二維核磁共振譜

二維核磁共振譜第1頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月2D－NMR1971年Jeener首先提出2D－NMR思想:

具有兩個時間變量的nmr1976年Ernst小組成功實現(xiàn)了2D－NMR實驗后，確定了二維核磁共振的理論基礎20世紀80年代：2D－NMR加速發(fā)展用途：解析復雜有機分子最有力的工具；溶液中分子的三維空間結(jié)構(gòu)的測定；分子動態(tài)過程的研究：多維NMR技術(shù)：研究生物大分子（蛋白質(zhì)、核酸等）最有效的方法第2頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第3頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第4頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月2二維譜實驗A.原則上二維譜可以用概念上不同的三種實驗獲得,(如圖4.1),(1).頻率域?qū)嶒?frequency-frequency)(2).混合時域(frequency-time)實驗(3).時域(time-time)實驗.它是獲得二維譜的主要方法,以兩個獨立的時間變量進行一系列實驗,得到S(t1,t2),經(jīng)過兩次傅立葉變換得到二維譜S(ω1,ω2).通常所指的2D-NMR均是時間域二維實驗

第5頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月圖4.12D-NMR三種獲得方式第6頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月B)二維核磁共振時間分割第7頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月二維譜實驗中，為確定所需的兩個獨立的時間變量，要用特種技術(shù)－時間分割。即把整個時間按其物理意義分割成四個區(qū)間。（如圖所示）

（1）預備期：預備期在時間軸上通常是一個較長的時期，使核自旋體系回復對平衡狀態(tài)，在預備期末加一個或多個射頻脈沖，以產(chǎn)生所需要的單量子或多量子相干。（2）發(fā)展期：在t1開始時由一個脈沖或幾個脈沖使體系激發(fā)，此時間系控制磁化強度運動，并根據(jù)各種不同的化學環(huán)境的不同進動頻率對它們的橫向磁化矢量作出標識。（3）混合期：在此期間通過相干或極化的傳遞，建立檢測條件。

4）檢測期：在此期間檢測作為t2函數(shù)的各種橫向矢量的FID的變化以及它的初始相及幅度受到t1函數(shù)的調(diào)制。

與t2軸對應的ω2（ν軸），通常是頻率軸，與t1軸對應的ω1是什么，取決于在發(fā)展是何種過程。

第8頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月相干(ccherence):是描述自旋體系狀態(tài)的波函數(shù)之間關系的一種物理量。，它通常沒有簡單的模型，它是橫向磁化及相位的量。（不僅包括⊿m=1,而且包括⊿m=0,⊿m=2狀態(tài)之間關系)它可以通過射頻脈沖的作用傳遞。C.實驗過程：用固定時間增量⊿t1依次遞增t1進行系列實驗，反復疊加，因t2時間檢測的信號S(t2)的振幅或相位受到s(t1)的調(diào)制，則接收的信號不僅與t2有關，還與t1有關，每改變一個t1，記錄S(t2),因此得到分別以時間變量t1,t2為行列排列數(shù)據(jù)矩陣，即在檢測期獲得一組FID信號，組成二維時間信號S(t1,t2)。因t1,t2是兩個獨立時間變量，可以分別對它們進行傅立葉變換，一次對t2,一次對t1,兩次傅立葉變換的結(jié)果，可以得到兩個頻率變量函數(shù)S(ω1,ω2)。如圖第9頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第10頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第11頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月3．二維譜的表達方式

（1）堆積圖(stackedplot).堆積圖的優(yōu)點是直觀,具有立體感.缺點是難以確定吸收峰的頻率。大峰后面可能隱藏小峰，而且耗時較長。(2)等高線（Contourplot）等高線圖類似于等高線地圖，這種圖的優(yōu)點是容易獲得頻率定量數(shù)據(jù)，作圖快。缺點是低強度的峰可能漏畫。目前化學位移相關譜廣泛采用等高線。第12頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月圖4.3堆積圖等高線第13頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月4．二維譜峰的命名（1）交叉峰（crosspeak）:出現(xiàn)在ω1≠ω2處，（即非對角線上）。從峰的位置關系可以判斷哪些峰之間有偶合關系，從而得到哪些核之間有偶合關系，交叉峰是二維譜中最有用的部分。（2）對角峰（Autopeak）:位于對角線（ω1＝ω2）上的峰，稱為對角峰。對角峰在F1和F2軸的投影。第14頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月5．二維譜的分類二維譜可分為三類：1）J分辨譜（Jresolvedspectroscopy）J分辨譜亦稱J譜或者δ－J譜。它把化學位移和自旋偶合的作用分辨開來，包括異核和同核J譜。2）化學位移相關譜(chemicalshiftcorrelationspectroscopy)化學位移相關譜也稱δ－δ譜，是二維譜的核心，通常所指的二維譜就是化學位移相關譜。包括同核化學位移相關譜，異核化學位移相關譜，NOESY和化學交換。3）多量子譜（multiplequantumspectroscopy）用脈沖序列可以檢測出多量子躍遷，得到多量子二維譜。第15頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第16頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月4．2化學位移相關譜（CorrelatedSpectroscopy,COSY）

二維化學位移相關譜包括同核化學位移相關譜（Homonuclearcorrelation）1）通過化學鍵：COSY,TOCSY,2D-INADEQUATE。2）通過空間：NOESY,ROESY。異核化學位移相關譜（Heteronuclearcorrelation）強調(diào)大的偶合常數(shù)：1H-13C–COSY強調(diào)小的偶合常數(shù)，壓制大的偶合常數(shù)：COLOC(遠程1H-13C–COSY)

第17頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月4.2.1同核化學位移相關譜一。COSY(Correlatedspectroscopy)

所謂的COSY系指同一自旋體系里質(zhì)子之間的偶合相關。1H-1H-COSY可以1H-1H之間通過成鍵作用的相關信息，類似于一維譜同核去偶，可提供全部1H-1H之間的關聯(lián)。因此1H-1H-COSY是歸屬譜線，推導結(jié)構(gòu)及確定結(jié)構(gòu)的有力工具。第18頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月1。COSY－90。的基本脈沖序列包括兩個基本脈沖在此脈沖作用下，根據(jù)發(fā)展期t1的不同，自旋體系的各個不同的躍遷之間產(chǎn)生磁化傳遞，通過同核偶合建立同種核共振頻率間連接圖。此圖的二個軸都是1H的δ在ω1＝ω2的對角線上可以找出一維1H譜相對應譜峰信號。通過交叉峰分別作垂線及水平線與對角線相交，即可以找到相應偶合的氫核。因此從一張同核位移相關譜可找出所有偶合體系，即等于一整套雙照射實驗的譜圖。第19頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第20頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月

COSYof2－丁烯酸乙酯第21頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第22頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月2。COSY-45?；久}沖：90。－t1-45。

-ACQ.在COSY-90的基礎上，將第二脈沖改變成45。許多的天然產(chǎn)物的直接連接躍遷譜峰在對角線附近，導致譜線相互重疊，不易解析。采用COSY-45。由于大大限制了多重峰內(nèi)間接躍遷，重點反映多重峰間的直接躍遷，減少了平行躍遷間的磁化轉(zhuǎn)移強度，即消除了對角線附近的交叉峰，使對角線附近清晰。第23頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第24頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第25頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第26頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第27頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第28頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月3.相敏COSY譜COSY譜，由于譜線信號色散分量作用，相鄰的峰容易相互部分重疊，交叉峰的精細結(jié)構(gòu)看不清楚，不便讀出偶合常數(shù)。相敏COSY譜的相位很復雜，相位調(diào)節(jié)的質(zhì)量直接影響偶合常數(shù)的檢測即信號靈敏度。在COSY譜中對角線與交叉峰相位總是相差90。。相敏COSY譜中，磁化轉(zhuǎn)移地結(jié)果產(chǎn)生一對交叉峰相位相差180。以AX體系為例。其交叉峰為純吸收線形，對角線為色散型。譜圖黃色圓圈為正峰，紅色為負峰。第29頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第30頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月譜圖正負峰以不同的顏色表示（下圖藍色圓圈為正峰，紅色為負峰）。也可以用實心表示正峰，空心表示負峰。其交叉峰為純吸收線形，對角線為色散型從相敏COSY可以直接讀出J值。這里需要辨認主動偶合和被動偶合。所謂的主動偶合就是相關交叉峰直接的偶合。其余為被動偶合。主動偶合的每一對峰總是一正一負。被動偶合的交叉峰是相位相同（同為正或同為負）第31頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第32頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月AMX第33頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月與COSY有關的實驗自旋回波COSY(SECSY),雙量子相干譜（DQC-COSY）,同核接力相干譜（RCT）.有興趣的同學，可以閱讀有關的書籍。第34頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月二.天然豐度的雙量子13C譜INDEQUATE(13C-13C-COSY)這是二維碳骨架直接測定法，是確定碳原子連接順序的實驗，一種雙量子相干技術(shù)。是一種13C-13C化學位移相關譜。在質(zhì)子去偶的13C譜中，除了13C信號外，還有比它弱200倍的13C-13C偶合衛(wèi)星峰，13C-13C偶合含有豐富的分子結(jié)構(gòu)和構(gòu)型的信息。由于碳是組成分子骨架，它更能直接反映化學鍵的特征與取代情況。第35頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月但是由于13C天然豐度僅僅為1.1%，出現(xiàn)13C-13C偶合的幾率為0。01％，13C-13C偶合引起的衛(wèi)線通常離13C強峰只有20Hz左右，其強度又僅僅是13C強峰的1/200，這種弱峰往往出現(xiàn)在強13C峰的腋部，加上旋轉(zhuǎn)邊帶，質(zhì)子去偶不完全，微量雜質(zhì)的影響等因素，使1JC-C測試非常困難。利用雙量子躍遷的相位特性可以壓住強線，突出衛(wèi)線求出JC-C,并根據(jù)Jc-c確定其相鄰的碳。一個碳原子最多可以有四個碳與之相連，利用雙量子躍遷二維技術(shù)測量偶合碳的雙量子躍遷的頻率。13C-13C同核偶合構(gòu)成二核體系（AX,AB）兩個偶合的13C核能產(chǎn)生雙量子躍遷，孤立的碳則不能。第36頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月abcdefkabafibchfhfecdciedmhkhm第37頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第38頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月它只有一個雙量子躍遷，其頻率正比于兩個偶合的13C核的化學位移之和的平均值。所以如果兩個碳具有相同的雙量子躍遷頻率，即可以判斷，它們是相鄰。在INADEQUATE譜圖中F1與F2分別代表雙量子躍遷頻率和13C的衛(wèi)線，依次代表雙量子和單量子躍遷頻率。譜圖中一個軸是13C的化學位移，一個為雙量子躍遷頻率，其頻率正比于兩個偶合的13C核的化學位移之和的平均值。因此譜圖中F1=2F2的斜線兩側(cè)對稱分布著兩個相連的13C原子信號，表示碳偶合對的單量子平均頻率與雙量子頻率間的關系，水平連線表明一對偶合碳具有相同的雙量子躍遷頻率，可以判斷它們是直接相連的碳。依此類推可以找出化合物中所有13C原子連接順序。第39頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第40頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第41頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第42頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月18-->11-->16-->15-->17-->13.

第43頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月三。NOESY（NuclearOverhauserEffectSpectroscopy)核間磁化傳遞是通過非相干作用傳遞，這種傳遞是靠交叉馳豫和化學交換來進行。即樣品間偶極－偶極傳遞的。它的基本脈沖是：π/2-t1-π/2-tm-π/2-ACQNOESY的基本序列在COSY序列的基礎上，加一個固定延遲和第三脈沖，以檢測NOE和化學交換的信息。混合時間tm是NOESY實驗的關鍵參數(shù)，tm的選擇對檢測化學交換或NOESY效果有很大影響。選擇合適的tm,可在最后一個脈沖，產(chǎn)生最大的交換，或建立最大的NOE.NOESY的譜圖特征類似于COSY譜，一維譜中出現(xiàn)出現(xiàn)NOE的兩個核在二維譜顯示交叉峰。NOESY可以在一張譜圖上描繪出分子之間的空間關系。第44頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第45頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月COSYOFPBFNOESYofPBF

第46頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第47頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月COSY第48頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月Codeine的NOESY6,7359101211第49頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月Codeine在高場放大的NOESY13’131818’161717’1114第50頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月8-7,12

7-18,18'

3-5,10

5-11,16,18'

9-10,17,17'

10-16

11-18,16,14,18'

18-13,18'

16-14,17

13-14,17,17'

13'-17,17'

17-17‘TableofNOEs第51頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第52頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第53頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第54頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月相敏NOESY與COSY類似，NOESY也適用于相敏形式。在這種相敏譜上，分辨率高，容易辨認信號峰，而且譜線比非相敏形式的譜線狹窄，從而限制了假峰的產(chǎn)生，有效增加了靈敏度。第55頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月phase-sensitiveNOESYofstrychnine.

第56頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月四。TOCSY

TOCSY脈沖序列：是一種旋轉(zhuǎn)坐標系實驗（自旋鎖定實驗），自旋鎖定是把COSY序列中的第二脈沖以及NOESY序列中最后兩個脈沖（包括混合時間），用一個長射頻脈沖取代，把自旋沿著旋轉(zhuǎn)坐標系的一個鎖定，在這種情況下不存在化學位移差，通過發(fā)生標量偶合的磁化轉(zhuǎn)移，導致了全部相關。TOCSY也有稱之為HOHAHA.可以提供自旋系統(tǒng)中偶合關聯(lián)信息。第57頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月HOHAHA是通過交叉極化產(chǎn)生Hartmann-Hahn能量轉(zhuǎn)移，從而觀察較低旋磁比核一種方法。它是通過增加混合時間，使一個質(zhì)子的磁化矢量將重新分布到同一偶合網(wǎng)絡的所有質(zhì)子，得到多次的接力信息。由于增加混合時間，靈敏度降低，為了解決這一問題，采用高分辨相敏方法，，交叉峰和對角峰都是吸收型，特別適用于具有獨立自旋體系的大分子，可進一步判斷證實COSY中因信號嚴重重疊而造成的不確定結(jié)果。選擇適當?shù)膮?shù)可通過一次實驗得到獨立自旋體系所有質(zhì)子相關信息。2d-HOHAHA的特點是：通過改變t1測定，將同核Hartmann-Hahn躍遷信號沿化學位移二維展開，并用一個脈沖序列測得多重接力COSY。在復雜偶合體系1H信號歸屬于解析中，而且在肽類，核苷，蛋白質(zhì)等發(fā)揮巨大的作用。第58頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月質(zhì)子a,b,candd構(gòu)成自旋體系既一個偶合網(wǎng)絡系統(tǒng),CH3CH2構(gòu)成另外一個網(wǎng)絡系統(tǒng)，這是兩個獨立的自旋體系

，COSYspectrum,CH2a與CH2b.相關而在

TOCSYspectrum,它不僅顯示與質(zhì)子b相關，而且也與itwouldalsoshowcorrelationsto兩個（CH2）candd.相關。

第59頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第60頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第61頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月TOCSYofcodeineCOSYTOCSY391012111816,13,14,13’183,163,53,163,953-103,103,5第62頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月

TableofTOCSYpeaks:

('indicatesthemoreupfieldofgeminalCH2protons)8-->7

3-->5,9,10,16

5-->9,10,b11,16

9-->10,16,OH,H2O

10-->16,OH,H2O

11-->16,18,18'

18-->16,18'

16-->18'

13-->13',17,17'

13'-->17,17'

17-->17'第63頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月ROESY(CAMELSPIN)若采用一個弱自旋鎖場，則在旋轉(zhuǎn)坐標體系中產(chǎn)生交叉馳豫NOE,得到ROESY譜（RotatingNOE),即旋轉(zhuǎn)坐標系中的NOE增強譜。又稱之CAMELSPIN譜。它類似于NOESY，能提供空間距離相近的核的相關信息。它的基本序列與TOCSY相似，但采用低功率自旋鎖場，可由連續(xù)波照射或一系列小脈沖角脈沖組成混合脈沖?；拘蛄校害?2-t1-(CW)X-ACQ第64頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月ROESY與NOESY區(qū)別：NOESY在分子量大和小的分子體系中，靈敏度很高。小分子的快速運動，產(chǎn)生NOE,大分子的或降溫產(chǎn)生負NOE.而中等分子（300～1500）或特殊形狀分子，在NOESY中得不到交叉峰。而ROESY交叉峰與分子量的大小無關。由于ROESY是低的功率實驗，可以檢測到小的相互作用。第65頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月4.3異核化學位移相關譜-HeteronuclearCorrelationofchemicalshift

所謂異核化學位移相關譜是兩個不同核的頻率通過標量偶合建立起來的相關譜.應用最廣泛的是1H-13CCOSY.

1.1H-13CCOSY.常規(guī)的1H-13CCOSY是指直接相連的C-H之間的偶合相關（1JCH）。第66頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月基本脈沖：該實驗的關鍵是選擇一個適合的混合期，以使13C核和氫核的信息充分轉(zhuǎn)移，即選擇合適的⊿1⊿2。第67頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月1H-13C-COSY譜圖中F2為13C化學位移，F(xiàn)1為1H化學位移，沒有對角峰，其交叉峰表明C-H偶合的信息。解析時，可以從一已知的氫核信號，根據(jù)相關關系，即可找到與之相連的13C信號，反之亦然?？梢詮淖V圖中得到1JC-H的結(jié)構(gòu)信息。第68頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月13C-1HCOSY2-丁烯酸乙酯第69頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月ADCB第70頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月7.78.157.47.5111.6120.6122.6127第71頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第72頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月2.COLOC(CorrelationSpectroscopyvialongrangecoupling)和1H-13C-COSY序列基本一樣，只是在COLOC譜中的⊿1，⊿2對應于遠程C-H偶合常數(shù)nJ(2JCH,3JCH),而不是1JCH.得到一鍵以上的CH偶合相關信息，建立C-C之間的關聯(lián)，可以躍過N,O等其它官能團。成為推導結(jié)構(gòu)歸屬信號，解決由于屏蔽效應難以解決的季碳歸屬的有力工具。由于該方法能夠?qū)⒓咎己拖噜徧嫉馁|(zhì)子相關，對于確定C-C連接非常有效。第73頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月常規(guī)的1H-13C-COSY沒有季碳和其它質(zhì)子的相關峰。COLOC譜圖類似于C-H-COSY,兩個坐標（F1,F2)是化學位移，交叉峰也類似于C-H-COSY，只是出現(xiàn)了小偶合的相關峰。COLOC最大的缺點是相關峰中包含所有的1JCH信號。解析譜圖時一定要對照C-H-COSY。確定1JCH,分辨出2JCH,3JCH.第74頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月7.78.157.47.5127122.6120.6111.6ADCB第75頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月7.78.157.47.57.78.157.47.5111.6120.6122.6127.07.7(d,1H,J=9.0,H-1),8.15(d,1H,j=8.8Hz,H-4)7.5(dd,1H,J=9.0,0.8Hz,H-3),7.4(dd,1H,8.8,1.2Hz,H-2)111.6(d,C-1),122.6(d,C-2),127.0(d,c-3),120.6(d,c-4)156.2(s,c-5),124.2(s.c-6)第76頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月4。4多量子躍遷譜常見的核磁是選擇⊿m=±1的單量子躍遷。在偶極相互作用及其影響下，自旋體系的能級不再由單一態(tài)波函數(shù)，而變成混合態(tài)，可能出現(xiàn)⊿m=0，±2，±3。。。的躍遷，稱之為多量子躍遷。多量子躍遷指的是不滿足選擇⊿m=±1躍遷。其中m表示體系的總磁量子數(shù)，它們按照⊿m＝±2,±±3。。。稱為n量子躍遷，而不問具體含幾個躍遷。第77頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月產(chǎn)生的多量子躍遷不能直接觀察到，要把它變回可觀察的單量子躍遷才能進行檢測，得到S(t1,t2)后經(jīng)過傅立葉變換得到頻率譜。常見的多量子躍遷譜有HMQC,HMBC.與1H-13CCOSY,COLOC譜相似。由于多量子相干轉(zhuǎn)移，使其靈敏度大大提高。對于測定時間相等的條件下所需的樣品量為：INADEQUATE200mg(400mM)1H-13CCOSY5~10mg(20mM)COLOC5~10mg(20mM)HMQC1mg(5mM)HMBC2~3mg(7mM)因此這兩種方法為分子量大的微量樣品的測定提供了廣闊的前景。第78頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月1。HMQC

(1-bondCHcorrelation)

1H檢測的異核多量子相干譜

HMQC是將1H信號的振幅及相位分別依13C化學位移及1H間的同核化學偶合信息調(diào)制，并通過直接檢測調(diào)制后的1H信號，獲得13C-1H化學位移相關數(shù)據(jù)。它所提供的信息及譜圖與1H-13CCOSY完全相同。及圖上的兩個坐標分別是1H,13C化學位移，直接相連的13C與1H將在對應的13C化學位移與1H化學位移的交點處給出相關信號。不能得到季碳的結(jié)構(gòu)信息。第79頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第80頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第81頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月HMQCofCodeine13CAssignment6.611386.512075.713335.312854.89194.266103.856123.359113.0&2.320182.640162.6&2.446132.443142.0&1.83617第82頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月HSQC-DEPT這個實驗有一個變化，顯示CH2與CH,CH3有不同的相位。CH2顯示負的相位，在下圖中用紅色表示。在Codeine中的三個CH2很容易辨認。這種技術(shù)稱之為HSQC-DEPTspectrum.

第83頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第84頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月HSQC-DEPTofCodeine第85頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月HMBC

(multiple-bondCHcorrelation)HMBC是一種測定遠程1H-13C相關的十分靈敏的方法，它給出遠程1H-13C相關信息。特別是適用于檢測與甲基有遠程偶合的碳（2JCH,3JCH).其基本原理是：通過1H檢測異核多量子相干調(diào)制，選擇性地增加某些碳信號的靈敏度，是孤立的自旋體系相關聯(lián)，而組成一個整體分子。對于質(zhì)子相隔兩個，三個鍵（2JCH,3JCH）的碳，提供了有效的相關信息，抑制了直接偶合的1JCH信號強度是譜圖簡化。該法適用于具有眾多甲基地天然產(chǎn)物，如三萜化合物，甾醇化合物的結(jié)構(gòu)鑒定。HMBC可高靈敏度地檢測13C-1H遠程偶合（2JCH,3JCH），因此可得到有關季碳的結(jié)構(gòu)信息及其被雜原子切斷地1H偶合系統(tǒng)之間的結(jié)構(gòu)信息。第86頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第87頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第88頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月第89頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月紅線表示芳環(huán)H-8對C-1和C-6(三鍵偶合)和一個弱偶合C-2,（二鍵偶合.）。H-7,與C-2andC-4,（三鍵偶合）.第90頁，課件共97頁，創(chuàng)作于2023年2月在此圖中，顯示的是脂肪氫與芳環(huán)碳的偶合相關。在左下角顯示甲氧基與C-2的三鍵偶合。表明芳環(huán)碳上連接甲氧基。H-18兩個質(zhì)子與C-7和C-4相關（三鍵偶合），與C-6相關（兩鍵偶合）。H-17t