第八章配子與胚胎生物技術(精)

第八章配子與胚胎生物技術（一）概念（記憶，P253）胚胎移植embryotransfer,ET）：又稱借腹懷胎，受精卵移植。它是將體內（優(yōu)秀母畜）、外生產(chǎn)的哺乳動物早期胚胎（一般情況下所移植的不是受精卵，而是發(fā)育至多細胞、的胚胎），（如果是體外內胚胎用手術或非手術的方法取出，

桑棋胚或胚泡階段在顯微鏡性下檢出后），移植到同種的生理狀態(tài)相同的雌性動物生殖道內，使之繼續(xù)發(fā)育為正常個體的生物技術。提供胚胎的個體

-（dono）-（reciien） multpleovulationandembyotranser,MOET）,MOT技術，，P209-211）、試驗研究階段、實際應用階段、產(chǎn)業(yè)化階段（三）胚胎移植在畜牧業(yè)生產(chǎn)上的意義（、提高良種母畜繁殖力；、簡化良種引進方法；、降低種質資源保護利用；、加速育種進程；、利于防疫；在養(yǎng)豬業(yè)中，為了培育無特異性病原體

P256,記憶）（SPF）控制疾病一種施，用ET技術剖腹取仔的方法。、促進生殖生理理論與胚胎生物技術的發(fā)展二ET的生理學基礎與基本原則（一）生理學原理（書P212,記憶）母畜發(fā)后數(shù)甚至10余日內，生殖系統(tǒng)的變化相同，即在相同的時期，生理狀態(tài)一致，子宮內的環(huán)境相同。、早期胚胎的游離狀態(tài)游離狀態(tài)是胚胎采集、保存、培養(yǎng)和體外操作等重要理論基礎。、子宮對早期胚胎的免疫耐受性即胚胎移植不存在免疫問題。、胚胎遺傳物質的穩(wěn)定性84（二）ET遵循的基本原則P212-213,記憶）、胚胎移植前后所處環(huán)境的同一性1）供體和受體在分類學上的屬于同一物種；）胚胎發(fā)育階段與受體發(fā)情時間上的一致性；）胚胎發(fā)育階段與受體生殖道解剖位置的一致性。ET 3~8d內收集ET。、胚胎的質量。保證質量。、經(jīng)濟效益或科學價值。供胚應具獨特經(jīng)濟價值，而受體要求生產(chǎn)性能一般，但繁殖性能良好，環(huán)境適應能力強。（三）ET應具P213）、實驗室條件、技術條件、胚胎來源二、胚胎移植的技術（記憶）P214）1、供體母畜健康，較高育種價值，生殖機能正常，已證明對超排反應較好。、受體母畜健康、繁殖性能良好，體型較大。（二）受體母畜的同期發(fā)情（P214）同第四章第七節(jié)（三）供體母畜的超排（P214-216）1、超排方法（前已說）、提高超排效果的措施（選擇對象、規(guī)范化管理、優(yōu)質藥品）（四）供體母畜的配種（P216）適當?shù)臅r間，優(yōu)質精液對供體母畜進行輸精。使用密度大、 活率高的精液輸精，輸精次數(shù)2-3次，隔-10h（P216-219）定義：是利用特定的溶液和裝置將早期胚胎從母畜子宮或輸卵管中沖出并回收利用的過程。851、沖胚液的配制與滅菌：含5%犢牛血清的杜氏磷酸鹽緩沖液（ D-PBS）。供體在情第5-6d22 7d：8d4-8 6-）1毒握f2d后消黃（六）胎的查：是指 同時間胚胎量和量。：指應 BCD123P221-224）胚胎保存：指將胚胎在體內、體外正常發(fā)育溫度下，暫時儲存起來而不使其失去活力； 或將其保存于低溫或超低溫情況下，使細胞代謝處于新陳代謝和分裂速度減慢或停止，即使其發(fā)育處于暫時停頓狀態(tài)，一旦恢復正常溫度時，又能再繼續(xù)發(fā)育。胚胎冷凍保存意義：適應ET1-3）15-25℃（）5℃,目前認為5-1P224-225）、手術法移植（小動物和實驗動物）與沖胚同。、腹腔內窺鏡法移植（人）861P225））飼理苗 P225-226）（一）胚胎移植的實際效果主要取決于：、胚胎來源1 50-8%非 %。 10-0%0-0%3545%3040%2530%2030%五、ET主要存在的問題（熟悉，P226-227）、胚胎來源限制了T87、T、ET技術的發(fā)展前景（了解，P227）、牛羊的胚胎冷凍保存和移植技術已基本成熟，一些國家已進入產(chǎn)業(yè)化階段，近年來，我國畜牧業(yè)發(fā)達地區(qū)推廣速度很快，有潛在的開發(fā)前景；、胚胎冷凍保存是實現(xiàn)T使:（的、IVF技術的發(fā)展歷史（一）補充IVF概念（記憶）別 （invitoferiliaton,IVF）。 牛（）（P228）1951年，美籍華人張明覺和澳大利亞 Ausin發(fā)現(xiàn)精子aactn;20世紀60-80年代中期，紛紛得到了世界首例試管小鼠（ 19、（197、嬰197）,牛（9）、羊羊（198）、9）。系1987年生產(chǎn)了世界上數(shù)量最多的試管牛群，并于198年成功例蔣于13年利 IVF20世紀80年代中期以后IVF-ET技術在得到廣泛用的同時畜F技 IVF-ET技術，對可獲得3頭犢80年代后期，牛0PU(ovmpickup)OPU和IVF-ET結合已成為F不僅88二、IVF技術的基本操作程熟悉， P228-230)體外受精的主要內容包括：卵子的體外成nvitromatuatio,IVM)卵子和子體受精(nvitoferilzaton,IVF)受精養(yǎng)vitoculue,IVC)(養(yǎng)( P228-230)、卵母細胞的采集(1卵實驗動物或小型畜)(2卵主要來源)(3活體采卵優(yōu)良品種)擇卵胞體coocyecomlex,COC)A:3層以上卵丘細胞緊密包圍，細胞質均勻B:卵丘細胞低于3層，細胞質均勻C:無卵丘細胞包(裸卵，光熟 M1一(25C2的空(3培養(yǎng)時 22?24h而為30?36,豬為44。(4法( 50?200)。(二精(VF)、精子獲能處理：(1(三養(yǎng)(VC)、培養(yǎng)體系：復雜胚胎培養(yǎng)液：如TM199采CZB、SO、CRaa等、培養(yǎng)方法：微滴法3-10）CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)44其牛?h受精 18?。受精后?44h檢查受精卵的裂率其中48-72h更一培液換1/2）。89三、家畜IVF技術的發(fā)展現(xiàn)狀和存在的問題（ 231-232）（一）發(fā)展現(xiàn)狀P231）牛：卵裂率CR）80-90%囊）％:40-0%,BL冷凍80%,ET后產(chǎn)30-40%o平均每個卵巢獲A級卵母細胞10個，經(jīng)IVF可獲得-4BL,ET后產(chǎn)犢1-2頭。：CR:80-90%;BL:30-40%;L冷凍后能繼續(xù)發(fā)育率80%,ET后犢率。：CR:90%,BL:60-7%;ET30%。P232）、存在問題（）囊胚發(fā)育率低，細胞數(shù)少；（）產(chǎn)犢率低，胎兒出生重高。、發(fā)展方向（）深入研究卵母細胞成熟和胚胎發(fā)育的分子機理；（）加強腔前卵泡的培養(yǎng)研究，充分利用優(yōu)良母畜的遺傳資;（加強IVF與其它四、輔術（232-233）輔助受精技術：通過人為方法使精子和卵子完成受精過程， 克服精子不能穿過透明帶和卵黃膜的缺陷。目前有透明帶修飾和精子注入法， 由于兩種方法都需借助顯微操作儀來完成，故又稱顯微授精mironsmiaton）。（）帶法（）注（P233）直接注入到卵黃周隙或卵母細胞的胞質中，前者稱透明帶下注射（ subznalinseminatin,SU）后注（inraytplcsperminjcton,ICI）克lo），P）過精P23）P233）（二）胚胎分割的基本程序（P234）器具的準備—胚胎預處理—胚胎分割—分割胚的培養(yǎng)—分割胚的保存和移植90 P235）存在問題：1、初生重低、遺傳一致性、異常與畸形、同卵多胎的局限性二、單個卵裂球分離培養(yǎng)（P235-236）定義：把哺乳動物早期胚胎分離成單個卵裂球，再把卵裂球單獨培養(yǎng)為正常胚胎，然后移植給受體得到克隆后代。三、胚胎細胞核移植（P236-239）胚胎細胞核移植（embyoiccellnuclartranfer（，P） P23）：P236-239）、卵母細胞去核、供體核的準備和移植、卵裂球與卵子的融合、卵子的激活（電脈沖）、克隆胚的培養(yǎng)（三）胚胎克隆技術存在的問題（P238）、供體核數(shù)量的局限性；、受體卵子的質量；、核質關系的影響；、操作技術的影響。（四）胚胎克隆技術的發(fā)展遠景（P238-239）、比胚胎分割、卵裂球培養(yǎng)大大提高了生產(chǎn)遺傳同質動物的效率；91P239-240）體細胞核移植（somatccellnuceartranfer,SCNT）2大優(yōu)點：、供體核的數(shù)量可無限獲得；、通過對供體細胞的改造，加速家畜品種改良或生產(chǎn)轉基因動物。SCNTP23）：ESSCNT（二）SCNT

P239） P239）與胚胎細胞克隆基本相同。主要差別在于供體細胞的選擇（三）SCNT技術目前在問（ P240）、結果不穩(wěn)定，效率低（0.5-5）；、后代死率；、細胞質傳題；SCNT技術發(fā)遠（了解， P240）、大大提高畜牧業(yè)的生產(chǎn)效率；、加強瀕危動物的保護力度；、克隆與轉基因技術結合將大幅度提高轉基因效率，克服外源基因隨機整合帶來的消極影響；、進行治療性克隆。治療性克?。和ㄟ^體細胞核移植并培育到囊胚期，并從這個囊胚分離出 ES細胞，體外定向誘導分化成有特定功能的細胞，就能為需要的病人提供不具有排斥反應的細胞、 組織和器官。第四節(jié)轉基因技術哺乳動物轉基因技術（記憶P240是基因工程興生術。 DNA導入到受92 trnsencanimas）。 P241）（一）在基礎生物學中、已用于研究真核細胞的基因轉錄、表達和調控規(guī)律以及個體發(fā)育分子的調控規(guī)律；、借助轉基因基因模型作更深一步研究。（二）在基礎醫(yī)學研究中、制備動物疾病模型；、治愈人類的遺傳疾病。（三）在畜牧業(yè)中、改造家畜的基因，以達到人們所需目的如加快生長速度、 提高飼料報酬或增強抗病力等；、生產(chǎn)藥用或營養(yǎng)蛋白質；、作器官移植。二、哺乳動物轉基因技術的研究概況（三、哺乳動物轉基因技術的主要環(huán)節(jié)（（一）目標基因克隆和體外重組

P241-242）P242）、人工合成、互補DNA的克隆、DNA克?。ǘ┰椿膶В≒242-244）、顯微注射法、反轉錄病毒感染法P）法（24、載體法、核移法DNA整合、轉錄 P244-245）、外源基因的整合檢測、外源基因的轉錄檢測、外源基因的表達檢測（四）轉基因動物品系或品種的建立（ P245）第一代轉基因動物：半合子轉基因動物，外源基因僅在一條染色體上穩(wěn)定整合通過選種選配，將2 DNA93 P245）、效率低，成本高。、外源基因的隨機整合和異常表達、轉基因與動物保護的矛盾、轉基因動物釋放及生物安全五、哺乳動物轉基因技術的發(fā)展趨勢（ P245-246）、提高效率，降低成本、加強基因定點整合技術的研究、轉基因技術的發(fā)展將對人類產(chǎn)生深刻的影響第五節(jié)性別控制技術一、性別控制技術的發(fā)展概況動物性別控制技術定義通過年性別控的意（P246）1、可充分發(fā)揮受性別限制的生產(chǎn)性狀（如泌乳性狀）和受性別影響的生產(chǎn)性狀（如肉質生長速度等）的最大的經(jīng)濟效益；、可增強良種選種強度、加快育種進程；、克服牛ETP246）物理法時期（1925197）：離，泳等x和y1971198）：H-Y抗原（雄性特異的組織性相容性抗原）流動細胞儀分離法時期（1990）：最科學，最可靠二、哺乳動物的性別控制技術（P246-248）（一）XY、X和YX精子染色體的含量高于Y子染上特異SRY（Sex-detrminngreginofY-cromoome)序歹、X和Y精理論基：DNA含量XY,Hochst3332染色Y精 P2）:先用DNA特異性料對弱號傳遞計算；管X精荷收Y精子。94（二）早期胚胎性別鑒定（247-248）、核型分析法從早期胚胎中取出部分細胞，制備染色體標本，觀察性染色體類型。、SRY片段的R擴 SRY基因，能產(chǎn)生A片段的胚H-Y抗原）。三、性（P248）、流動細胞器分類法和-PR擴與F和SRY-PCR試齊IJ盒。第六節(jié)動物胚胎干細胞的分離和培養(yǎng)技術（自學）哺乳動物胚胎干細胞（mammaianemrynicstemcels）又稱ES或EK（eas&ka育全系。小性,即、ES細胞研究的意義P24）ESES P251-252）、根據(jù)細胞的分化特點建