有這兩種抗原，A2型人紅細胞只有A抗原。亞洲人中A1型約占27%；A2型人稀少。其它A亞型：A3、Ax、Aend、Am、Ay和Ael。B亞型一般比A亞型更少：B3、Bx、Bm和Bel幾種A亞型紅細胞上的A抗原A1與A2的區(qū)分A1型紅細胞：A抗原和A1抗原A2型紅細胞：A抗原雙花扁豆（Dolichosbiflous)種子提取液Rh血型系統(tǒng)1939年Levine及Stetson在一個新生兒溶血疾病的母親的血清中，發(fā)現(xiàn)可凝集85%白種人的紅血球抗體。1940年Landsteiner及Wiener以恒河猴(Rhesusmonkey)的紅血球免疫兔子產生抗體，也可凝集85%白種人的紅血球。因此命名為Rh抗原。（恒河猴LW抗原）Rh血型系統(tǒng)抗原RH血型系統(tǒng)抗原46個，其中D、C、E、c、e為主要的血型抗原。D抗原：只存在與人紅細胞膜，不存在與其它組織細胞中，體液分泌中也無D抗原。D抗原分類：根據D抗原的數(shù)量和質量不同以及抗原性不同，將D抗原分類為5種：常見D抗原、弱D、不完全型D、不完全型弱D及增強D。Rh血型系統(tǒng)抗原頻率Dantigen–85%Cantigen–70%cantigen–80%Eantigen–30%eantigen–98%Rh血型系統(tǒng)抗體Rh抗體主要通過輸血和妊娠免疫產生。一般在初次免疫后2-6個月內出現(xiàn)。對Rh(D)初次免疫的人，經再次免疫后，在三周內抗體濃度可達最高峰。同種異型抗體：RhD陰性人輸用D陽性血而產生的抗-D抗體。絕大部分人血清同種異體抗體都是IgG類抗體，多數(shù)在鹽水介質中不發(fā)生直接凝集。單克隆抗-D：人鼠或人人淋巴細胞雜交瘤制備而成。紅細胞血型相容性檢測交叉配血血型檢測抗體篩檢及鑒定紅細胞血型血清學反應已知紅細胞：反定型紅細胞不規(guī)則抗體檢測紅細胞譜紅細胞已知抗體：抗A抗B抗D抗M、抗N……AHG用已知的檢測未知的血型檢測血型檢測：確定待檢者的ABO、RhD血型。ABO血型定型：正定型：是用已知特異性抗體來測定紅細胞上有無相應的抗原。反定型：是用已知抗原的紅細胞來測定血清中有無相應的抗體。ABO血型定型抗A抗BA細胞B細胞結果(試劑)(待檢者)ABABO血型定型正定型反定型血型比例%（亞洲）抗-A抗-BA細胞B細胞--++O43++--AB5+--+A27-++-B25RhD抗原檢測抗D結果(試劑)(待檢者)D陽性我國臨床常規(guī)RhD血型的檢測，應用不識別DVI型D抗原的單克隆抗體。對不出現(xiàn)凝集的標本判斷為RhD陰性；對出現(xiàn)弱反應（凝集反應強度≤2+）的病人（受血者），將其視為RhD陰性，只能輸用RhD陰性的紅細胞；對弱反應的獻血者視為RhD陽性。初篩RhD陰性和弱反應的標本，應該進一步研究確定其RhD表型，應用能夠識別DVI型的單克隆抗體；同時進行吸收放散實驗，以排除Del型。亞型鑒定方法凝集抑制試驗：可溶性抗原與相應已知抗體結合能夠全部或部分抑制抗體活性，通過此試驗可確定抗原的特異性。又稱唾液分泌試驗。吸收放散試驗：抗體與相應抗原在適合條件下發(fā)生凝集或致敏，但這種結合是可逆的，如改變某些物理條件時，抗體又可以從結合的紅細胞上解脫下來，這種試驗方法叫做吸收放散試驗。放散技術放散試驗種類酸放散熱放散ZZAP放散二磷酸氯喹放散ABO亞型的血清學特征AABBTECHNICALMANUAL16theditionP366各種A亞型的鑒別紅細胞弱凝集A3AxAend混合視野凝集(Mf），唾液中含有A物質A3與抗A10％紅細胞呈十分弱的mf凝集Aend及/或抗只與抗AB呈弱凝集AxA1B反應不凝集能吸附及放散抗AAmAyAel容易吸附放散抗AAm分泌型唾液中有一定量的A物質不容易吸附放散抗AAy分泌型唾液含少量的A物質吸附放散抗AAel分泌型唾液只含H物質無A物質抗D單克隆抗體抗體篩檢及鑒定用已知抗原的O型紅細胞（篩檢細胞及譜細胞），檢測病人血清中是否含有抗體及對所檢測到的抗體特異性進行鑒定?？贵w定義不規(guī)則抗體的含義：通常把抗A、抗B以外的所有紅細胞血型抗體稱為不規(guī)則抗體。如抗D、抗N、抗M抗體。完全抗體或不完體抗體：與相應抗原紅細胞在鹽水介質中或在中性微柱凝膠中出現(xiàn)凝集反應的抗體稱為完全抗體。完全抗體大部分是IgM類抗體，但非所有IgM類抗體都是完全抗體。大部分IgG抗體為不完全抗體，但一些IgG抗體也是完全抗體。臨床有意義和臨床無意義抗體：能引起新生兒溶血?。℉DN）和血型不相容輸血免疫溶血的抗體為臨床有意義抗體。如母體免疫IgG抗體抗-D能夠穿過胎盤進入胎兒體內，引起胎兒溶血。反之為臨床無意義抗體，如Lewis血型同種異型抗體常是IgM抗體，但極少見溶血性輸血反應和引起HDN，故該血型抗體為臨床無意義抗體。檢測方法方法原理局限性酶檢測技術破壞紅細胞表面的唾液酸，降低其表面電荷，減少紅細胞間斥力，使得紅細胞靠攏，在不完全抗體的作用下，紅細胞便出現(xiàn)凝集。改變其他系統(tǒng)(尤其是M，N，F(xiàn)ya，F(xiàn)yb)抗原的構型破壞其抗原性。酶還可能改變細胞懸液的物理性質，可導致紅細胞的非免疫性聚集。凝聚胺法凝聚胺是一種多價陽離子氨基聚合物，它可以引起正常紅細胞的可逆性凝集，如果被抗體致敏的紅細胞與凝聚胺連在一起，就會發(fā)生不可逆凝集。在使用凝聚胺檢測抗體活性時，抗原抗體在低離子介質中孵育，可促進紅細胞與相應抗體的反應，使得抗原抗體更有效的結合。經再懸液中和后，抗體介導的特異性凝集仍然存在，而非特異凝集的細胞散開。破壞Kell系統(tǒng)抗原抗人球蛋白法一些IgG類抗體(主要是免疫抗體，如Rh血型抗體)是一種7s球蛋白，分子量小，分子長度只250°A，與紅細胞相應抗原結合后，在鹽水介質中不出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應，但在加入抗-IgG的抗體后，以其搭橋則可出現(xiàn)凝集反應操作繁瑣，耗時長–––––––––––––––––––––––––––––––––––酶作用縮短紅細胞間距離–––––––––––––酶對紅細胞抗原的作用抗原增強抗原性破壞KiddRhLewisIPFyaFybMNSs抗人球蛋白檢測技術分類：直接抗人球蛋白實驗（DAT）間接抗人球蛋白試驗(IAT)試劑：多特異性抗人球(抗-IgG+抗-C3)單特異性抗人球(抗-IgG或抗-C3)SensitizationAgglutinationbyAnti-humanGlobulinDATPt.RBCs+AHG觀察凝集并判讀結果IATRBCs+血清+AHG觀察凝集并判讀結果抗人球蛋白檢測技術抗人球蛋白試驗應用直接抗人球蛋白試驗在臨床上主要應用于：胎母血型不合新生兒溶血?。℉DN）免疫溶血性輸血反應（LHTR）自身免疫溶血性貧血（AIHA）藥物導致的免疫溶血性貧血間接抗人球蛋白試驗應用于：紅細胞血型定型；相容性配血實驗；產前檢查；弱D抗原檢測洗滌加入AHG離心陽性直接抗人球蛋白間接抗人球蛋白+離心孵育后洗滌陽性陰性陽性陰性加入AHG加入對照細胞后離心觀察結果Coombs’

對照細胞(CCC,CC)假陰性結果陰性結果陽性陰性洗滌加入抗人球蛋白試劑后離心陽性未洗滌假陰性FalseNegativeTests抗體篩檢篩檢紅細胞IS37℃30’AHGCCOI1+--2+OII3+--2+1、表明抗體為IgM抗體

2、存在劑量效應劑量效應Kidd、Duffy、Rh及MN（MNSs）系統(tǒng)中抗原存在劑量效應。抗體篩檢篩檢紅細胞IS37℃30’AHGCCOI--3+NTOII---2+表明篩檢的抗體為IgG類抗體抗體鑒定DCcEeKkAHG1++--+++3+2+-++--+-3+-+-++-3+4-++-+-+-5--+++-+-6--+-+++3+Anti-K抗體鑒定DCcEeJkaJkbAHG1++--+++W+2+-++--+-3+-+-++-2+4-++-+++W+5--+++-+-6--+-++-2+Anti-Jka交叉配血試驗相容性配血試驗，檢測受血者血清中抗體和獻血者紅細胞抗原是否相合試驗為主側交叉配血試驗，檢測受血者紅細胞和獻血者血清中抗體是否相合試驗為次側交叉配血試驗，對其中是不完全抗體的，應用間接抗人球蛋白試驗確定其相容性。目的防止發(fā)生輸血反應增加體內紅細胞的存活率進一步確定ABO血型定型正確檢測抗體的另一方法血型檢測常規(guī)方法玻片法試管法微板法固相凝集法微柱凝膠法孵育洗滌YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYLISS+Sample+固相凝集實驗技術陽性離心弱陽性陰性指示細胞+微柱凝膠檢測加入血清及紅細胞凝膠離心力反應腔分類中性膠：微柱腔內及凝膠中不含特異性抗體,也不含抗人球蛋白。抗人球膠：微柱腔內及凝膠中含抗人球蛋白。特異性膠：微柱腔內及凝膠中含特異性抗體。

應用ABO、RhD血型定型抗人球蛋白檢測抗體篩檢及鑒定交叉配血新生兒溶血病檢測Thankyou

聯(lián)系方式：辦公機-mail:tongjun666@呼吸機治療常見病癥及通氣參數(shù)初設患者的分類呼吸力學及氣體交換正常嚴重氣流阻塞慢性呼吸功能衰竭急性加重急性缺氧性呼吸功能衰竭肺或胸廓限制性疾病呼吸力學及氣體交換正常的患者中驅驅動力的缺乏-藥物過量、腦干結構損傷神經肌肉疾病-高位頸髓損傷、急性轉發(fā)性脊髓炎、重癥肌無力休克治療中的輔助療法過度通氣-顱腦損傷后ICP升高的治療嚴重氣流梗阻臨床反映：內源性PEEP過高-肺泡過度膨脹-胸腔內壓過高回心血量減少休克降低內源性的方法-延長呼氣時間增加吸氣流量降低呼吸頻率外源性PEEP？

例：增加流量不能顯著延長呼氣時間TEVTRRFlowTE0.515603.500.5151203.750.514603.80降低分鐘通氣量對減少病人內源性PEEP的重要作用！嚴重氣流梗阻通過應用外源性PEEP來對抗內源性PEEP-存在患者觸發(fā)時-外源性PEEP應不超過內源性的85%嚴重氣流梗阻嘆息=？并不需要-氣道壓力上限≥15%減速氣流=？不推薦使用-呼吸機工作“更佳”峰值壓力-患者病情可能“更差”內源性PEEP積極的胸部物理治療（CPT）-清除黏液栓-保持氣道通暢慢性呼吸功能衰竭急性加重患者插管時-低灌注（心動過速、低血壓）？常見-暫時中斷機械通氣并進行擴容慢性呼吸功能衰竭急性加重患者通氣的目的-使患者和呼吸肌肉得到36~72小時的長時間休息-適當?shù)牡屯饴院粑δ芩ソ呒毙约又鼗颊逷EEP的調節(jié)-FiO2≤60%時保持SaO2＞90%的最小PEEP-靜態(tài)P-V曲線的低位轉折點以上2cmh2o急性缺氧性呼吸功能衰竭的患者參數(shù)設置：-定容通氣時的潮氣量：9ml/kg-壓力支持通氣的壓力：19cmH2o-呼吸末正壓：≤5cmH2o肺或胸擴限制性疾病的患者肺部疾患-晚期肺纖維化-晚期ARDS腹部疾患-大量腹水其他胸廓異常-脊柱后凸畸形肺或胸擴限制性疾病的患者減少死腔通氣的方法-降低分鐘通氣量-糾正低血容量患者的處理呼吸機的參數(shù)初設模式FiO2PEEPVTRRFLOW