染色體的分帶技術(shù)

關(guān)于染色體的分帶技術(shù)第1頁，講稿共11頁，2023年5月2日，星期三目的要求

了解染色體C帶、G帶制備的基本原理，掌握染色體C帶、G帶的染色技術(shù)。第2頁，講稿共11頁，2023年5月2日，星期三C帶顯示的實(shí)驗(yàn)原理DNA分子經(jīng)酸、堿、鹽處理可以發(fā)生不同的變化，酸處理可以使DNA分子脫嘌呤，堿處理可以使DNA變性及溶解，2×SSC溶液處理可以使DNA骨架斷裂并使片斷溶解。在C帶顯示過程中，染色體臂的DNA被酸、堿、鹽選擇性地破壞了，著色較淺，而結(jié)構(gòu)性異染色質(zhì)區(qū)哉DNA結(jié)構(gòu)緊密，從而保護(hù)了C帶區(qū)的異染色質(zhì)免受酸、堿、鹽的破壞，使其容易著色，從而產(chǎn)生C帶。第3頁，講稿共11頁，2023年5月2日，星期三實(shí)驗(yàn)用品1．器材：顯微鏡、恒溫水浴箱、載玻片、染色缸等；2．試劑：0.2MHCl、5%Ba(OH)2、2×SSC溶液、Giemsa染液、1/15M磷酸緩沖液等。3．材料：小鼠染色體標(biāo)本第4頁，講稿共11頁，2023年5月2日，星期三方法與步驟取老化一周的染色體標(biāo)本,室溫條件下用0.2MHCl處理30分鐘；DW沖洗三次后，轉(zhuǎn)入50℃5%Ba(OH)2中保溫10-15分鐘；自來水沖洗3-5分鐘，再用DW充分分沖洗掉玻片上附著的Ba(OH)2；將標(biāo)本放到65℃2×SSC處理60分鐘，DW沖洗，空氣干燥；Giemsa染色10分鐘，沖洗，鏡檢。第5頁，講稿共11頁，2023年5月2日，星期三結(jié)果顯示第6頁，講稿共11頁，2023年5月2日，星期三G帶顯示實(shí)驗(yàn)原理由于構(gòu)成染色體的DNA一級序列的差異，導(dǎo)致與之結(jié)合的蛋白質(zhì)的狀態(tài)也有所不同。如果染色體上某一區(qū)域DNA為重復(fù)序列，轉(zhuǎn)錄活性低，與之結(jié)合的蛋白質(zhì)也較穩(wěn)定，因此較利于染料的積累，從而顯出暗帶。相反，若某一區(qū)域的DNA富含轉(zhuǎn)錄活性的結(jié)構(gòu)基因，包裝它們的蛋白質(zhì)也較松散，著色較淺，顯明帶。第7頁，講稿共11頁，2023年5月2日，星期三實(shí)驗(yàn)用品1．器材：顯微鏡、恒溫水浴箱、載玻片、染色缸等；2．試劑：0.25%胰蛋白酶、Giemsa染液、磷酸緩沖液等。3．材料：小鼠染色體標(biāo)本第8頁，講稿共11頁，2023年5月2日，星期三實(shí)驗(yàn)步驟將老化七天的染色體標(biāo)本放入60℃溫箱中烤片2小時(shí)以上；取出后放入0.25%的胰蛋白酶溶液中作用3---15秒；取出后，GKN溶液漂冼15秒，Giemsa染色15分鐘，沖洗，鏡檢。第9頁，講稿共11頁，2023年5月2日，星期三實(shí)驗(yàn)結(jié)