放線菌、霉菌的形態(tài)觀察及微生物的分離純化

關(guān)于放線菌、霉菌的形態(tài)觀察及微生物的分離純化第1頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察放線菌、霉菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)特征學(xué)習(xí)掌握霉菌染色的基本方法

基本掌握細(xì)菌、放線菌、酵母菌、霉菌菌落形態(tài)特征實(shí)驗(yàn)（一）放線菌、霉菌的形態(tài)觀察第2頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三二、實(shí)驗(yàn)原理

1、放線菌：放線菌是介于細(xì)菌與絲狀真菌之間而又接近于細(xì)菌的一類絲狀原核生物，因菌落呈放射狀而得名。放線菌的菌落在培養(yǎng)基上著生牢固，不易被接種針挑取，由于孢子的存在，常使菌落表面呈粉末狀。它和細(xì)菌單染色一樣，可用石炭酸復(fù)紅和呂氏美藍(lán)等染料著色后，在顯微鏡下觀察它們的形態(tài)。放線菌是由不同長短的纖細(xì)的菌絲所組成的單細(xì)胞菌絲體，菌絲內(nèi)無隔膜，菌絲體分為兩部分，即潛入培養(yǎng)基中的營養(yǎng)菌絲（基內(nèi)菌絲）和有營養(yǎng)菌絲向上生長的氣生菌絲，有些氣生菌絲分化成各種孢子絲，呈螺旋狀、波浪形或分枝狀等，著生形式有叢生、互生和輪生三種。孢子的表面光滑或粗糙，圓或橢圓和干形。孢子有各種顏色。這些形態(tài)特點(diǎn)都是鑒別放線菌的重要依據(jù)。第3頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三

⑴營養(yǎng)菌絲：又叫初級菌絲體或一級菌絲體，匍匐生長于培養(yǎng)基內(nèi)，主要生理功能是吸收營養(yǎng)物，故亦稱基內(nèi)菌絲。營養(yǎng)菌絲一般無隔膜，直徑0.2—0.8μ，但長度相差很大，短的小于100μ，長的可達(dá)600μ以上，有的無色素，有的產(chǎn)生黃、橙、紅、紫、蘭、綠、褐、黑等不同色素，若是水溶性的色素，還可透入培養(yǎng)基內(nèi)，將培養(yǎng)基染上相應(yīng)的顏色，如果是非水溶性（脂溶性）色素，則使菌落呈現(xiàn)相應(yīng)的顏色，因此，色素是鑒定菌種的重要依據(jù)。⑵氣生菌絲：又稱二級菌絲體。營養(yǎng)菌絲體發(fā)育到一定時期，長出培養(yǎng)基外并伸向空間的菌絲為氣生菌絲。⑶孢子絲：當(dāng)氣生菌絲體發(fā)育到一定程度，其上分化出可形成孢子的菌絲即孢子絲，又名產(chǎn)孢絲或繁殖絲。

放線菌最突出的特性之一是產(chǎn)生大量的、種類繁多的抗生素，根據(jù)估計，全世界共發(fā)現(xiàn)4000多種抗生素，其中絕大部分是由放線菌產(chǎn)生的。

第4頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三第5頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三2、霉菌：

霉菌是一些“絲狀真菌”的統(tǒng)稱，不是分類學(xué)上的名詞。凡是在基質(zhì)上長成毛狀、棉絮狀或蜘蛛網(wǎng)狀的絲狀真菌統(tǒng)稱霉菌。霉菌形態(tài)比細(xì)菌、放線菌復(fù)雜，個體比較大，具有分枝的菌絲體和分化的繁殖器官。因此，在觀察是要注意菌絲的直徑大小，菌絲體有無隔膜，營養(yǎng)菌絲有無假根，無性繁殖或有性繁殖時形成的孢子是哪一種，孢子是怎樣著生的。由于霉菌的菌絲較粗大，而且孢子容易飛散，如將菌體置于水中容易變形，故觀察時狀不用水浸法制片，而將菌體置于乳酸石炭酸棉蘭染液中，使細(xì)胞不易干燥，并有殺菌作用。

第6頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三第7頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三第8頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三根霉第9頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三三、實(shí)驗(yàn)材料放線菌和真菌培養(yǎng)物

1.放線菌培養(yǎng)物：鏈霉菌四天插片培養(yǎng)物。2.黑曲霉培養(yǎng)物。

3.各種真菌示范片。顯微鏡、載玻片、接種環(huán)、解剖針、解剖刀、酒精燈、鑷子等。乳酸石炭酸棉蘭染液、碘液、酒精、蒸餾水等第10頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三四、實(shí)驗(yàn)步驟觀察放線菌氣生菌絲和基內(nèi)菌絲的區(qū)別

取插片一片，直接在顯微鏡下進(jìn)行觀察，注意分界面兩側(cè)菌絲形態(tài)的差異插片法培養(yǎng)放線菌第11頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三

2、霉菌：在載玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉蘭→用解剖針取少許霉菌于染色液中→挑開菌絲→蓋上蓋玻片片→鏡檢。

第12頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三觀察黑曲霉菌絲分隔情況和分生孢子著生情況（著重辨認(rèn)分生孢子梗、足細(xì)胞和分生孢子）：第13頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三觀察根霉菌絲情況和子囊孢子情況（著重辨認(rèn)孢子囊、包囊梗、假根）：第14頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄所觀察到的放線菌基內(nèi)菌絲和氣生菌絲的差別繪制青霉（40x）、黑曲霉（40x）的形態(tài)，注明各部分名稱。1.為何要用乳酸石炭酸棉蘭染液對霉菌進(jìn)行染色?第15頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三實(shí)驗(yàn)(二)、從土壤中稀釋分離微生物一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)微生物稀釋平板計數(shù)及劃線分離技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)原理:采用適宜(選擇)培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，或加入某種抑制劑有利于目標(biāo)微生物的生長，從而分離獲得目標(biāo)微生物的純培養(yǎng)：常用稀釋平板分離法和劃線分離法在固體培養(yǎng)基上形成單個菌落依據(jù)一個單細(xì)胞在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)后可以長成一菌落從而推算樣品中含有多少細(xì)菌或真菌的活菌數(shù)目第16頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三

從土壤中稀釋分離微生物的方法如下：（一）土壤懸液制備準(zhǔn)備1瓶土壤懸液：稱10克土壤放入帶玻璃珠的90ml瓶裝無菌水中，手搖振蕩(10-20min)，使土樣分散。三、實(shí)驗(yàn)步驟：第17頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三（二）懸液稀釋：方法見下圖：第18頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三（三）倒固體瓊脂培養(yǎng)基平板：分離細(xì)菌的同學(xué)取一瓶牛肉膏培養(yǎng)基（200ml／瓶）熔化后加制霉菌素1ml后倒平板。分離真菌的同學(xué)取一瓶馬丁-孟加拉紅培養(yǎng)基（200ml／瓶）熔化后冷至50℃后加鏈霉素2ml倒平板。第19頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三（四）懸液涂布(演示):無菌操作(從稀至濃將菌液涂布均勻)采用10－2，10－3，10

－4稀釋液涂布馬?。霞永t平板；采用10－3，10－4，10－5稀釋液涂布牛肉膏蛋白胨平板,每人用剩下的1個平板做劃線分離，從三角瓶中取土壤懸液作劃線分離（演示）（五）培養(yǎng)：每個同學(xué)把平板用報紙包好（每個平板方向一致），寫上班級和姓名，皿底朝上，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)(溫度?!)。（六）檢查結(jié)果第20頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三平板涂布簡單易行，但易造成機(jī)械損傷第21頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三劃線分離方式第22頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三結(jié)果分析:1.我所涂平板種類：

（牛肉膏或馬丁氏）

2.計數(shù)：牛肉膏平板取單菌落數(shù)目在30～300個左右的稀釋度來計數(shù)，馬丁氏平板取單菌落數(shù)目在10～100個左右的稀釋度來計數(shù)

3.我所計數(shù)的平板稀釋度是：

單菌落數(shù)目：

、

、

。

4.計算：活菌數(shù)目/每克土壤＝

（計算過程）＝

個/每克土壤

5.對你和同伴的細(xì)菌及真菌計數(shù)結(jié)果進(jìn)行分析第23頁，講稿共25頁，2023年5月2日，星期三實(shí)驗(yàn)報告從土壤中稀釋分離微生物的原理、方法、步驟。2．思考題(1)為什么融化后的培養(yǎng)基要冷卻至45℃左右才能倒平板?(2)要使平板菌落計數(shù)準(zhǔn)確，需要掌握哪幾個關(guān)鍵?為什么?(3)試比較平板菌落計數(shù)法和顯微鏡下直接計數(shù)