我國北方不同地區(qū)益母草不同部位水蘇堿含量的比較

我國北方不同地區(qū)益母草不同部位水蘇堿含量的比較【摘要】目的探討不同產(chǎn)地益母草不同部位水蘇堿含量的差異。方法采用野外收集和實驗室分析相結(jié)合的方法。水蘇堿的含量采用薄層色譜掃描法測定。結(jié)果水蘇堿質(zhì)量百分濃度線性范圍為2～20μg，峰面積回歸方程為：y=5381x-7，r=2(n=6)，平均回收率為%，RSD為%(n=8)。結(jié)論我國北方不同地區(qū)所產(chǎn)益母草中水蘇堿差異顯著，其中以北京、河南和山東產(chǎn)益母草品質(zhì)較好。益母草不同部位水蘇堿含量高低順序為：繁殖部位葉莖。

【關(guān)鍵詞】益母草；水蘇堿；不同地區(qū)；不同部位

Abstract：ObjectiveTofindoutthedifferencesofstachydrinecontentinLeonurusjaponicusHoutt.fromdifferentregionsanditsdifferentparts.MethodsFieldinvestigationandlaboratoryanalysisweremadeonLeonurusjaponicusHoutt.ThestachydrinecontentwasdeterminedbyTLC-scanning.ResultsThecalibrationcurveofstachydrinewaslinearovertherangeof1～20μg.Theregressionequationwasy=5381x-7，r=2(n=6).TheaveragerecoveryandRSDwere%and%(n=8)respectively.ConclusionThereexistedsignificantdifferencesinthestachydrinecontentfromdifferentregions.Amongthem,LeonurusjaponicusHoutt.fromBeijing,HenanandShandongarebetter.ThedifferencesofstachydrinecontentinthedifferentpartofLeonurusjaponicusHoutt.issignificant,andthatinprogenitivepartisbetterthaninleaf,whichinthestemisthelest.

Keywords：LeonurusjaponicusHoutt.;Stachydrine;Differentregions;Differentparts

益母草LeonurusjaponicusHoutt.，為唇形科益母草屬一年生或二年生草本植物，傳統(tǒng)上以開花的地上部分入藥，具有活血調(diào)經(jīng)，利尿消腫等作用，臨床應(yīng)用非常廣泛［1］。益母草的主要有效成分是生物堿，而水蘇堿的含量占其所含的十幾種生物堿總含量的80％左右，2005年版《中國藥典》也以水蘇堿含量來控制益母草的質(zhì)量。

益母草屬植物全球分布約23種，我國12種和2個變種，廣泛分布于全國各地［2］，據(jù)了解，因益母草為全國廣布種，各地均就近收購本地產(chǎn)益母草入藥，而對于藥材是否因產(chǎn)地不同而具有品質(zhì)差異僅有1999年的一篇報道［3］，且測的是總生物堿的含量，由于當時方法的限制，測得的總生物堿的含量較低。

另外，益母草屬于地上部分用藥的藥材，當年生益母草只長葉片，第二年開始長直立的莖，并且開花結(jié)果，對于益母草不同部位水蘇堿含量的差異目前尚無報道。

本文采用薄層掃描的方法［1］，樣品提取測定過程中葉綠素對水蘇堿的含量沒有影響，方法簡單準確，用此方法測定了全國12個省市益母草不同部位的水蘇堿含量，討論了產(chǎn)地對藥材質(zhì)量的影響。

1材料與方法

器材

供試藥材自2001年起，北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源研究室開始進行常用中藥材藥用植物種質(zhì)資源的調(diào)查、收集、評價和保存，收集的材料包括種子、無性繁殖材料、藥材質(zhì)量分析樣品、植物標本、遺傳多樣性分析樣品、土壤分析樣品等，其中益母草在三十余種收集種中屬于重點收集品種，截至200608，調(diào)查范圍遍及全國22個省市自治區(qū)的100多個縣，有73人次參加了外業(yè)工作，其中收集到益母草3個種的26份種質(zhì)資源?？紤]到樣品的平行性，本文只采用2005-07底至8月初采到的野生藥材。

收集到的益母草藥材運回到實驗室后，統(tǒng)一凈制編號，并且分成葉、莖、繁殖部位3個部分，在55℃烘箱中烘干，然后用粉碎機打成細粉，過60目篩，置干燥器中備用。

儀器與試劑FW-100粉碎機，DHG-9140A型電熱恒溫鼓風(fēng)箱，BP211D型分析天平，KQ-500DE型數(shù)控超聲清洗器，HH-6型數(shù)顯恒溫水浴箱，RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，SHB-3型真空泵。日本島津CS-900型薄層掃描儀，玻璃噴霧瓶，定量毛細管，硅膠G板(青島海洋化工廠分廠)，展開缸。

試劑鹽酸水蘇堿(中國藥品生物制品檢定所，批號110712-200508)，95%乙醇，正丁醇，醋酸乙酯，鹽酸，三氯化鐵，堿式硝酸鉍，碘化鉀，冰醋酸，娃哈哈純凈水。

稀碘化鉍鉀試液取堿式硝酸鉍g,加冰醋酸10ml與水40ml溶解后，即得。臨用前取5ml,加碘化鉀溶液5ml,再加冰醋酸20ml。用水稀釋至100ml，即得。

碘化鉀溶試液取碘化鉀g，加水使溶解成100ml,即得。本液應(yīng)臨用新制。

方法

供試品溶液的制備干品取本品粉末約1g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加乙醇50ml,加熱回流h，放冷，濾過，濾渣及其容器用50ml乙醇分次洗滌，濾過，合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，蒸干溶劑，殘渣加乙醇溶解，轉(zhuǎn)移自10ml離心管中，靜置一夜，取上清液做供試品液。

對照品溶液的制備另精密稱取在105℃干燥3h的鹽酸水蘇堿對照品，加乙醇制成每毫升含2mg的溶液，作為對照品液。

薄層色譜條件照薄層色譜法實驗，精密吸取供試品液8μl,對照品液3μl與8μl，分別交叉點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯正丁醇鹽酸為展開劑，展開，取出，涼干，在105℃加熱15min，放冷，噴以稀碘化鉍鉀試液-1%三氯化鐵乙醇溶液混合溶液至斑點顯色清晰，涼干，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定。

掃描對以上Rf值相同的斑點照薄層色譜法進行掃描，波長：λ=510nm,測定供試品吸光度積分值與對照品吸光度積分值，計算，即得。

方法學(xué)考察樣品精密度RSD為%(n=8)，色斑穩(wěn)定性2h內(nèi)RSD分別為%(n=8)，線性范圍為2～20μg,峰面積回歸方程為:y=5381x-7，r=2(n=6)，加樣回收率平均為%,RSD=%(n=5)。

2結(jié)果

益母草水蘇堿含量測定表明，各地區(qū)產(chǎn)益母草中水蘇堿含量有很大差別，其中以北京、山東、河南產(chǎn)水蘇堿含量最高，其次是甘肅、陜西和黑龍江部分地區(qū)，而東北地區(qū)產(chǎn)水蘇堿含量偏低。在采到的山東和黑龍江各3個地區(qū)的益母草水蘇堿含量相近，同時說明益母草的地域性強。

表112省市益母草不同部位水蘇堿含量

從測得的12份不同種源益母草不同部位的水蘇堿含量中可以看出，益母草生殖器官花和種子中含的水蘇堿最高，其次是營養(yǎng)器官葉片，莖作為輸導(dǎo)組織，其內(nèi)所含有效成分水蘇堿最少。其高低順序為：繁殖部位葉莖。

經(jīng)方差分析得出，不同地區(qū)益母草水蘇堿含量差異達到顯著水平，益母草不同部位的水蘇堿含量差異達到極顯著水平。

表2不同產(chǎn)區(qū)和不同部位對益母草水蘇堿含量影響的方差分析

*sig.＜表示差異顯著**sig.＜表示差異極顯著

3討論

本文采用薄層分析的方法，測定了我國北方12個省市益母草中水蘇堿的含量，經(jīng)spss分析檢驗后得出，不同產(chǎn)地的益母草水蘇堿含量差異很大。由于本文所收集益母草都在2005年7月底到8月初，采集時間一致，加工、測定方法相同，而水蘇堿又比較穩(wěn)定，所以可以得出，我國北方益母草藥材質(zhì)量差異顯著。建議藥廠在選用藥材時應(yīng)考慮到產(chǎn)地的因素，選用質(zhì)量穩(wěn)定可控的生藥，才能達到更好的臨床應(yīng)用效果。關(guān)于不同地區(qū)益母草的藥理作用差異，有待進一步試驗驗證。

另外，益母草屬于地上部分用藥的藥材，當年生益母草只長葉片，第二年開始長直立的莖，并且開花結(jié)果，益母草不同部位水蘇堿含量高低順序為：繁殖部位葉莖。益母草其它成分含量在不同部位的差異還需通過對大量樣品中多指標成分的定量測定和指紋圖譜的定性測定來進行深入分