農(nóng)藥殘留測定方法

關(guān)于農(nóng)藥殘留測定方法第1頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三第2頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三5.1氣相色譜法第3頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三第4頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三（1）氣相色譜法基本術(shù)語色譜圖：響應(yīng)信號(hào)—時(shí)間or響應(yīng)信號(hào)—載氣流出體積基線：僅載氣通過時(shí)檢測器所產(chǎn)生的響應(yīng)信號(hào)曲線色譜峰：色譜柱流出組分通過檢測器時(shí)所產(chǎn)生的響應(yīng)信號(hào)曲線峰底：峰起點(diǎn)與終點(diǎn)之間連接的直線峰高：色譜峰最高點(diǎn)到峰底的距離峰寬：峰兩側(cè)拐點(diǎn)處所作切線與峰底相交兩點(diǎn)間的距離半高峰寬：峰高的中點(diǎn)作平行于峰底的直線，此直線與峰兩側(cè)相交兩點(diǎn)間的距離峰面積（A）：峰與峰底之間的面積第5頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三（1）氣相色譜法基本術(shù)語死時(shí)間tr0：不被固定相吸附或溶解的組分（如空氣）從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰最大值之間的時(shí)間。保留時(shí)間tr：組分從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰最大值時(shí)所經(jīng)過的時(shí)間。調(diào)整保留時(shí)間t'r：某組分的保留時(shí)間扣除死時(shí)間。t'r=tr-tr0相對保留值α：兩組分調(diào)整保留時(shí)間的比值，通常作為衡量固定相選擇性的指標(biāo)，又稱選擇因子。

第6頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三例題由以上氣相色譜圖及數(shù)據(jù)，求組分1和2的調(diào)整保留時(shí)間t'r1和

t'r2，并計(jì)算選擇因子α的值。第7頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三（2）氣相色譜法的分配原理氣相色譜分析的關(guān)鍵是物質(zhì)的分離問題。怎樣實(shí)現(xiàn)兩物質(zhì)色譜峰的完全分離？第8頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三分配系數(shù)K分配比k，又稱為容量因子，組分在兩相間分配平衡時(shí)，固定相和流動(dòng)相中的組分的質(zhì)量比，即（2）氣相色譜法的分配原理第9頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三①塔板理論的假設(shè)在柱內(nèi)一小段長度H內(nèi)，組分可以在兩相間迅速達(dá)到平衡，這一小段柱長稱為理論塔板高度H；載氣進(jìn)入色譜柱不是連續(xù)進(jìn)行的，而是脈動(dòng)式，每次進(jìn)氣為一個(gè)塔板體積；所有組分開始時(shí)都集中于0號(hào)板上，而且組分的縱向擴(kuò)散可忽略；分配系數(shù)在所有塔板上是常數(shù)，與組分在某一塔板上的量無關(guān)。（3）塔板理論第10頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三第11頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三在N為8和9時(shí)，組分從具有5塊塔板的柱中洗脫出來達(dá)到最大濃度。流出曲線呈峰形，由于柱子的塔板數(shù)太少，峰形不對稱。當(dāng)塔板數(shù)n>50時(shí)，就可以得到對稱的峰形曲線。在GC中，一般n值很大，約103~106，因而流出曲線可趨于正態(tài)分布。第12頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三②理論塔板數(shù)塔板理論n越大或H越小，則柱效越高。第13頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三③理論塔板數(shù)與選擇因子、分離度的關(guān)系選擇因子α是固定液對兩個(gè)相鄰組分的調(diào)整保留時(shí)間之比。

α越大，兩組分越易分離。柱溫降低，

α增大，有利于分離和柱效率的提高。分離度R定義為兩個(gè)相鄰組分的保留值之差與其平均峰寬值之比。R值越大，分離越好。R=1時(shí)，兩峰重疊約2%。通常降低柱溫，增加柱長，使兩峰間距增大，R提高，但又會(huì)使峰加寬，因此需進(jìn)行最優(yōu)化選擇。（3）塔板理論第14頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三③理論塔板數(shù)與選擇因子、分離度的關(guān)系理論塔板數(shù)n與選擇因子α、分離度R的關(guān)系：（3）塔板理論第15頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三范弟姆特（VanDeemter）速率理論：塔板高度H-載氣線速度u關(guān)系H=A+B/u+Cu（4）速率理論及影響柱效率的因素渦流擴(kuò)散項(xiàng)分子擴(kuò)散項(xiàng)傳質(zhì)阻力項(xiàng)第16頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三柱長：柱長↑可使理論塔板數(shù)n↑，但峰寬↑，分析時(shí)間↑。柱徑：柱徑小利于減少組分在柱內(nèi)的分子擴(kuò)散，提高柱效，但柱徑太小不利操作。填充柱的柱內(nèi)徑2~3mm為宜。載氣及流速：H=A+B/u+Cu柱溫：需綜合考慮。農(nóng)藥多殘留等多組分的分析通常采用程序升溫的辦法解決。擔(dān)體：粒度細(xì)小、裝填均勻有利于減小渦流擴(kuò)散項(xiàng)、提高柱效。一般粒度直徑為柱內(nèi)徑的1/20~1/25為宜。氣化溫度：應(yīng)高于各組分最高沸點(diǎn)，保證瞬間氣化。樣品進(jìn)樣量：不宜過大，進(jìn)樣量超過柱負(fù)荷，會(huì)降低柱效，色譜峰變寬。（5）操作條件的選擇第17頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三GC檢測器檢測器是測量柱后流出物質(zhì)成分和濃度變化的裝置，通過化學(xué)和物理作用，將流出物質(zhì)成分和濃度的變化轉(zhuǎn)換為電信號(hào)。第18頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三熱導(dǎo)檢測器（TCD）濃度型檢測器通用型檢測器，對有機(jī)物和無機(jī)物都有響應(yīng)不破壞樣品，可收集餾分缺點(diǎn)：靈敏度較低第19頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三原理：載氣中混入其他氣態(tài)物質(zhì)時(shí)熱導(dǎo)率發(fā)生變化。載氣中無組分時(shí)，平衡電橋，無電壓信號(hào)輸出，記錄儀走直線（基線）。載氣攜帶試樣組分時(shí)，電橋失去平衡，有電壓信號(hào)輸出，記錄儀記錄組分濃度隨時(shí)間變化的峰狀圖形。第20頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三氫火焰離子化檢測器（FID）質(zhì)量型檢測器選擇型檢測器，對大多數(shù)有機(jī)化合物有響應(yīng)，對永久性氣體及H2S、H2O、NH3、CS2等在火焰中不電離的無機(jī)物無響應(yīng)靈敏度比熱導(dǎo)檢測器高幾個(gè)數(shù)量級(jí)，可檢測ppb（10-3ppm）級(jí)的痕量物質(zhì)缺點(diǎn)：破壞樣品，對無機(jī)物無響應(yīng)第21頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三原理：色譜柱流出物中可燃燒有機(jī)物在氫-氧火焰中發(fā)生電離。有機(jī)物CnHm在火焰中發(fā)生化學(xué)電離：化學(xué)電離產(chǎn)生的正離子（CHO+與H3O+）和電子（e）在外加恒定直流電場作用下分別向兩極定向移動(dòng)而產(chǎn)生微電流（10-7~10-14A）。微電流∝單位時(shí)間進(jìn)入離子室的被測組分質(zhì)量。第22頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三定性與定量分析定性分析的主要依據(jù)——保留值利用已知物直接對照定性如果樣品比較復(fù)雜，可在未知混合物中加入已知純物質(zhì)，通過未知物中峰的變化，來確定未知物中成分。第23頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三定性與定量分析定量分析的依據(jù)——色譜峰的峰高或峰面積外標(biāo)法：直接對比法和標(biāo)準(zhǔn)曲線法例：已知敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)樣品數(shù)據(jù)如下表所示，另實(shí)驗(yàn)測得敵敵畏的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=2304.0x-7.477，r=0.9999，分別用直接對比法和標(biāo)準(zhǔn)曲線法，計(jì)算樣品中的敵敵畏含量。敵敵畏含量（mg/L）峰面積標(biāo)準(zhǔn)物0.050110.723樣品x150.509第24頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三定性與定量分析定量分析的依據(jù)——在一定操作條件下，分析組分的質(zhì)量（mi）或其在載氣中的濃度（Ci）與檢測器的響應(yīng)信號(hào)（色譜峰的峰高h(yuǎn)i或峰面積Ai）成正比：mi=f'i·Ai

定量校正因子f'i=mi/Ai（單位面積的組分含量）由于f'i受操作條件影響較大，測定比較困難，因此在實(shí)際工作中都使用相對校正因子fi：常用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：熱導(dǎo)池是苯，氫火焰是正庚烷。第25頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三定性與定量分析定量分析內(nèi)標(biāo)法：在試樣中加入能與所有組分完全分離的已知量的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，根據(jù)被測物和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量及其在色譜圖上相應(yīng)的峰面積求出某組分的含量。內(nèi)標(biāo)法要求：內(nèi)標(biāo)物為樣品中不存在，且內(nèi)標(biāo)與其他組分可完全分離；內(nèi)標(biāo)峰與被測組分峰要靠近，內(nèi)標(biāo)量也要接近被測組分含量，最少取三位有效數(shù)字。內(nèi)標(biāo)法優(yōu)點(diǎn)是，定量準(zhǔn)確，可以抵消操作條件變化所產(chǎn)生的誤差；彌補(bǔ)了歸一化法使用限制上的不足。缺點(diǎn)是，每次分析需要用分析天平準(zhǔn)確稱量，不太方便。第26頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三例題有一試樣含甲酸、乙酸、丙酸及不少水、苯等物質(zhì)，稱取此試樣1.055g，以環(huán)己酮作內(nèi)標(biāo)，稱取0.1907g環(huán)己酮加到試樣中混合均勻后，吸取3μL進(jìn)樣，得到色譜圖。從色譜圖上測得的各組分峰面積及已知的fi如下表所示，求甲酸、乙酸、丙酸的百分含量。甲酸乙酸環(huán)己酮丙酸峰面積14.872.613342.4相對校正因子fi3.831.781.001.07第27頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三定性與定量分析定量分析歸一化法：樣品中的所有組分全部流出色譜柱，并在色譜圖上都出現(xiàn)色譜峰，可以通過各組分的校正因子和峰面積計(jì)算各組分的含量。第28頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三例題已知大米中多種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留色譜圖，經(jīng)測定各組分的值和峰面積如下表所示，用歸一化法計(jì)算在大米的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留中各組分所占的比例。敵敵畏樂果甲基對硫磷殺螟硫磷對硫磷三唑磷Ai342142787725047.3fi0.840.741.001.051.281.36第29頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三5.2高效液相色譜法第30頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三輸液系統(tǒng)流動(dòng)相在轉(zhuǎn)入貯液器前必須過濾和脫氣梯度洗脫裝置：將兩種或兩種以上的不同極性的溶劑進(jìn)行混合，作為流動(dòng)相使用。進(jìn)樣系統(tǒng)手動(dòng)六通進(jìn)樣閥：10、20、50、100μL定量環(huán)自動(dòng)進(jìn)樣器第31頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三分離系統(tǒng)——色譜儀的核心部分保護(hù)柱起到保護(hù)分析柱作用，固體微粒、污染物首先被保護(hù)住擋住。檢測系統(tǒng)將物理或化學(xué)特性轉(zhuǎn)變?yōu)榭商幚淼碾娦盘?hào)控制和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)由計(jì)算機(jī)和數(shù)據(jù)處理軟件組成第32頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三HPLC常用檢測器紫外-可見光檢測器（UV-VIS）濃度型的選擇性檢測器液相色譜應(yīng)用最廣泛的檢測器具有紫外吸收能力的物質(zhì)缺點(diǎn)：對紫外無吸收的物質(zhì)無響應(yīng)，對紫外有吸收的溶劑（如苯）不能用作流動(dòng)相。第33頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三紫外-可見光檢測器（UV-VIS）光源：氘燈（紫外光源）195~400nm

鎢燈（可見光源）400~850nm透鏡：將光源射來的光束變?yōu)槠叫泄庹诠獍澹簩⑵叫泄庾優(yōu)榧?xì)小平行光束測量池：通流動(dòng)相+檢測樣品參比池：通參比品（多為空氣）濾光片：濾去非單色光光電倍增管：接收信號(hào)第34頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三5.3薄層色譜法薄層色譜法（Thin-LayerChromatography,TLC）TLC是在平面上進(jìn)行分離的一種方法，又叫平面色譜法，采用液體作為流動(dòng)相，屬于液相色譜的范疇。按其固定相的性質(zhì)和分離機(jī)理可分為：吸附薄層法分配薄層法離子交換薄層法凝膠薄層法應(yīng)用較為廣泛第35頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三吸附薄層法的原理將吸附劑（固定相）均勻地涂布在玻璃、金屬等載板上形成薄層，在薄層的一端點(diǎn)上試樣溶液，置于展開室中，將薄層的下端浸入合適的展開劑（流動(dòng)相），借毛細(xì)作用使溶劑上升。試樣組分不斷地被吸附劑吸附，又被溶劑溶解解吸，隨展開劑向前移動(dòng)，由于吸附劑對不同組分有不同的吸附能力，展開劑也有不同的解吸能力，因此在流動(dòng)相向前移動(dòng)的過程中，不同組分移動(dòng)的距離不同，從而得到分離。薄層分離是被分離物質(zhì)（樣品）、吸附劑（固定相）及展開劑（流動(dòng)相）共同作用的結(jié)果。第36頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三薄層板的制備玻璃板需光潔，否則吸附劑易脫落，大小由需求決定。軟板：吸附劑直接干法涂層硬板：吸附劑加黏合劑后濕法涂層吸附劑（固定相）：90%以上的分離都可應(yīng)用硅膠常用黏合劑：煅石膏（CaSO4·1/2H2O）機(jī)械強(qiáng)度差，易脫落，但不易腐蝕羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）機(jī)械強(qiáng)度好，不易脫落，但易腐蝕第37頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三點(diǎn)樣在薄層色譜技術(shù)中，點(diǎn)樣是造成定量誤差的主要來源。樣品溶液的制備：將樣品中的殘留農(nóng)藥定量地提取出來，配制成一定濃度的樣品溶液，常用溶劑為甲醇及乙醇。點(diǎn)樣后必須將溶劑全部除去后再進(jìn)行展開。點(diǎn)樣技術(shù)點(diǎn)狀點(diǎn)樣和帶狀點(diǎn)樣，點(diǎn)樣體積和點(diǎn)樣量不宜過大，否則容易造成遠(yuǎn)點(diǎn)“超載”，展開劑產(chǎn)生“繞行”現(xiàn)象，使斑點(diǎn)拖尾或重疊。點(diǎn)樣基線距底邊2.0cm，樣點(diǎn)直徑2~4mm，點(diǎn)間距離1.5~2.0cm第38頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三展開點(diǎn)樣后的薄層需置密閉并加有展開劑的展開室中進(jìn)行展開。展開劑滲過薄層板的固定相，借毛細(xì)管作用力的影響，樣品與展開劑及固定相之間相互作用，使樣品中各成分沿展開劑流動(dòng)的方向分開。第39頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三第40頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三定性分析斑點(diǎn)的比移值（Rf）比移值是溶質(zhì)移動(dòng)距離與流動(dòng)相移動(dòng)距離之比，是薄層色譜的基本定性參數(shù)。根據(jù)圖中所給數(shù)據(jù)，分別計(jì)算物質(zhì)A和物質(zhì)B的Rf值。Rf=0，Rf=1分別表示？第41頁，講稿共47頁，2023年5月2日，星期三定量分析間接定量（洗脫測定法）取下斑點(diǎn)→用溶劑洗脫化合物→收集洗脫液→分析測定。直接定量（原位薄層掃描