吸附實(shí)驗(yàn)初稿

/大孔吸附樹(shù)脂是以苯乙烯和丙酸酯為單體,加入乙烯苯為交聯(lián)劑,甲苯、二甲苯為致孔劑，它們相互交聯(lián)聚合形成了多孔骨架結(jié)構(gòu)。樹(shù)脂一般為白色的球狀顆粒，粒度為20～60目，是一類含離子交換集團(tuán)的交聯(lián)聚合物，它的理化性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于酸、堿及有機(jī)溶劑,不受無(wú)機(jī)鹽類及強(qiáng)離子低分子化合物的影響.樹(shù)脂吸附作用是依靠它和被吸附的分子(吸附質(zhì))之間的范德華引力,通過(guò)它巨大的比表面進(jìn)行物理吸附而工作,使有機(jī)化合物根據(jù)有吸附力及其分子量大小可以經(jīng)一定溶劑洗脫分開(kāi)而達(dá)到分離、純化、除雜、濃縮等不同目的。大孔吸附樹(shù)脂對(duì)巴戟天多糖提取液脫色的靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)曲線的制作和最大吸收波長(zhǎng)的確定脫色效果及最大吸收波長(zhǎng)的確定?巴戟天多糖樣品溶液(50mg/ｍL）的配制：準(zhǔn)確稱取巴戟天多糖粗品５。０１11g，置于1０0mL容量瓶中，用純凈水溶解,超聲助溶.待完全溶解后定容,搖勻備用。?濕法裝柱：將大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹(shù)脂D94１用少量乙醇置于燒杯中浸泡，隨后裝入直徑約1cm的層析柱（柱體積BV=30mL),再用８0％～90%乙醇洗至流出液至無(wú)色,后用純水洗至無(wú)醇味.過(guò)柱:取約3０ｍL上述樣品液緩慢倒入層析柱中,棄除前30mL流出液(水），收集剩下的多糖流出液。全波長(zhǎng)掃描:將流出液與樣品液在200nｍ~800nm波長(zhǎng)下進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，比較脫色前后紫外吸收?qǐng)D譜的變化，確定最大吸收波長(zhǎng)［23].標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備[24］?干燥葡萄糖:取標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖，于真空干燥器中干燥約４h后,儲(chǔ)存與棕色試劑瓶中,置于干燥皿中備用。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：準(zhǔn)確稱取干燥后的分析純葡萄糖４8mg,置于１00mL容量瓶中，用蒸餾水定容，配置成0.４8mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液.從此標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液分別吸?。?。0ｍL于2mL、5mＬ、１0ｍL、20mL、２5mL、５0mＬ和100mL容量瓶中,用蒸餾水定容.分別從定容后的葡萄糖溶液和原標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液中吸取1。0ｍL溶液于具塞試管中,依次加入０。5mL5%苯酚溶液，搖勻，再加入２.0mＬ濃硫酸，迅速搖勻,置于恒溫90℃水浴中加熱１０min，冷卻至室溫，于490nm測(cè)定吸光度.以蒸餾水同法操作加等量5%苯酚和濃硫酸做空白。以葡萄糖溶液的糖含量（ｍg／mL）為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.（3)牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備［27］?準(zhǔn)確稱取牛血清蛋白（BＳA）20.3mｇ，置于１0０mＬ容量瓶中,用蒸餾水定容,配置成0．20３ｍｇ/ｍL的BSA溶液。從此標(biāo)準(zhǔn)ＢＳA溶液分別吸取1.０ｍL于2ｍＬ、5mL、１0mＬ、20mＬ、25mL、50mＬ和1０0mL容量瓶中，用蒸餾水定容。分別從定容后的ＢSＡ溶液和原標(biāo)準(zhǔn)ＢSA溶液中吸取1。0mL溶液于具塞試管中，依次加入5．0mＬ考馬斯亮藍(lán)儲(chǔ)備液，搖勻，常溫下放置5min后,于590nm測(cè)定吸光度.以蒸餾水同法操作加等量考馬斯亮藍(lán)液做空白。后以BＳA溶液濃度(mg／mL）為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（4)糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備(采用間羥聯(lián)苯法）溶液配制:精密稱取半乳糖醛酸對(duì)照品，加蒸餾水制成濃度為1.0mg／mL的溶液，即得對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。量取1、2、4、６、1０mL對(duì)照品儲(chǔ)備溶液定容至１00mL，配制對(duì)照品系列濃度溶液.稱取巴戟多糖適量至250mL容量瓶中,加蒸餾水至刻度，搖勻,即得供試品溶液。以新鮮配制的０.５％氫氧化鈉溶液,配制0.15％間羥聯(lián)苯溶液。用濃硫酸配制0.0125ｍol／L四硼酸鈉—硫酸溶液.檢測(cè)波長(zhǎng):取對(duì)照品溶液與供試品溶液各1mL,置于冰水浴中，分別加入四硼酸鈉－硫酸溶液5mL，搖勻，取出,沸水?。祄in,冰水浴冷卻，加入間羥聯(lián)苯溶液100μL，搖勻,室溫靜置30miｎ.以蒸餾水同法制備空白對(duì)照溶液。用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在200～60０nｍ處掃描，觀察最大吸收峰。結(jié)果在5２０nｍ處有最大吸收.標(biāo)準(zhǔn)曲線：取系列對(duì)照品溶液，按（2）項(xiàng)下操作顯色,并以蒸餾水作空白對(duì)照，在５2０nｍ下測(cè)定吸收度值.以濃度（mg／mＬ)為橫坐標(biāo),以吸收度值為縱坐標(biāo),制作標(biāo)準(zhǔn)曲線.不同樹(shù)脂種類對(duì)脫色效果的影響實(shí)驗(yàn)儀器與材料主要試劑?巴戟天多糖提取物，95%乙醇,葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品(ＡR),苯酚（AR），濃硫酸（AR,)主要儀器 調(diào)速多用振蕩器，雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì),水浴鍋樹(shù)脂 DM１３0,Ｄ101,Ｄ１5２,Ｄ9４1，AＢ－8表2-14種樹(shù)脂的物理參數(shù)Taｂ.2-1Ｐhyｓicａｌpaｒametersof４resｉnｓ樹(shù)脂型號(hào)樹(shù)脂類型外觀極性粒徑(ｍm）/粒度%(mm）比表面積（ｍ2／ｇ)DM1３0大孔吸附樹(shù)脂乳白色弱極性0。3-１。２５≥3３0Ｄ１01大孔吸附樹(shù)脂乳白色非極性０。3－1．25≥４0０D１52離子交換樹(shù)脂乳白色0.3—１。2５Ｄ94１離子交換樹(shù)脂乳黃色0。3－１.２5實(shí)驗(yàn)方法樹(shù)脂的預(yù)處理?分別取適量DＭ1３0、D101、D1５２、D９41裝柱，用９5％乙醇洗脫至流出液無(wú)色澄清。取經(jīng)上步經(jīng)處理的樹(shù)脂于蒸發(fā)皿中，于40℃水浴中蒸干乙醇,備用。不同大孔樹(shù)脂的飽和吸附 準(zhǔn)確稱取經(jīng)除表面水分的４種大孔樹(shù)脂0。5g分別置于25mL錐形瓶中，加入10mＬ4。9685mｇ／mL巴戟天多糖溶液，用玻璃紙封口，將錐形瓶置于搖床振搖(110r/ｍin,25℃）,1０h樹(shù)脂飽和吸附后取出,過(guò)濾[29］。顯色與檢測(cè) (１)脫色率的測(cè)定取適量巴戟天多糖溶液和上述經(jīng)四種樹(shù)脂吸附的多糖溶液，以蒸餾水為空白，于３９0nｍ波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度,計(jì)算樹(shù)脂脫色率［30]。?其中，檢測(cè)波長(zhǎng)為390nm；Ａ脫色前:巴戟天多糖溶液（４。9685mｇ/mL）吸光度；A脫色后:多糖溶液經(jīng)樹(shù)脂脫色后的吸光度。(2)多糖保留率的測(cè)定 分別準(zhǔn)確量取1.0mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液（０．048mg/mＬ）、巴戟天多糖溶液(4．９６８5mｇ／mL）、四種樹(shù)脂脫色后的多糖溶液于具塞試管中，加入0．5mL5％苯酚溶液，搖勻,再加入2.0mＬ濃硫酸，迅速搖勻，置于恒溫90℃水浴中加熱１0mｉn，冷卻至室溫，于490nm測(cè)定吸光度。以蒸餾水同法操作加等量5%苯酚和濃硫酸做空白。計(jì)算多糖損失率.多糖保留率（％）=1—多糖損失率（%)?其中,檢測(cè)波長(zhǎng)為４90ｎm；ｃ：多糖液濃度（mg/mＬ);A：吸光度。.（3）脫蛋白率分別準(zhǔn)確吸取經(jīng)不同樹(shù)脂多糖流出液、標(biāo)準(zhǔn)牛血清蛋白溶液(０.04０６mg/mL）１．0mL于具塞試管中，加入5．0ｍL考馬斯亮藍(lán)儲(chǔ)備液,搖勻，常溫下放置5ｍin后，于590nｍ測(cè)定吸光度。以蒸餾水同法操作加等量考馬斯亮藍(lán)液做空白。計(jì)算脫蛋白率。 其中，吸光度Ａ值均在波長(zhǎng)５９0nm下測(cè)定；A脫色前：多糖溶液經(jīng)考馬斯亮藍(lán)顯色前的吸光度值；A脫色后:多糖溶液經(jīng)樹(shù)脂脫色后經(jīng)考馬斯亮藍(lán)顯色的吸光度值.（4）糖醛酸保留率的測(cè)定(采用間羥聯(lián)苯法）分別取適量脫色前已知含量供試品溶液、經(jīng)不同樹(shù)脂脫色后的巴戟天多糖溶液，，520nｍ處測(cè)定吸收度值，計(jì)算加樣回收率.（５）成品得率真空干燥后，計(jì)算脫色脫蛋白前后的干物,計(jì)算得率樹(shù)脂不同用量對(duì)脫色效果的影響實(shí)驗(yàn)儀器與材料?主要試劑：巴戟天多糖提取物，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品(AR),苯酚（ＡR）,濃硫酸（AＲ，）樹(shù)脂（根據(jù)上一步確定的最佳樹(shù)脂） 主要儀器:調(diào)速多用振蕩器,紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，水浴鍋實(shí)驗(yàn)方法不同用量的樹(shù)脂的飽和吸附[3５]?準(zhǔn)確稱取經(jīng)除表面水分的D９4１離子交換樹(shù)脂０．50ｇ、1．0０g、２．０0g、3。00ｇ、4.０0ｇ、５．00g、6．０0g、7。０0g分別置于2５mL錐形瓶中,加入２0mL2.5mｇ/ｍＬ巴戟天多糖溶液，用玻璃紙封口，將錐形瓶置于搖床振搖（110r/mｉn,25℃),10h樹(shù)脂飽和吸附后取出,過(guò)濾。顯色與檢測(cè)(１)脫色率取適量巴戟天多糖溶液和上述經(jīng)8種不同用量樹(shù)脂吸附的多糖溶液，以蒸餾水為空白，于390nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度,計(jì)算脫色率，繪制曲線。其中,檢測(cè)波長(zhǎng)為３90nｍ;A脫色前:巴戟天多糖溶液（2.5mg/ｍＬ)吸光度；Ａ脫色后：多糖溶液經(jīng)樹(shù)脂脫色后的吸光度。（2）多糖保留率分別準(zhǔn)確量取1．0mＬ葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液(0.０48mg/mL）、巴戟天多糖溶液(2.５ｍg/mL）、不同用量樹(shù)脂脫色后的多糖溶液于具塞試管中,加入0。5ｍL５%苯酚溶液,搖勻，再加入2．0mL濃硫酸，迅速搖勻,置于恒溫90℃水浴中加熱10ｍｉｎ，冷卻至室溫，于4９0nm測(cè)定吸光度。以蒸餾水同法操作加等量5％苯酚和濃硫酸做空白.計(jì)算多糖損失率，繪制曲線。多糖保留率(％）＝1—多糖損失率（%） 其中，檢測(cè)波長(zhǎng)為490nm；ｃ：多糖液濃度（mg/mL)；A:吸光度。（３）脫蛋白率分別準(zhǔn)確吸取不同量樹(shù)脂吸附后的多糖流出液、標(biāo)準(zhǔn)牛血清蛋白溶液（0.0406ｍg/mL）1．0mL于具塞試管中，加入5。０ｍL考馬斯亮藍(lán)儲(chǔ)備液,搖勻,常溫下放置5min后，于590nｍ測(cè)定吸光度.以蒸餾水同法操作加等量考馬斯亮藍(lán)液做空白。計(jì)算脫蛋白率。?其中，吸光度Ａ值均在波長(zhǎng)５90nm下測(cè)定;A脫色前：多糖溶液經(jīng)考馬斯亮藍(lán)顯色前的吸光度值；A脫色后：多糖溶液經(jīng)樹(shù)脂脫色后經(jīng)考馬斯亮藍(lán)顯色的吸光度值。（4）糖醛酸保留率的測(cè)定(采用間羥聯(lián)苯法）分別準(zhǔn)確量取1.０mL巴戟天多糖溶液（2.5ｍg/mL)、不同用量樹(shù)脂脫色后的多糖溶液,５２0nｍ處測(cè)定吸收度值，計(jì)算加樣回收率。(5)成品得率真空干燥后,計(jì)算脫色脫蛋白前后的干物,計(jì)算得率23３不同溫度對(duì)脫色效果的影響實(shí)驗(yàn)儀器與材料?主要試劑:巴戟天多糖提取物,葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品(AR),苯酚（AＲ)，濃硫酸(AＲ） 主要儀器：可見(jiàn)分光光度計(jì),水浴鍋?樹(shù)脂：(經(jīng)以上實(shí)驗(yàn)確定的最佳樹(shù)脂）實(shí)驗(yàn)方法不同溫度下樹(shù)脂的飽和吸附［36] 準(zhǔn)確稱?。阜萁?jīng)除表面水分的D9４1離子交換樹(shù)脂５.00ｇ分別置于2５mL錐形瓶中，加入20mL2.５mｇ/mL巴戟天多糖溶液,用玻璃紙封口，將錐形瓶分別置于2５℃、30℃、35℃、4０℃、45℃、50℃、５５℃和60℃，10h樹(shù)脂飽和吸附后取出，過(guò)濾。顯色與檢測(cè)(1）脫色率取適量巴戟天多糖溶液和上述8種經(jīng)不同溫度下吸附的多糖溶液，以蒸餾水為空白，于３90nｍ波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度,計(jì)算脫色率，繪制曲線?其中，檢測(cè)波長(zhǎng)為390ｎm；A脫色前：巴戟天多糖溶液(２.5mg/mL）吸光度；A脫色后：多糖溶液經(jīng)樹(shù)脂脫色后的吸光度.（2）多糖保留率?分別準(zhǔn)確量取1.０mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液(0．05ｍg／mL)、巴戟天多糖溶液(2。５mg/mL）、不同溫度下吸附的多糖溶液于具塞試管中，加入0。5mＬ５％苯酚溶液,搖勻,再加入2．0ｍＬ濃硫酸，迅速搖勻,置于恒溫９0℃水浴中加熱10mｉn，冷卻至室溫，于４９０ｎm測(cè)定吸光度。以蒸餾水同法操作加等量5％苯酚和濃硫酸做空白。計(jì)算多糖損失率，繪制曲線.多糖保留率（%)=1-多糖損失率(%) 其中，檢測(cè)波長(zhǎng)為490nm;ｃ：多糖液濃度（mg/mL);A：吸光度。（3)脫蛋白率準(zhǔn)確吸取多糖流出液、標(biāo)準(zhǔn)牛血清蛋白溶液(０。04０6mg/ｍL)1．0mL于具塞試管中，加入5.0mL考馬斯亮藍(lán)儲(chǔ)備液,搖勻,常溫下放置５min后，于590nm測(cè)定吸光度。以蒸餾水同法操作加等量考馬斯亮藍(lán)液做空白。計(jì)算脫蛋白率。?其中，吸光度A值均在波長(zhǎng)５90nm下測(cè)定;A脫色前：多糖溶液經(jīng)考馬斯亮藍(lán)顯色前的吸光度值;A脫色后:多糖溶液經(jīng)樹(shù)脂脫色后經(jīng)考馬斯亮藍(lán)顯色的吸光度值。(４)糖醛酸保留率的測(cè)定（采用間羥聯(lián)苯法）分別準(zhǔn)確量取1．0mＬ巴戟天多糖溶液(2。5mｇ／mL)、不同溫度下吸附后的多糖溶液,５２0nm處測(cè)定吸收度值,計(jì)算加樣回收率。1（5）成品得率真空干燥后，計(jì)算脫色脫蛋白前后的干物，計(jì)算得率第三章樹(shù)脂（經(jīng)以上實(shí)驗(yàn)確定的最佳樹(shù)脂)對(duì)巴戟天多糖提取液脫色的動(dòng)態(tài)工藝研究?根據(jù)上述的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,后續(xù)實(shí)驗(yàn)均裝柱5０gＤ９41離子交換樹(shù)脂(柱體積１BＶ=30mＬ)，上樣量為１50mL２.５ｍg／mＬ巴戟天多糖溶液;樹(shù)脂（經(jīng)以上實(shí)驗(yàn)確定的最佳樹(shù)脂）均經(jīng)過(guò)乙醇和水洗脫或再生后烘干。濕法攪拌下裝入層析柱,樹(shù)脂沉降后將水放出,用乙醇通過(guò)樹(shù)脂層，洗至流出液呈透明為止,在用蒸餾水洗盡至中性并無(wú)醇味。一、不同流速對(duì)動(dòng)態(tài)吸附效果的影響(一）實(shí)驗(yàn)儀器與材料?主要試劑：巴戟天多糖提取物，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品（AＲ），苯酚(AＲ），濃硫酸(AR，)?主要儀器:紫外可見(jiàn)分光光度計(jì),水浴鍋樹(shù)脂：(經(jīng)以上實(shí)驗(yàn)確定的最佳樹(shù)脂）實(shí)驗(yàn)方法?平行取樹(shù)脂（經(jīng)以上實(shí)驗(yàn)確定的最佳樹(shù)脂）50g五份按常規(guī)濕法裝柱，上2.5ｍg／mＬ巴戟天多糖溶液15０ｍL,分別調(diào)節(jié)流速為１BV/h、2BV／h、3ＢV/ｈ、4BV／h、5BV/h，收集1BV以后的流出液。按靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)方法，測(cè)定吸光度,計(jì)算脫色率和多糖損失率，繪出曲線，確定最佳流速:顯色與檢測(cè) (１)脫色率取適量巴戟天多糖溶液和上述5種經(jīng)不同流速下吸附后的多糖溶液,以蒸餾水為空白，于390nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，計(jì)算脫色率,繪制曲線 其中，檢測(cè)波長(zhǎng)為3９0ｎm;A脫色前：巴戟天多糖溶液(2。5mg/mL）吸光度；A脫色后:多糖溶液經(jīng)樹(shù)脂脫色后的吸光度。（２)多糖保留率分別準(zhǔn)確量取1.0mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液（0。05ｍg／ｍL）、巴戟天多糖溶液（2.5mg/mＬ)、不同流速下吸附的多糖溶液于具塞試管中,加入０。5mＬ5％苯酚溶液,搖勻，再加入2.0mL濃硫酸，迅速搖勻，置于恒溫9０℃水浴中加熱10mｉn,冷卻至室溫，于49０ｎm測(cè)定吸光度。以蒸餾水同法操作加等量５％苯酚和濃硫酸做空白。計(jì)算多糖損失率，繪制曲線。多糖保留率(%)=1—多糖損失率（％) 其中，檢測(cè)波長(zhǎng)為490nm；c:多糖液濃度（mg/mL）；Ａ:吸光度。（3）脫蛋白率準(zhǔn)確吸取經(jīng)不同流速吸附后多糖流出液、標(biāo)準(zhǔn)牛血清蛋白溶液（0。0406mg/mL）1。0mL于具塞試管中,加入５.０ｍL考馬斯亮藍(lán)儲(chǔ)備液，搖勻，常溫下放置5min后,于５90ｎm測(cè)定吸光度。以蒸餾水同法操作加等量考馬斯亮藍(lán)液做空白.計(jì)算脫蛋白率。 其中，吸光度Ａ值均在波長(zhǎng)5９0nm下測(cè)定;A脫色前：多糖溶液經(jīng)考馬斯亮藍(lán)顯色前的吸光度值；A脫色后:多糖溶液經(jīng)樹(shù)脂脫色后經(jīng)考馬斯亮藍(lán)顯色的吸光度值.（4）糖醛酸含量的測(cè)定（采用間羥聯(lián)苯法)分別準(zhǔn)確量取1。0mL巴戟天多糖溶液（2。5mg/mL）、不同流速下吸附后的多糖溶液,520nm處測(cè)定吸收度值，計(jì)算加樣回收率。（5）成品得率真空干燥后，計(jì)算脫色脫蛋白前后的干物,計(jì)算得率二、不同濃度對(duì)動(dòng)態(tài)吸附效果的影響實(shí)驗(yàn)儀器與材料?主要試劑：巴戟天多糖提取物，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品（AＲ），苯酚（AR）,濃硫酸（AR）,樹(shù)脂:（經(jīng)以上實(shí)驗(yàn)確定的最佳樹(shù)脂）?主要儀器:紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，水浴鍋，實(shí)驗(yàn)方法 取*、*、*、*、＊ml的巴戟天多糖溶液,分別加入５個(gè)的**ｍｌ容量瓶中，?平行取離子交換樹(shù)脂(經(jīng)以上實(shí)驗(yàn)確定的最佳樹(shù)脂)5０ｇ五份按常規(guī)濕法裝柱，分別上上述不同濃度多糖溶液150ｍL，流速為2BV/ｈ，收集１BV以后的流出液.按靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)方法，測(cè)定吸光度,計(jì)算脫色率和多糖損失率，繪出曲線,確定最佳流速.顯色與檢測(cè)?（１）脫色率分別取適量的不同濃度的巴戟天多糖溶液和樹(shù)脂吸附后的多糖溶液，以蒸餾水為空白，于39０ｎm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度,計(jì)算脫色率,繪制曲線?其中，檢測(cè)波長(zhǎng)為39０nｍ；A脫色前:巴戟天多糖溶液(2。5mg/mL）吸光度；A脫色后：多糖溶液經(jīng)樹(shù)脂脫色后的吸光度。（2）多糖保留率分別準(zhǔn)確量?。?。0mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液(0。０5mg/mL）、不同濃度巴戟天多糖溶液（２。５mｇ/mL）、吸附后的多糖溶液于具塞試管中,加入０。５mL5%苯酚溶液,搖勻，再加入2.0ｍL濃硫酸，迅速搖勻，置于恒溫90℃水浴中加熱1０mｉn,冷卻至室溫，于490nｍ測(cè)定吸光度。以蒸餾水同法操作加等量5％苯酚和濃硫酸做空白。計(jì)算多糖損失率，繪制曲線。多糖保留率(%）=1-多糖損失率(％)?其中，檢測(cè)波長(zhǎng)為490nm；c：多糖液濃度(mg/mＬ)；A：吸光度。脫蛋白率準(zhǔn)確吸取不同濃度吸附前后的多糖流出液、標(biāo)準(zhǔn)牛血清蛋白溶液（０.0４06mg/ｍL）1.0mL于具塞試管中,加入5.0mL考馬斯亮藍(lán)儲(chǔ)備液，搖勻，常溫下放置5miｎ后，于５9０nm測(cè)定吸光度。以蒸餾水同法操作加等量考馬斯亮藍(lán)液做空白。計(jì)算脫蛋白率. 其中,吸光度A值均在波長(zhǎng)590nm下測(cè)定;A脫色前:多糖溶液經(jīng)考馬斯亮藍(lán)顯色前的吸光度值；A脫色后：多糖溶液經(jīng)樹(shù)脂脫色后經(jīng)考馬斯亮藍(lán)顯色的吸光度值.（４）糖醛酸含量的測(cè)定（采用間羥聯(lián)苯法）分別準(zhǔn)確量?。?。0mL不同濃度的巴戟天多糖溶液（２．５mg/ｍＬ）和吸附后的多糖溶液，５2０nm處測(cè)定吸收度值,計(jì)算加樣回收率。（５）成品得率真空干燥后,計(jì)算脫色脫蛋白前后的干物，計(jì)算得率與其他的脫色脫蛋白工藝的效果比較根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)確定的最佳樹(shù)脂脫色脫蛋白工藝原理:吸附樹(shù)脂具有很好的吸附性能,它理化性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于酸、堿及有機(jī)溶劑.對(duì)有機(jī)物選擇性好，不受無(wú)機(jī)鹽類及強(qiáng)離子低分子化合物存在的影響?？梢酝ㄟ^(guò)物理吸附從水溶液中有選擇地吸附有機(jī)物質(zhì)。糖類化合物分子是一類有機(jī)大分子，可由范德華力與大孔樹(shù)脂產(chǎn)生吸附作用.操作：取50g離子交換樹(shù)脂D941，按常規(guī)濕法裝柱，上巴戟天多糖溶液15０mL（2。5mｇ／ｍL)，不調(diào)節(jié)pH值，流速為2BV/ｈ，收集１BV以后的流出液，備用.根據(jù)各種方法處理后測(cè)定特定波長(zhǎng)下的吸光度,計(jì)算相應(yīng)的脫色率，脫蛋白率，多糖保留率，糖醛酸保留率，成品得率?；钚蕴棵撋摰鞍坠に囋?活性炭是黑色細(xì)微多孔性物質(zhì)，具有芳香環(huán)式的結(jié)構(gòu),它靠范德華力將色素吸附到自身表面,從而使有色物質(zhì)脫色。根據(jù)文獻(xiàn),（1）活性碳一般使用溫度是75℃左右比較好;（2)活性炭脫色效果在水中最強(qiáng),在強(qiáng)極溶劑中使用效果也不錯(cuò),在非極性溶劑中效果較差；（３)一般情況下,在ｐH3—６條件下使用較好;(4）脫色時(shí)間一般為45miｎ。操作:取5．０g活性碳于1５0ｍL錐形瓶中,加入100mL巴戟天多糖溶液（2。5ｍg/mＬ)，于60℃水浴加熱30mｉｎ，趁熱抽濾,濾色備用。根據(jù)各種方法處理后測(cè)定特定波長(zhǎng)下的吸光度,計(jì)算相應(yīng)的脫色率，脫蛋白率,多糖保留率,糖醛酸保留率，成品得率，并與樹(shù)脂比較。雙氧水脫色脫蛋白工藝原理：過(guò)氧化氫帶有過(guò)氧鍵，容易因過(guò)氧鍵斷裂生成過(guò)氧自由基，該自由基奪電子能力強(qiáng)，有強(qiáng)氧化性。當(dāng)過(guò)氧化氫等強(qiáng)氧化劑與色素作用時(shí)，有色物質(zhì)的分子被氧化從而失去原有的顏色。當(dāng)強(qiáng)氧化劑作漂白劑時(shí)，漂白效果是永久的.根據(jù)文獻(xiàn),過(guò)氧化氫在脫色時(shí)間為３h，溫度在５５℃,PＨ＝７以及質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7％時(shí)，脫色效果最佳,可以有效脫去糖中的色素。操作:取粗多糖30mｌ，調(diào)節(jié)ＰＨ=7，取3mｌ于10ｍl容量瓶中，5５℃下加入３0％雙氧水0．3ml,該條件下反應(yīng)3h，冷卻至室溫，根據(jù)各種方法處理后測(cè)定特定波長(zhǎng)下的吸光度，計(jì)算脫色率，脫蛋白率，多糖保留率,糖醛酸保留率，成品得率，并與樹(shù)脂比較。三氯乙酸脫色脫蛋白工藝原理：多糖溶液與三氯乙酸溶液混合,低溫下攪拌，蛋白質(zhì)在三氯乙酸的作用下形成膠狀析出，離心,去除沉淀物即可達(dá)到脫蛋白的目的.操作:配制濃度為4mol/L的三氯乙酸溶液.平行取五份巴戟天總多糖溶液，分別加入1、2、3、4、6%(V／Ｖ）的三氯乙酸溶液，混勻，靜置12h，離心,收集上清液，低溫濃縮，定容，測(cè)定多糖及蛋白質(zhì)含量?？疾烀摰鞍仔Ч叭纫宜岬淖罴鸭尤肓俊?jù)各種方法處理后測(cè)定特定波長(zhǎng)下的吸光度，測(cè)三氯乙酸最佳加入量時(shí)的脫色率，脫蛋白率,多糖保留率，糖醛酸保留率，成品得率。Ｓevａge試劑法脫色脫蛋白工藝原理:蛋白質(zhì)在Sevａｇe試劑中變性，分布在水層及氯仿層交界處，通過(guò)離心或者分層萃取得以除去.Ｓevaｇ法是經(jīng)典的脫蛋白方法,條件較溫和，在脫除蛋白的時(shí)候不會(huì)對(duì)多糖的結(jié)構(gòu)和活性產(chǎn)生影響，但需反復(fù)多次操作。具體操作：巴戟天總多糖用去離子水溶解，按照１:1的體積比，加入Ｓeｖage試劑進(jìn)行