高考生物復(fù)習(xí)小專題 37-微生物的利用

第37講微生物的利用[考綱要求]1.微生物的分離和培養(yǎng)。2.某種微生物數(shù)量的測定。3.培養(yǎng)基對微生物的選擇作用。考點(diǎn)一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1．培養(yǎng)基(1)概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。(2)營養(yǎng)組成：一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽。此外，還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。(3)種類①按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。②按照成分的來源可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。③按照功能用途可分為選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等。2．無菌技術(shù)(1)含義：在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。(2)常用方法

3．大腸桿菌的純化培養(yǎng)(1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基eq\x(計(jì)算)→eq\x(稱量)→eq\x(溶化)→eq\x(調(diào)pH)→eq\x(滅菌)→eq\x(倒平板)(2)純化大腸桿菌的方法①平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。②稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。(3)菌種的保存方法①對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的方法。②對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。判斷關(guān)于微生物培養(yǎng)技術(shù)的敘述(1)培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽，有時還需要加入一些特殊的物質(zhì)(√)(2)倒平板時，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上(×)(3)消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對細(xì)胞的傷害(√)(4)為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落(×)(5)用稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時，只要稀釋度足夠高，就能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落(√)如圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖，請分析：(1)獲得圖A效果和圖B效果的接種方法分別是什么？提示獲得圖A效果的接種方法為稀釋涂布平板法，獲得圖B效果的接種方法為平板劃線法。(2)某同學(xué)在純化土壤中的細(xì)菌時，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成了一片，最可能的原因是什么？應(yīng)當(dāng)怎樣操作才可避免此種現(xiàn)象？提示最可能的原因是菌液濃度過高或劃線時在劃下一區(qū)域前未將接種環(huán)灼燒滅菌；采取的措施是增大稀釋倍數(shù)或每次劃新區(qū)域前先將接種環(huán)灼燒滅菌。(3)接種操作為什么一定要在火焰附近進(jìn)行？提示火焰附近存在著無菌區(qū)域。1．培養(yǎng)基的配制原則(1)目的要明確：配制時應(yīng)根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制的培養(yǎng)基種類。(2)營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。(3)pH要適宜：細(xì)菌為6.5～7.5，放線菌為7.5～8.5，真菌為5.0～6.0，培養(yǎng)不同微生物所需的pH不同。2．選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基的比較種類原理用途舉例選擇培養(yǎng)基依據(jù)某些微生物對某些物質(zhì)或環(huán)境條件的嗜好、抗性而設(shè)計(jì)從眾多微生物中分離出所需的微生物加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌鑒別培養(yǎng)基依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中的特定試劑或化學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化而設(shè)計(jì)鑒別不同種類的微生物伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌3.消毒和滅菌的辨析項(xiàng)目條件結(jié)果常用方法應(yīng)用范圍消毒較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高溫的液體化學(xué)藥劑消毒法用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源滅菌強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌法接種工具干熱滅菌法玻璃器皿、金屬工具高壓蒸汽滅菌法培養(yǎng)基及容器的滅菌命題點(diǎn)一微生物的培養(yǎng)和無菌技術(shù)分析1．(2018·全國Ⅱ，37)在生產(chǎn)、生活和科研實(shí)踐中，經(jīng)常通過消毒和滅菌來避免雜菌的污染。回答下列問題：(1)在實(shí)驗(yàn)室中，玻璃和金屬材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)器具_(dá)__________(填“可以”或“不可以”)放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌。(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法，與煮沸消毒法相比，這兩種方法的優(yōu)點(diǎn)是_____________________________________________________________________________。(3)密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒，其原因是紫外線能_______________________。在照射前，適量噴灑________，可強(qiáng)化消毒效果。(4)水廠供應(yīng)的自來水通常是經(jīng)過________(填“氯氣”“乙醇”或“高錳酸鉀”)消毒的。(5)某同學(xué)在使用高壓蒸汽滅菌鍋時，若壓力達(dá)到設(shè)定要求，而鍋內(nèi)并沒有達(dá)到相應(yīng)溫度，最可能的原因是____________________。答案(1)可以(2)在達(dá)到消毒目的的同時，營養(yǎng)物質(zhì)損失較少(3)破壞DNA結(jié)構(gòu)消毒液(4)氯氣(5)未將鍋內(nèi)冷空氣排盡解析(1)干熱滅菌是指將物品放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170℃條件下加熱1～2h。耐高溫、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)和金屬用具等，可采用干熱滅菌的方法。(2)巴氏消毒法是在70～75℃條件下煮30min或在80℃條件下煮15min，可以殺死牛奶中的微生物，并且使牛奶的營養(yǎng)物質(zhì)損失較少。(3)接種室、接種箱或超凈工作臺在使用前，可以用紫外線照射30min，紫外線能破壞微生物的DNA結(jié)構(gòu)，以殺死物體表面或空氣中的微生物。在照射前，適量噴灑石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以強(qiáng)化消毒效果。(4)自來水通常是用氯氣進(jìn)行消毒的。(5)在使用高壓蒸汽滅菌鍋時，若壓力達(dá)到設(shè)定要求，而鍋內(nèi)并沒有達(dá)到相應(yīng)溫度，最可能的原因是鍋內(nèi)原有的冷空氣沒有排盡。2．高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中有很大的實(shí)用性。研究者從熱泉中篩選出了能高效生產(chǎn)高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過程如下圖所示。請據(jù)圖回答下列問題：(1)Ⅰ號培養(yǎng)基從物理狀態(tài)來看，屬于固體培養(yǎng)基，配制時要加入________________作為凝固劑，從用途來看屬于選擇培養(yǎng)基，應(yīng)以________________作為唯一碳源。(2)配制固體培養(yǎng)基的基本步驟是()A．計(jì)算、稱量、倒平板、溶化、滅菌B．計(jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌C．計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板D．計(jì)算、稱量、滅菌、溶化、倒平板(3)溶化時，燒杯中加入瓊脂后要不停地____________，防止瓊脂糊底引起燒杯破裂。對培養(yǎng)基滅菌的方法一般為____________________。(4)過程①是________________，過程②所使用的接種方法是________________法。(5)部分嗜熱菌在Ⅰ號培養(yǎng)基上生長時可釋放________分解培養(yǎng)基中的淀粉，在菌落周圍形成透明圈，挑選相應(yīng)的菌落，接種到Ⅱ號培養(yǎng)基進(jìn)一步分離純化后，再對菌種進(jìn)行____________培養(yǎng)。答案(1)瓊脂淀粉(2)C(3)攪粉酶擴(kuò)大解析(1)固體培養(yǎng)基中通常加入瓊脂作為凝固劑。本實(shí)驗(yàn)的目的是獲得生產(chǎn)高溫淀粉酶的嗜熱菌，故其選擇培養(yǎng)基中應(yīng)以淀粉作為唯一碳源。(2)配制固體培養(yǎng)基的基本步驟是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。(3)配制培養(yǎng)基加熱溶化時，要注意加入瓊脂后要不斷攪拌，防止瓊脂糊底。對培養(yǎng)基的滅菌一般采用高壓蒸汽滅菌法。(4)仔細(xì)觀察題圖可知，過程①是菌液稀釋，過程②是采用涂布平板法接種。(5)能產(chǎn)生淀粉酶的部分細(xì)菌能分解利用淀粉，其菌落周圍會出現(xiàn)透明圈，取這樣的菌落再分離純化可獲得相應(yīng)菌種，以后可以對菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)用于生產(chǎn)。命題點(diǎn)二微生物的純化方法及過程分析3．(2018·全國Ⅲ，37)回答下列與酵母菌有關(guān)的問題：(1)分離培養(yǎng)酵母菌通常使用____________(填“牛肉膏蛋白胨”“MS”或“麥芽汁瓊脂”)培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基應(yīng)采用________滅菌法滅菌。若將酵母菌劃線接種在平板上，培養(yǎng)一段時間后可觀察到菌落，菌落的含義是__________________________________________________。(2)酵母菌液體培養(yǎng)時，若通入氧氣，可促進(jìn)________________(填“菌體快速增殖”“乙醇產(chǎn)生”或“乳酸產(chǎn)生”)；若進(jìn)行厭氧培養(yǎng)，可促進(jìn)____________(填“菌體快速增殖”“乙醇產(chǎn)生”或“乳酸產(chǎn)生”)。(3)制作面包時，為使面包松軟通常要在面粉中添加一定量的酵母菌，酵母菌引起面包松軟的原因是_____________________________________________________________。答案(1)麥芽汁瓊脂高壓蒸汽由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體(2)菌體快速增殖乙醇產(chǎn)生(3)酵母菌分解葡萄糖會產(chǎn)生CO2，CO2使面包松軟解析(1)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用廣泛的細(xì)菌培養(yǎng)基；MS培養(yǎng)基是滿足植物細(xì)胞的營養(yǎng)和生理需要的培養(yǎng)基；麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基通常用于酵母菌(真菌)的培養(yǎng)、鑒定及菌種保存。培養(yǎng)基的滅菌方法為高壓蒸汽滅菌法。菌落是指由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體。(2)酵母菌為兼性厭氧型微生物，在有氧條件下進(jìn)行有氧呼吸為其自身的繁殖提供能量；在無氧條件下，酵母菌進(jìn)行無氧呼吸產(chǎn)生乙醇。(3)面包松軟是因?yàn)橹谱鬟^程中加入的酵母菌可以分解葡萄糖產(chǎn)生大量的CO2，CO2遇熱膨脹，使得制作的面包松軟多孔。4．牛奶是微生物培養(yǎng)的良好培養(yǎng)基，牛奶在飲用前都要經(jīng)過巴氏消毒，以殺死有害微生物，為檢測消毒前后牛奶中細(xì)菌含量變化情況，做如圖1所示操作。用無菌吸管從錐形瓶中吸取1mL生牛奶稀釋液至盛有9mL無菌水的試管中，混合均勻，如此再重復(fù)2次。請回答下列有關(guān)問題：(1)巴氏消毒的方法是__________________________，使用這種方法對生鮮牛奶進(jìn)行消毒的好處是__________________。(2)取最終的牛奶稀釋液0.1mL滴在培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布，應(yīng)選擇的涂布工具是圖2中的__________________。(3)圖1中所示方法為稀釋涂布平板法，理想情況下，培養(yǎng)一段時間后可在培養(yǎng)基表面形成菌落。若用該方法培養(yǎng)設(shè)置了3個培養(yǎng)皿，菌落數(shù)分別為35個、33個、34個，則可以推測生牛奶中每毫升含細(xì)菌數(shù)為__________個，運(yùn)用這種方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往較實(shí)際值________(填“偏大”或“偏小”)，原因是_____________________________________________________。(4)消毒后的牛奶中絕大部分細(xì)菌被殺死，若繼續(xù)用該方法檢測消毒后的牛奶中細(xì)菌的數(shù)量，則在操作步驟上應(yīng)做什么改動？__________________。(5)從生牛奶取樣培養(yǎng)得到的菌落中混有各種雜菌，從中檢測出大腸桿菌的方法是在培養(yǎng)基中加入__________，若菌落具有____________________特征，則可以認(rèn)定為大腸桿菌。答案(1)在70～75℃煮30min(或在80℃煮15min)牛奶的營養(yǎng)成分不被破壞(2)B(3)3.4×106偏小個別菌落可能是由兩個或多個細(xì)胞形成的(4)減少稀釋次數(shù)(5)伊紅美藍(lán)(金屬光澤的紫)黑色解析(1)巴氏消毒的方法是在70～75℃煮30min或在80℃牛奶的營養(yǎng)成分不被破壞。(2)涂布使用的工具是涂布器，圖2中個/0.1mL×104＝3.4×106個/mL。在統(tǒng)計(jì)菌落時，當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是單個菌落，所以運(yùn)用這種方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往比實(shí)際值偏小。(4)由于消毒后牛奶中絕大部分細(xì)菌被殺死，所以可減少稀釋次數(shù)。(5)大腸桿菌的代謝產(chǎn)物會使伊紅美藍(lán)鑒別培養(yǎng)基出現(xiàn)金屬光澤的紫黑色。考點(diǎn)二微生物的篩選和計(jì)數(shù)1．土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)(1)分離原理：土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕福@種物質(zhì)在把尿素分解成無機(jī)物的過程中起到催化作用。(2)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目一般用稀釋涂布平板法。①統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時，培養(yǎng)基表面生長的1個菌落，來源于樣品稀釋液中的1個活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。②從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)的計(jì)算方法是(平均菌落數(shù)÷涂布的稀釋液體積)×稀釋倍數(shù)。③利用稀釋涂布平板法成功統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是恰當(dāng)?shù)南♂尪取?3)實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣→樣品的稀釋→微生物的培養(yǎng)與觀察→細(xì)菌的計(jì)數(shù)。2．分解纖維素的微生物的分離(1)纖維素酶①組成：纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。②作用纖維素eq\o(→,\s\up7(C1酶),\s\do5(CX酶))纖維二糖eq\o(→,\s\up7(葡萄糖苷酶))葡萄糖(2)纖維素分解菌的篩選①原理纖維素分解菌↓eq\b\lc\\rc\}(\a\vs4\al\co1(剛果紅,纖維素))→紅色復(fù)合物eq\o(→,\s\up7(纖維素酶))紅色消失，出現(xiàn)透明圈。②篩選方法：剛果紅染色法，即通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。③培養(yǎng)基：以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。④實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣：富含纖維素的環(huán)境↓選擇培養(yǎng)：用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌的濃度↓梯度稀釋：制備系列稀釋液↓涂布平板：將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上↓挑選產(chǎn)生透明圈的菌落歸納總結(jié)兩種純化細(xì)菌方法的辨析比較項(xiàng)目平板劃線法稀釋涂布平板法關(guān)鍵操作接種環(huán)在固體平板培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線①一系列的梯度稀釋②涂布平板法操作注意事項(xiàng)每次劃線前后均需灼燒接種環(huán)稀釋度要足夠高，為確保實(shí)驗(yàn)成功可以適當(dāng)增加稀釋度的范圍菌體獲取在具有顯著菌落特征的區(qū)域的菌落中挑取菌體從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體優(yōu)點(diǎn)可以根據(jù)菌落的特點(diǎn)獲得某種微生物的單細(xì)胞菌落既可以獲得單細(xì)胞菌落，又能對微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)缺點(diǎn)不能對微生物計(jì)數(shù)操作復(fù)雜，需要涂布多個平板(1)選擇培養(yǎng)基可以鑒定某種微生物的種類(×)(2)對細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)只能采用稀釋涂布平板法，而不能用平板劃線法(×)(3)篩選能分解尿素的細(xì)菌所利用的培養(yǎng)基中，尿素是唯一的氮源(√)(4)分解尿素的細(xì)菌在分解尿素時，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基的酸堿度降低(×)(5)剛果紅可以與纖維素形成透明復(fù)合物，所以可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌(×)研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上，篩選到了幾株有透明降解圈的菌落如圖1所示，將篩選到的纖維素酶高產(chǎn)菌株J1和J4在不同的溫度和pH條件下進(jìn)行發(fā)酵，測得發(fā)酵液中酶活性的結(jié)果如圖2，請分析：(1)透明圈是如何形成的？提示剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不與纖維素降解產(chǎn)物纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。細(xì)菌分泌的纖維素酶能將培養(yǎng)基中的纖維素降解成纖維二糖和葡萄糖，形成透明圈。(2)圖中透明圈大小代表什么？降解纖維素能力最強(qiáng)的菌株是哪種？提示透明圈大小與纖維素酶的量和活性有關(guān)，降解纖維素能力最強(qiáng)的是菌株①。(3)結(jié)合圖2推測哪種菌株更適合用于人工瘤胃發(fā)酵？提示J4菌株在較高溫度和酸性環(huán)境下酶的活性更高，更適合用于人工瘤胃發(fā)酵。命題點(diǎn)一選擇培養(yǎng)基成分及配制方法的分析1．(2018·全國Ⅰ，37)將馬鈴薯去皮切塊，加水煮沸一定時間，過濾得到馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸出液中加入一定量蔗糖和瓊脂，用水定容后滅菌，得到M培養(yǎng)基?；卮鹣铝袉栴}：(1)M培養(yǎng)基若用于真菌的篩選，則培養(yǎng)基中應(yīng)加入鏈霉素以抑制________的生長，加入了鏈霉素的培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。(2)M培養(yǎng)基中的馬鈴薯浸出液為微生物生長提供了多種營養(yǎng)物質(zhì)，營養(yǎng)物質(zhì)類型除氮源外還有________________(答出兩點(diǎn)即可)。氮源進(jìn)入細(xì)胞后，可參與合成的生物大分子有________________(答出兩點(diǎn)即可)。(3)若在M培養(yǎng)基中用淀粉取代蔗糖，接種土壤濾液并培養(yǎng)，平板上長出菌落后可通過加入顯色劑篩選出能產(chǎn)淀粉酶的微生物。加入的顯色劑是________，該方法能篩選出產(chǎn)淀粉酶微生物的原理是________________________________________________________________________________________________________________。(4)甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定某一土壤樣品中微生物的數(shù)量，在同一稀釋倍數(shù)下得到以下結(jié)果：甲同學(xué)涂布了3個平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是110、140和149，取平均值133；乙同學(xué)涂布了3個平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是27、169和176，取平均值124。有人認(rèn)為這兩位同學(xué)的結(jié)果中，乙同學(xué)的結(jié)果可信度低，其原因是_______________________________________________________________________________________________________。答案(1)細(xì)菌選擇(2)碳源、無機(jī)鹽蛋白質(zhì)、核酸(3)碘液淀粉遇碘液顯藍(lán)色，產(chǎn)淀粉酶的菌落周圍淀粉被水解，形成透明圈(4)乙同學(xué)的結(jié)果中，1個平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另2個相差懸殊，結(jié)果的重復(fù)性差解析(1)鏈霉素是抗生素，可抑制細(xì)菌生長，故在M培養(yǎng)基中加入鏈霉素作為選擇培養(yǎng)基，可篩選出真菌。(2)培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分一般包括碳源、氮源、水和無機(jī)鹽等。細(xì)胞中含有氮元素的生物大分子有蛋白質(zhì)、核酸等，故所加入的氮源可參與以上物質(zhì)的合成。(3)淀粉遇碘變藍(lán)，向加有淀粉的培養(yǎng)基中加入碘液后培養(yǎng)基呈現(xiàn)藍(lán)色，產(chǎn)淀粉酶的菌落周圍的淀粉被水解，形成透明圈，可根據(jù)透明圈的大小判斷產(chǎn)生淀粉酶的多少。(4)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)時一般選擇菌落數(shù)在30～300個的平板，甲同學(xué)統(tǒng)計(jì)的3個平板中的菌落數(shù)在正常范圍內(nèi)且差距不大，比較準(zhǔn)確；乙同學(xué)統(tǒng)計(jì)的3個，結(jié)果的重復(fù)性差。2．苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細(xì)菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，①為土壤樣品。請據(jù)圖回答下列問題：(1)②中培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入________作為碳源，②中不同濃度碳源的培養(yǎng)基______________(填“影響”或“不影響”)細(xì)菌的數(shù)量，如果要測定②中活細(xì)菌數(shù)量，常采用______________________法。(2)④為對照，微生物在④中不生長，在⑤中生長，④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于___________________________________________________________________________________________。采用固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時進(jìn)行倒置培養(yǎng)的原因是___________________________________________________________________________________________________。(3)實(shí)驗(yàn)過程中如何防止其他微生物的污染？_______________________________________________________________________________。答案(1)苯酚影響稀釋涂布平板(2)④的培養(yǎng)基中沒有加入苯酚作為碳源，⑤的培養(yǎng)基中加入了苯酚作為碳源防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基(3)培養(yǎng)基滅菌，接種環(huán)境滅菌，接種過程進(jìn)行無菌操作解析(1)選擇只能降解利用苯酚的細(xì)菌的培養(yǎng)基是以苯酚為唯一碳源的培養(yǎng)基；苯酚是唯一的碳源，當(dāng)苯酚消耗盡時，菌株因缺少碳源而不能繼續(xù)繁殖，所以②中不同濃度的碳源會影響細(xì)菌數(shù)量；一般采用稀釋涂布平板法來測定②中活菌數(shù)目。(2)④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于④的培養(yǎng)基中沒有加入苯酚作為碳源，⑤的培養(yǎng)基中加入了苯酚作為碳源；采用固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時要倒置培養(yǎng)，以防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基。(3)從制備培養(yǎng)基到接種與培養(yǎng)等全部實(shí)驗(yàn)過程要進(jìn)行無菌操作。無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵：a.實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒；b.將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌；c.為避免周圍環(huán)境中微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行；d.實(shí)驗(yàn)操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。命題點(diǎn)二微生物分離與計(jì)數(shù)的實(shí)例分析3．(2018·山東、湖北部分重點(diǎn)中學(xué)高考沖刺模擬)從土壤中分離尿素分解菌和纖維素分解菌，具有下列類似的操作過程：(1)在過程④的選擇培養(yǎng)基是________培養(yǎng)基(填“固體”或“液體”)，過程⑧的選擇培養(yǎng)基是________培養(yǎng)基(填“固體”或“液體”)。④的具體操作是________________；⑧的具體操作是________________________________________________________________________。(2)在過程③樣品梯度稀釋后，一般只將稀釋度為104～106倍的菌液分別接種到3個平板培養(yǎng)基上。接種的常用方法為____________________________。(3)過程⑩采用______________________的鑒別方法較簡單。周圍出現(xiàn)透明圈但不能100%確定為纖維素分解菌的菌落，原因是________________________________________________________________________________________________________。答案(1)固體液體以尿素為唯一氮源以纖維素為唯一碳源(2)稀釋涂布平板(或平板劃線)法(3)倒平板時加入剛果紅染液不分解纖維素(如分解剛果紅)的微生物菌落也可能出現(xiàn)透明圈解析(1)將微生物接種在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，才能形成菌落，可見，過程④的選擇培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基。進(jìn)行梯度稀釋并接種前要進(jìn)行過程⑧所示的選擇培養(yǎng)，因此過程⑧的選擇培養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基。④選擇培養(yǎng)的目的是篩選尿素分解菌，所以具體的操作是以尿素為唯一氮源；⑧選擇培養(yǎng)的目的是篩選纖維素分解菌，所以⑧的具體操作是以纖維素為唯一碳源。(2)常采用稀釋涂布平板(或平板劃線)法，將稀釋度為104～106倍的菌液分別接種到3個平板培養(yǎng)基上。(3)剛果紅可與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不和纖維素水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生顏色反應(yīng)。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅—纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。可見，過程⑩采用倒平板時加入剛果紅染液的鑒別方法較簡單。由于不分解纖維素(如分解剛果紅)的微生物菌落也可能出現(xiàn)透明圈，所以周圍出現(xiàn)透明圈的菌落，不能100%確定為纖維素分解菌的菌落。4．(2018·重慶高三第二次診斷)北方每年在小麥豐收的季節(jié)，焚燒秸稈火焰四起，煙霧彌漫，不但導(dǎo)致嚴(yán)重的霧霾而且造成資源的浪費(fèi)。科學(xué)家為了解決這個問題，努力尋找分解秸稈中纖維素的微生物，他們做了如下實(shí)驗(yàn)，據(jù)圖回答：eq\x(從森林里取土壤樣本)→eq\x(選擇培養(yǎng))→eq\x(梯度稀釋)→eq\x(將樣品接種到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上)→eq\x(挑選產(chǎn)生透明圈的菌落，統(tǒng)計(jì)并計(jì)算每克樣品中的細(xì)菌數(shù))甲(1)根據(jù)甲圖，選擇培養(yǎng)纖維素分解菌要用__________。為了統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目，常用方法除稀釋涂布平板法外，還有______________的方法。(2)乙圖是培養(yǎng)出的單菌落示意圖，最適合分解秸稈的兩個菌落是____________(填數(shù)字)，纖維素分解菌將纖維素最終分解為____________。從圖中可以看出培養(yǎng)基上菌落數(shù)較少，推測可能的原因是____________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)為了長期保存該微生物，可以采用________的方法。答案(1)選擇培養(yǎng)基顯微鏡直接計(jì)數(shù)(2)1和4葡萄糖土壤中纖維素分解菌較少，稀釋的倍數(shù)太大(3)甘油管藏解析(1)從土壤樣液中篩選能分解纖維素的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基是選擇培養(yǎng)基。統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目，常用稀釋涂布平板法或顯微鏡直接計(jì)數(shù)的方法。(2)透明圈的大小反映了細(xì)菌分解纖維素的能力大小，所以乙圖中最適合分解秸稈的兩個菌落是1和4；纖維素是多糖，最終被纖維素分解菌分解成葡萄糖；從圖中可以看出培養(yǎng)基上菌落數(shù)較少，推測可能是土壤中纖維素分解菌較少，稀釋的倍數(shù)太大所致。(3)長期保留菌種可用甘油管藏的方法。矯正易錯強(qiáng)記長句1．灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。2．劃線時最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。3．劃線時用力大小要適當(dāng)，這是為了防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。4．用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，這是因?yàn)楫?dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。5．尿素分解菌和纖維素分解菌的分離都運(yùn)用了選擇培養(yǎng)基，前者所用的培養(yǎng)基中尿素是唯一的氮源，后者所用的培養(yǎng)基中纖維素是唯一的碳源。下圖甲、乙是微生物接種常用的兩種方法，請回答相關(guān)問題：1．圖甲是利用平板劃線法進(jìn)行微生物接種，圖乙是利用稀釋涂布平板法進(jìn)行微生物接種。對這兩種接種工具進(jìn)行滅菌和消毒的方法依次是灼燒滅菌和酒精消毒。2．接種操作在火焰附近進(jìn)行的原因是火焰附近為無菌區(qū)域。3．接種后，在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)細(xì)菌時進(jìn)行倒置培養(yǎng)的目的是防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基。重溫高考演練模擬1．(2017·全國Ⅰ，37)某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用?；卮鹣铝袉栴}：(1)有些細(xì)菌能分解尿素，有些細(xì)菌則不能，原因是前者能產(chǎn)生________。能分解尿素的細(xì)菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源，原因是________________________________________，但可用葡萄糖作為碳源，進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是____________________________________________________________________________________________(答出兩點(diǎn)即可)。(2)為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時，應(yīng)選擇__________________________(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”)作為氮源，不選擇其他兩組的原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)用來篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有______________________________________________________________________________________________________________________________________________(答出兩點(diǎn)即可)。答案(1)脲酶分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)型生物，不能利用CO2來合成有機(jī)物為細(xì)胞生命活動提供能量，為其他有機(jī)物的合成提供原料(2)尿素其他兩組都含有NH4NO3，能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用NH4NO3，不能起到篩選作用(3)為細(xì)菌生長提供無機(jī)營養(yǎng)，作為緩沖劑保持細(xì)胞生長過程中pH的穩(wěn)定解析(1)細(xì)菌分解尿素是由于細(xì)菌體內(nèi)能合成脲酶，尿素是有機(jī)物，分解尿素的細(xì)菌是分解者，屬于異養(yǎng)型生物，因此不能利用CO2作為碳源合成有機(jī)物。葡萄糖通常既作為碳源，也作為能源。(2)篩選分解尿素的細(xì)菌，通常只能用尿素作為唯一氮源，“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”均含有無機(jī)氮源NH4NO3，能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用NH4NO3，不能起到篩選作用。(3)KH2PO4和Na2HPO4可為微生物生長提供P元素和無機(jī)鹽離子，如K＋和Na＋，還可作為緩沖劑保持細(xì)胞生長過程中pH的穩(wěn)定。2．(2016·全國Ⅰ，39)空氣中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物，以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實(shí)驗(yàn)步驟如下：①配制培養(yǎng)基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O)；②制作無菌平板；③設(shè)置空白對照組和若干實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行相關(guān)操作；④將各組平板置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)一段時間，統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的平均數(shù)?；卮鹣铝袉栴}：(1)該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來源于________________________。若要完成步驟②，該培養(yǎng)基中的成分X通常是________。(2)步驟③中，實(shí)驗(yàn)組的操作是______________________________________________________________________________________________________________________________。(3)若在某次調(diào)查中，某一實(shí)驗(yàn)組平板上菌落平均數(shù)為36個/平板，而空白對照組的一個平板上出現(xiàn)了6個菌落，這種結(jié)果說明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了________現(xiàn)象。若將30(即36－6)個/平板作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法________(填“正確”或“不正確”)。答案(1)牛肉膏、蛋白胨瓊脂(2)將各實(shí)驗(yàn)組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開蓋暴露一段時間(3)污染不正確解析(1)牛肉膏和蛋白胨都含有蛋白質(zhì)的水解產(chǎn)物，都可以作為氮源；平板為固體培養(yǎng)基，故需要加入凝固劑瓊脂。(2)實(shí)驗(yàn)探究的是教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布，其中變量為不同高度，故需在不同高度下放置開蓋平板。同時，為了保證單一變量，需要保證開蓋放置時間一致。為了保證實(shí)驗(yàn)可靠性，需要設(shè)置多個平行組。(3)在完全正確的操作情況下，空白對照組中不應(yīng)出現(xiàn)菌落。若出現(xiàn)菌落，表明操作過程中存在雜菌污染，屬于實(shí)驗(yàn)失誤，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均不應(yīng)采用。3．(2016·四川，10節(jié)選)圖甲是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細(xì)菌的過程，圖乙是脲酶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA部分序列。(1)在5個細(xì)菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品液0.1mL，培養(yǎng)一段時間后，平板上長出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為__________×108個；與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法相比，此計(jì)數(shù)方法測得的細(xì)菌數(shù)較__________。(2)現(xiàn)有一菌株的脲酶由于基因突變而失活，突變后基因轉(zhuǎn)錄的mRNA在圖乙箭頭所示位置增加了70個核苷酸，使圖乙序列中出現(xiàn)終止密碼(終止密碼有UAG、UGA和UAA)。突變基因轉(zhuǎn)錄的mRNA中，終止密碼為________________，突變基因表達(dá)的蛋白質(zhì)含____________個氨基酸。答案(1)1.75少(2)UGA115解析(1)用于統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)應(yīng)介于30～300之間，故選擇細(xì)菌菌落數(shù)為156、178和191的平板計(jì)數(shù)，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)為(156＋178＋191)÷3÷0.1×105＝1.75×108(個)。由于兩個或多個細(xì)胞連接在一起時，往往統(tǒng)計(jì)的是一個菌落，故用此方法測得的細(xì)菌數(shù)較少。(2)密碼子由三個相鄰的堿基組成，271個堿基和后面2個堿基一起共構(gòu)成91個密碼子，箭頭處插入的70個核苷酸和后面2個堿基一起共構(gòu)成24個密碼子，緊隨其后是UGA，為終止密碼，因此表達(dá)的蛋白質(zhì)含115個氨基酸。一、選擇題1．(2018·北京通州區(qū)高三一模)下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述正確的是()A．通常使用液體培養(yǎng)基分離獲得細(xì)菌單菌落B．若培養(yǎng)基需要調(diào)節(jié)pH，應(yīng)該在滅菌后進(jìn)行C．用顯微鏡直接計(jì)數(shù)固體培養(yǎng)基中微生物數(shù)量D．倒置平板可防止培養(yǎng)基被滴落的冷凝水污染答案D解析常用固體或半固體培養(yǎng)基分離獲得細(xì)菌單菌落，液體培養(yǎng)基無法分離，A錯誤；若培養(yǎng)基需要調(diào)節(jié)pH，應(yīng)該在滅菌前進(jìn)行，B錯誤；顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是測定培養(yǎng)液中微生物數(shù)量的方法，固體培養(yǎng)基上用稀釋涂布平板法直接計(jì)數(shù)單個菌落數(shù)，C錯誤；倒置平板是防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基，D正確。

2．下面是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序?yàn)?、2、3、4、5。下列敘述正確的是()A．在五個區(qū)域中劃線前后都要對接種環(huán)和培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌B．劃線操作時完全打開皿蓋，劃完立即蓋上C．接種時不能劃破培養(yǎng)基，否則難以達(dá)到分離單菌落的目的D．第1區(qū)和第5區(qū)的劃線最終要連接起來，以便比較前后的菌落數(shù)答案C解析在每次劃線前后都要對接種環(huán)進(jìn)行滅菌，但不能對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，A錯誤；進(jìn)行劃線操作時，左手將培養(yǎng)皿的皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋，B錯誤；注意接種時不能劃破培養(yǎng)基，否則難以達(dá)到分離單菌落的目的，C正確；第1區(qū)和第5區(qū)的劃線不能相連，D錯誤。3．(2018·四川樂山四校高三聯(lián)考)某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染情況而進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察與計(jì)數(shù)。下列與此實(shí)驗(yàn)相關(guān)問題的敘述中，正確的是()A．實(shí)驗(yàn)用過的帶菌培養(yǎng)基經(jīng)過加熱后才能倒掉B．利用平板劃線法對細(xì)菌進(jìn)行分離純化并計(jì)數(shù)C．觀察細(xì)菌培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)時，最好是在另一平板上接種清水作為對照實(shí)驗(yàn)D．培養(yǎng)基中含有的蛋白胨、淀粉可分別為細(xì)菌培養(yǎng)提供氮源和碳源答案D解析實(shí)驗(yàn)用過的帶菌培養(yǎng)基要高壓蒸汽滅菌后才能倒掉，以免污染環(huán)境，A項(xiàng)錯誤；應(yīng)利用稀釋涂布平板法對細(xì)菌進(jìn)行分離純化并計(jì)數(shù)，B項(xiàng)錯誤；要使該實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時在另一平板上接種無菌水作為對照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，C項(xiàng)錯誤；培養(yǎng)基中含有的蛋白胨、淀粉分別為細(xì)菌培養(yǎng)提供了氮源和碳源，D項(xiàng)正確。4．(2019·吉林模擬)下面關(guān)于土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)的敘述中，正確的是()A．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素B．篩選分解尿素的細(xì)菌時，應(yīng)以尿素作為培養(yǎng)基中唯一的營養(yǎng)物質(zhì)C．統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)目一般用平板劃線法D．在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變藍(lán)，則表明篩選到了分解尿素的細(xì)菌答案A解析只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，A項(xiàng)正確；篩選分解尿素的細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)中，采用的是以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，B項(xiàng)錯誤；統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)目一般用稀釋涂布平板法，C項(xiàng)錯誤；在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果pH升高，指示劑變紅，這樣就能初步鑒定該種細(xì)菌能夠分解尿素，D項(xiàng)錯誤。5．(2018·雅安中學(xué)高三上學(xué)期期中)下列關(guān)于微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的說法不正確的是()A．若用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個數(shù)，要想所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測樣品稀釋的稀釋度B．在微生物的培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮pH、溫度和滲透壓等條件C．消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對細(xì)胞的傷害D．從有機(jī)廢水中分離分解有機(jī)物的微生物時，接種后的培養(yǎng)皿需放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)答案D解析實(shí)驗(yàn)常采用稀釋涂布平板法對大腸桿菌進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，不僅要求嚴(yán)格的操作和多次重復(fù)取平均值，還要保證待測樣品有足夠的稀釋度，稀釋度過小會使多個細(xì)胞連在一起，造成數(shù)據(jù)偏小，稀釋度過高會使視野中細(xì)菌數(shù)過少，甚至看不到細(xì)菌，A正確；微生物的培養(yǎng)條件有營養(yǎng)、pH、溫度和滲透壓等，B正確；消毒是指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物，不包括芽孢和孢子，原則上主要是為了殺死材料表面的微生物，同時又減少消毒劑對細(xì)胞的傷害，C正確；能分解有機(jī)物的微生物屬于異養(yǎng)型微生物，接種后的培養(yǎng)皿不需要放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，D錯誤。二、非選擇題6．在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)研究上，常需要進(jìn)行微生物的分離和計(jì)數(shù)。(1)下表為兩種微生物的培養(yǎng)基配方：A組KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素瓊脂1.4g2.1g0.2g10.0g1.0g15.0gB組纖維素粉NaNO3Na2HPO4·7H2OKH2PO4MgSO4·7H2OKCl酵母膏水解酪素5g1g1.2g0.9g0.5g0.5g0.5g0.5g注：上述兩種培養(yǎng)基中的物質(zhì)溶解后，均用蒸餾水定容至1000mL。①從功能上來看，上述兩種培養(yǎng)基均屬于____________培養(yǎng)基。②如果要對土壤中分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行分離，則需要選擇____________(填“A”或“B”)培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中的碳源是______________________。③在分離尿素分解菌所用的培養(yǎng)基中可加入__________指示劑，根據(jù)指示劑的顏色可鑒定某種細(xì)菌能否分解尿素，若有分解尿素的細(xì)菌，培養(yǎng)基將會呈現(xiàn)__________。(2)如圖是某同學(xué)采用的接種微生物的方法，請回答下列問題：①本實(shí)驗(yàn)采用的接種微生物的方法是________________法，把聚集的菌種逐步_____________分散到培養(yǎng)基的表面，為達(dá)到這一目的，操作上應(yīng)注意：_____________________________________________________________________________________________________(至少答2項(xiàng))。②三位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中細(xì)菌數(shù)量，在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下統(tǒng)計(jì)結(jié)果：甲同學(xué)涂布了兩個平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是236和260，取平均值248；乙同學(xué)涂布了三個平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是210、240和250，取平均值233；丙同學(xué)涂布了三個平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是21、212和256，取平均值163；在三位同學(xué)的統(tǒng)計(jì)中，____________同學(xué)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果是正確的。答案(1)①選擇②A葡萄糖③酚紅紅色(2)①平板劃線稀釋每次劃線前要灼燒接種環(huán)；冷卻后從上一次劃線的末端開始劃線②乙解析(1)①據(jù)題表中的培養(yǎng)基的配方分析可知，A組培養(yǎng)基中的氮源為尿素，是篩選尿素分解菌的選擇培養(yǎng)基。B組培養(yǎng)基中的碳源是纖維素，是篩選纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基。②對土壤中分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行分離時，需要使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，故應(yīng)當(dāng)選擇A組培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中的碳源是葡萄糖。③尿素分解菌可以用酚紅指示劑進(jìn)行鑒定。尿素分解菌產(chǎn)生的脲酶能夠?qū)⒛蛩胤纸鉃榘倍筽H升高，使酚紅指示劑呈紅色。(2)①據(jù)圖分析可知，圖示表示平板劃線法接種，是把聚集的菌種逐步稀釋到培養(yǎng)基的表面，操作上應(yīng)注意每次劃線前要灼燒接種環(huán)；冷卻后從上一次劃線的末端開始劃線。②在進(jìn)行平板菌落計(jì)數(shù)時，應(yīng)選擇菌落數(shù)在30～300之間的平板，同時為減小誤差應(yīng)選擇至少3個或3個以上的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)并取平均值，在三位同學(xué)的統(tǒng)計(jì)中，乙同學(xué)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果是正確的。7．大腸桿菌是與我們?nèi)粘Ｉ盥?lián)系非常密切的細(xì)菌，請回答有關(guān)檢測飲用水中大腸桿菌的問題：(1)檢測飲用水中大腸桿菌的含量時，通常將樣品進(jìn)行一系列的梯度稀釋，將不同稀釋度的水樣用涂布器分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，然后記錄菌落數(shù)，這種方法稱為____________________。判斷下面所示的4個菌落分布圖中，不可能是用該方法得到的是______________。(2)用上述方法統(tǒng)計(jì)樣本中菌落數(shù)時是否需要設(shè)置對照組？____________________(填“需要”或“不需要”)，其原因是需要判斷培養(yǎng)基____________________，對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是將____________________的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置一段時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。(3)在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿進(jìn)行________________(填“消毒”或“滅菌”)處理；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和____________；靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使其內(nèi)蛋白質(zhì)變性，還能損傷它的____________結(jié)構(gòu)。(4)檢測大腸桿菌實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過________________處理才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。答案(1)稀釋涂布平板法D(2)需要是否被雜菌污染(或滅菌是否合格)未接種(3)滅菌消毒DNA(4)滅菌解析D中菌落分布情況為平板劃線法所得。為判斷培養(yǎng)基是否被雜菌污染(或滅菌是否合格)，本實(shí)驗(yàn)需要設(shè)置對照組?？蓪⑽唇臃N的培養(yǎng)基在適宜的溫度條件下放置一段時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生，若發(fā)現(xiàn)有菌落產(chǎn)生說明培養(yǎng)基已被污染。消毒是指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)；滅菌是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。對培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿要進(jìn)行滅菌處理，操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和用酒精消毒。8．某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機(jī)化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌(目的菌)。實(shí)驗(yàn)的主要步驟如下圖所示。請分析回答下列問題：(1)培養(yǎng)基中加入化合物A的目的是________________________________________________，