實(shí)驗(yàn)11MS培養(yǎng)基母液和常用試劑的配制課件

實(shí)驗(yàn)1馬鈴薯試管薯的誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)意義：馬鈴薯是世界重要的糧食和蔬菜兼用作物，在生產(chǎn)中由于長(zhǎng)期采用無(wú)性繁殖，導(dǎo)致病毒積累而使種性退化，造成產(chǎn)量和品質(zhì)下降。目前，解決馬鈴薯種性退化最有效的方法是通過(guò)莖尖組織培養(yǎng)脫毒法培育出脫毒試管苗，用其進(jìn)一步生產(chǎn)馬鈴薯脫毒種薯。而在馬鈴薯脫毒種薯的生產(chǎn)中，離體培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)馬鈴薯無(wú)病毒植株產(chǎn)生氣生小塊莖是一個(gè)重要的環(huán)節(jié)。2023/7/161實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：實(shí)驗(yàn)1-1MS培養(yǎng)基母液和常用試劑的配制實(shí)驗(yàn)1-2馬鈴薯試管苗快速繁殖培養(yǎng)基的配制實(shí)驗(yàn)1-3馬鈴薯試管苗的快速繁殖實(shí)驗(yàn)1-4馬鈴薯試管薯的誘導(dǎo)2023/7/162實(shí)驗(yàn)1-1MS培養(yǎng)基母液

和常用試劑的配制1實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^(guò)本次實(shí)驗(yàn)，使學(xué)生能熟練準(zhǔn)確配制MS培養(yǎng)基母液和組培室常用的化學(xué)試劑，鞏固相關(guān)理論基礎(chǔ)知識(shí)。2023/7/1632實(shí)驗(yàn)原理培養(yǎng)基是植物離體培養(yǎng)組織和細(xì)胞賴(lài)以生存的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。配制培養(yǎng)基時(shí)，為了減少試劑稱(chēng)取時(shí)的工作量和少量稱(chēng)取時(shí)出現(xiàn)的誤差，以及避免多種營(yíng)養(yǎng)成分混合導(dǎo)致沉淀產(chǎn)生或相互反應(yīng)而失去培養(yǎng)效果，預(yù)先要將各種營(yíng)養(yǎng)成分配制為一定倍數(shù)的培養(yǎng)基母液，待使用時(shí)稀釋到要求的濃度。母液的濃度為培養(yǎng)基濃度的10倍、100倍或更高。2023/7/164

3主要實(shí)驗(yàn)用具和儀器冰箱、普通天平、分析天平、各種型號(hào)的試劑瓶（棕色和白色）、移液管、量筒、燒杯、容量瓶、搪瓷杯、藥勺、稱(chēng)量紙、玻棒、標(biāo)簽紙、pH試紙（pH5.4~7.0），電磁爐等。2023/7/1654藥品和試劑硝酸銨、硝酸鉀、氯化鈣、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、碘化鉀、硫酸錳、硫酸鋅、鉬酸鈉、硫酸銅、氯化鈷、乙二胺四乙酸二鈉、硫酸亞鐵、甘氨酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆素、煙酸、肌醇、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、NAA（α-萘乙酸）、6-BA（6-芐基腺嘌呤）、濃鹽酸、氫氧化鈉、95%酒精、蒸餾水等。2023/7/1665MS培養(yǎng)基母液和

常用試劑的配制流程5.1培養(yǎng)基的成分

目前，不論液體培養(yǎng)還是固體培養(yǎng)，大多數(shù)植物組織培養(yǎng)中所用的培養(yǎng)基都是由無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)物、碳源、維生素、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)和有機(jī)附加物等幾大類(lèi)物質(zhì)組成。2023/7/1675.2培養(yǎng)基的配制方法配制培養(yǎng)基的最簡(jiǎn)單的方法是用市售培養(yǎng)基干粉溶解在蒸餾水里，加上蔗糖、瓊脂和其他必要的補(bǔ)加物，再加入蒸餾水使之達(dá)到最終的容積。最后調(diào)節(jié)pH值，高壓滅菌，于是制成所需要的培養(yǎng)基。2023/7/168如果沒(méi)有培養(yǎng)基干粉，則可采用以下兩種方法來(lái)配制：一個(gè)是按照配方規(guī)定的數(shù)量分別稱(chēng)量出各種成分，分別使它們?nèi)芙庥谒缓笤賹⑺鼈兓旌显谝黄?。另一個(gè)是先配制一系列的濃縮貯備液（母液），貯存在2～4℃冰箱內(nèi)，待配培養(yǎng)基時(shí)取出，按比例稀釋配用。此法較為常用。2023/7/1695.3MS培養(yǎng)基母液的配制母液的配制有兩種方法：一種是配制成單一化合物母液。此法適合配制多種培養(yǎng)基都需要的同一種母液。另一種是配成幾種不同化合物的混合母液。此法在大量配制同種培養(yǎng)基時(shí)省時(shí)省力。由于MS培養(yǎng)基較為常用，故配制MS培養(yǎng)基母液。配好的母液應(yīng)放在試劑瓶中貯存。2023/7/1610在配制MS培養(yǎng)基母液時(shí)，為減少工作量可以把幾種藥品（如培養(yǎng)基中的大量元素或微量元素）配在同一母液中，但應(yīng)注意各種化合物的組合以及加入的先后順序，以免發(fā)生沉淀。通常把每種試劑單獨(dú)溶解后再與別的也已完全溶解的藥品混合，或者待前一種化合物完全溶解后再加入后一種化合物。混合已溶解的各種礦質(zhì)鹽時(shí)還應(yīng)注意先后順序，力求把Ca2+與SO42-和PO43-錯(cuò)開(kāi)，以免形成硫酸鈣或磷酸鈣的不溶物。同時(shí)，要慢慢地混合，邊混合邊攪拌。2023/7/16115.3.1大量元素母液的配制MS培養(yǎng)基中的9種大量元素除C、H、O外，剩下的六種可由KNO3、NH4NO3、CaCl2

?2H20、MgSO4

?7H2O、KH2PO4幾種無(wú)機(jī)鹽來(lái)供應(yīng)，它們可配在同一母液中（具體配制見(jiàn)下表）。配制的步驟為：確定母液的濃度和體積→計(jì)算各種化合物用量→稱(chēng)量→分別溶解→混合→定容→裝瓶→貼標(biāo)簽→放入冰箱保存。注意：CaCl2?2H20最后加入2023/7/1612么么么么方面Sds絕對(duì)是假的13么么么么方面Sds絕對(duì)是假的母液種類(lèi)

成分

規(guī)定用量/mg?L-1

擴(kuò)大倍數(shù)

稱(chēng)取量/mg

母液定容體積/ml

配1LMS培養(yǎng)基吸取取量/ml

大量元素

KNO3190020

380001000

50

NH4NO3165033000CaCl2?

2H204408800MgSO4?

7H2O3707400KH2PO4

170

3400

2023/7/16155.3.2微量元素母液的配制MS培養(yǎng)基中的微量元素可由MnSO4

?

4H2O、ZnSO4

?

7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4

?

2H2O、CuSO4

?

5H2O、CoCl2

?

6H2O幾種無(wú)機(jī)鹽來(lái)供應(yīng)，它們也可配在同一母液中（具體配制見(jiàn)下表）。配制步驟同大量元素（混合時(shí)不要求先后順序）。2023/7/1616母液種類(lèi)

成分

規(guī)定用量/mg?L-1

擴(kuò)大倍數(shù)

稱(chēng)取量/mg

母液定容體積/ml

配1L培養(yǎng)基吸取量/ml

微量元素

MnSO4?

H2O16.9200338010005ZnSO4?

7H2O8.61720H3BO36.21240KI0.83166Na2MoO4?

2H2O0.2550CuSO4?

5H2O0.0255CoCl2?

6H2O

0.0255

2023/7/16175.3.3有機(jī)成分母液的配制MS培養(yǎng)基中所需的維生素和氨基酸等有機(jī)成分母液應(yīng)分別單獨(dú)配制（具體配制見(jiàn)下表）。配制的步驟為：確定母液的濃度和體積→計(jì)算各種化合物用量→稱(chēng)量→溶解→定容→裝瓶→貼標(biāo)簽→放入冰箱保存。亦可配制成混合母液（不主張采用）。2023/7/1618母液種類(lèi)

成分

規(guī)定用量/mg?L-1

擴(kuò)大倍數(shù)

稱(chēng)取量/mg

母液定容體積/ml

配1LMS培養(yǎng)基吸取量/ml

有機(jī)成分

甘氨酸2.02001002505鹽酸硫胺素0.15鹽酸吡哆素0.525煙酸0.525肌醇10050002023/7/16195.3.4鐵鹽母液的配制鐵鹽母液宜單獨(dú)配制，其配制步驟為：確定母液的濃度和體積→計(jì)算各種化合物用量→稱(chēng)量→分別溶解→混合→煮沸數(shù)分鐘→調(diào)節(jié)pH值至5.8→定容→裝瓶（棕色）→貼標(biāo)簽→放入冰箱保存。用時(shí)每配lL培養(yǎng)基取該溶液5ml。2023/7/1620母液種類(lèi)

成分

規(guī)定用量/mg?L-1

擴(kuò)大倍數(shù)

稱(chēng)取量/mg

母液定容體積/ml

配1LMS培養(yǎng)基吸取量/ml

鐵鹽

Na2EDTA?

2H2O37.320018652505FeSO4?

7H2O27.813902023/7/16215.3.5植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)母液的配制對(duì)于植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)，配制成母液時(shí)，通常用mg·ml-1或ppm較為方便，一般配制成0.1-1mg·ml-1的母液，這樣的濃度便于計(jì)算也可避免冷藏時(shí)形成結(jié)晶。2,4-D/NAA用少量95％酒精溶解，再加水定容；6-BA應(yīng)先溶于少量1mol·L-1的HCl中，再加水定容。具體配制見(jiàn)下表：2023/7/1622母液種類(lèi)

成分

稱(chēng)取量(mg)母液定容體積(ml)母液濃度(mg/ml)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)2,4-D/NAA501000.56-芐氨基嘌呤100.12023/7/16235.3.6其它常用試劑的配制鹽酸（lmol·L-1

）：用濃度36.5%、密度1.19g/cm3的濃鹽酸配制氫氧化鈉（lmol·L-1）：用固體氫氧化鈉配制75%酒精(v/v)：用95%的酒精來(lái)配制稀鉻酸洗滌液：重鉻酸鉀50g溶于1000ml蒸餾水中，冷卻后緩慢加入工業(yè)用硫酸90ml。2023/7/1624配制好的各種母液應(yīng)分別貼上標(biāo)簽，寫(xiě)明母液名稱(chēng)、配制倍數(shù)、配制者、配制日期。母液最好在2～4℃的冰箱中保存。尤其對(duì)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)與有機(jī)類(lèi)物質(zhì)要求較嚴(yán)。