熊果酸的含量測定

野薔薇根中熊果酸的提取工藝研究努爾皮達?阿卜拉江，其買古麗?阿沙木，迪麗努爾?馬里克基金項目：國家自然科學基金(基金項目：國家自然科學基金(21165018)項目資助作者簡介：努爾皮達，女，(維吾爾族)碩士研究生，主要從事天然產物的研究。聯(lián)系作者：迪麗努爾.馬里克(1964-)，女，教授，主要從事天然產物研究。(pkudilnur@)(新疆師范大學化學化工學院，新疆烏魯木齊840054)摘要：目的：優(yōu)選野薔薇根中熊果酸的超聲提取工藝。方法：使用超聲波提取法，采用L9(34)正交設計實驗，用高效液相色譜法測定熊果酸的含量，確定最佳提取工藝條件。結果表明：野薔薇根中熊果酸的提取最佳工藝是超聲功率為600W，超聲頻率為工作5s間歇5s，料液比1：25，提取時間為30min，各因素的影響依次為超聲波頻率>超聲波功率〉料液比和提取時間。結論：超聲輔助提取野薔薇根中熊果酸是一種簡單、快捷、高效的提取方法。關鍵詞：野薔薇；熊果酸；超聲提??；HPLC法StudyonextractiontechnologyofUrsolicacidinRosamultifloraThunbNURPIDA-Ablajan，QIMANGUL-Hasan，DILNUR-Malik(Schoolofchemistryandchemicalengineeringxinjiangnormoluniversity，Urumqi830054)Abstract:objective:tooptimizetheultrasonicextractionofUrsolicacidinRosamultifloraThumb.Method:byutilizingtheultrasonicextractionmethodandusingtheorthogonaltestofL9(34),withhigh-performanceliquidchromatography(HPLC)todetermineursolicacidcontentandtheoptimumextractionconditions.Theresultsshowthattheorderofeachfactoraffectingtheextractionwasultrasonicfrequency>ultrasonicpower>ratioofliquidtomaterial>extractingtime,andtheoptimumconditionsofextractingursolicacidfromtherootofwildroseswereasfollows:ultrasonicpower600W,ultrasonicfrequencyofrestingfor5sintheworkingperiodof5s,ratioofliquidtomaterial1:25,extractingtime30min,.Conclusion:theultrasonic-assistedextractingofursolicacidfromtherootofwildrosesisasimple,quickwayofextractionwithhighefficiency.Keywords:Rosamultiflora;ursolicacid;UltrasonicExtraction;HPLCmethod熊果酸(Ursolicacid)，又名烏蘇酸、烏索酸、a-香樹脂醇，是一種弱酸性五環(huán)三萜類化合物［1］。熊果酸純品為白色針狀結品(乙醇中結品)，味苦，具有多種生物活性，有鎮(zhèn)靜、抗炎、抗菌，降低血糖，抗肝炎⑵等多種生物學效應，熊果酸還具有明顯的抗氧化功能⑶，所以是一種很有開發(fā)價值的植物活性成分，被廣泛地用作醫(yī)藥和化妝品原料，日本等國家已經將其作為天然抗氧化劑應用于食品中［3］。新疆野薔薇（Rosaspp）富含多種人體所需的營養(yǎng)物質［4-5］,有較大開發(fā)利用價值，現代研究證明，野薔薇中含有熊果酸、齊墩果酸等三萜類化合物6］。本文以野薔薇根為原料，采用近幾年興起的新方法超聲波法提取熊果酸，通過研究優(yōu)化該方法工藝條件，旨在提高熊果酸產率，為進一步開發(fā)利用野薔薇提供參考。材料與方法1.1材料、試劑與儀器野薔薇根：采自阿勒泰縣，粉碎，過篩，備用。熊果酸標準品（中國藥品生物制品檢定所，批號110709-200304）；甲醇（色譜純）；超純水；乙醇（分析純）。高效液相色譜儀（安捷倫1200LC，美國）；色譜柱（安捷倫公司HC-C184.6x150mm，粒徑為5pm）；JY92-2D超聲波細胞粉碎機（波新芝生物科技股份有限公司）；旋轉蒸發(fā)儀（上海亞榮儀器有限公司）。1.2試驗方法1.2.1超聲波提取樣品液的制備精密稱取野薔薇根粉末2g，按一定料液比，加人不同體積分數的乙醇，浸泡4h，于不同超聲頻率、不同功率下超聲處理不同時間，靜置放冷，濾過，重復2次，合并濾液，回收溶劑至十，殘渣用甲醇溶解定溶于50mL容量瓶中，作為測試樣品。1.2.2熊果酸提取率的測定方法色譜條件AgilentHC-C18（4.6mmX150mm，粒徑為5pm）色譜柱；流動相為甲醇：水=50:50；流速0.5mL/min；檢測波長為278nm；柱溫室溫；進樣量為10pL。標準曲線的繪制精密稱取干燥至恒重的熊果酸對照品3.3mg，置于5mL容量瓶中，甲醇溶解并稀釋至刻度，得含熊果酸0.66mg/mL標準溶液，置4°C冰箱中保存。用母液依次配置濃度為528pg/mL、396pg/mL、264pg/mL、132pg/mL的標準溶液，進樣10pL，測定峰面積。以峰面積平均值為縱坐標，其對應進樣質量濃度為橫坐標，進行回歸計算，得線性方程為：y=39.197x-850.99，相關系數（R2=0.9977）。熊果酸濃度在132?528pg/mL，線性關系良好。

精密度實驗精密吸取熊果酸對照品溶液（52叩g/mL）10四L，進樣，連續(xù)測定5次，測定熊果酸對照品峰面積的RSD為1.62%（n=5）,結果表明儀器精密度良好。加樣回收率試驗精密稱取已知含量的野薔薇果皮0.20g,共5份，分別精密加入一定量的熊果酸對照品，按供試品溶液制各方法制備，采用上述色譜條件進行測定，結果表明，其平均回收率為101.8%，表1加樣回收率試驗結果（n=5）Tab.1Exprimentresultofsampleinjectingrecovery樣品序號樣品含量/mg加樣量/mg測得量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%10.5210.5281.04198.48%20.5420.5281.05096.21%30.5320.5281.04697.35%97.73%1.02%40.5180.5281.03998.67%50.5250.5281.04297.92%1.2.3樣品測定取測試樣品用0.45pm微孔濾膜過濾，精密吸取10J11，按上述色譜條件進行測定。重復進樣三次，取均值，根據回歸方程計算熊果酸的量。色譜圖見圖2。mAU g150100■SO-25:圖1熊果酸對照品HPLC色譜圖Fig.1HPLCchromatogramofcomparativeursolicacid

七Fig.2HPLCchromatogramofsampleursolicacid圖2熊果酸樣品HPLC七Fig.2HPLCchromatogramofsampleursolicacid圖2熊果酸樣品HPLC色譜圖上面的圖可以看出這兩個圖的保留時間相等分離效率也比較好，說明在此條件下熊果酸峰與雜質峰能得到較好分離。1.2.4野薔薇根中熊果酸提取工藝優(yōu)化正交實驗因素水平設計：根據已有的資料和實際情況，選用提取時間(A)、超聲頻率(B)、超聲功率(C)和料液比(D)作為考查因素，以野薔薇果皮中熊果酸的提取效率為考查指標，選用L16(44)正交表，因素水平見表2。表2實驗因素及水平Tab.2Fantorsandlevels水平因素A功率/WB超聲頻率C時間/minD料液比/g/mL1200工作5s間歇5s101：202400工作6s間歇4s201：253600工作7s間歇3s301：30結果與分析2.1正交試驗結果與數據分析用HPLC法測定樣品中熊果酸的含量(以每g野薔薇果皮中含熊果酸mg計)的結果如下表3。表3L16(44)正交試驗設計及結果Tab.3ResoutsofL16(44)orthogonaltest試驗號超聲功率A頻率B時間C料液比D提取量mg/g111112.112212221.842313331.657421232.085522311.925623121.731731322.327832131.876933211.749k11.87032.1751.9061.929k21.91371.8811.8921.9667k31.9841.7121.96971.873R0.11370.46270.0780.094由試驗結果并通過極差R的大小可知,各試驗因素對熊果酸提取率影響的大小次序為：B>A>D>C，即對野薔薇果皮中熊果酸提取影響最大的因素是超聲頻率，超聲功率和料液比影響次之，超聲時間影響最小。最佳提取工藝條件為：A3B1C3D2，，即超聲功率為600W，超聲頻率為工作5s間歇5s，料液比我1：25，提取時間為30min。2.3正交實驗結果的驗證按2.1正交實驗的最佳工藝條件進行1.2.1實驗，平行三次，取平均值，得最佳提取條件下熊果酸的提取率為2.426mg/g。結論野薔薇根中熊果酸的最佳提取工藝參數：超聲功率為600W，超聲頻率為工作5s間歇5s，料液比我2：25,提取時間為30min。。在最優(yōu)因素水平組合條件下，熊果酸提取率為2.426mg/g。超聲輔助提取野薔薇果皮中熊果酸主要是利用超聲波的空化作用，即一定頻率的超聲波對細胞的破化有助于有效成分的溶出，另外超聲波的次級效應，如機械振動、乳化、擴散、擊碎、化學效應等也能加速欲提取成分的擴散釋放并充分與溶劑混合，有利于提取。采用高效液相色譜法對熊果酸的含量進行分析，建立了快速，簡便，靈敏的HPLC測定方法。分析結果表明，該方法簡單快速，高效靈敏，重現性好。[1]孟艷秋，陳瑜，王丹.熊果酸的研究進展[J].中國新藥雜志.2007,16(1):25?27⑵王鵬等.熊果酸在藥用植物中的分布及藥理作用[J].中藥材，2000,29(6)：420BalanehruS，NagarajanB.Protectiveeffectofoleanolicacidandurso-licacidagainstlipidperoxidation.BiochemInt，1991，24(5):981-984.梁頌華，周文革.新疆野薔薇果汁工藝研究.食品與發(fā)酵工業(yè)[J].2008,28(2):84-86杜英華，陳保國,賈洪斌.刺玫果營養(yǎng)成分的分析測定.內蒙古石油化工[J].2002,28(4):24-25PangNN,MalikeD,LiuHW.SimultaneousDeterminationofMainBioactiveComponentsinRosamultifloraThunb.andTheirFragmentationStudyby