儀器教程高效液相色譜法

高效液相色譜法

(HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC)

20-1概述

高效液相色譜法（HPLC）是20世紀(jì)60年代末70年代初發(fā)展起來(lái)的一種新型分離分析技術(shù)，隨著不斷改進(jìn)與發(fā)展，目前已成為應(yīng)用極為廣泛的化學(xué)分離分析的重要手段。它是在經(jīng)典液相色譜基礎(chǔ)上，引入了氣相色譜的理論，在技術(shù)上采用了高壓泵、高效固定相和高靈敏度檢測(cè)器，因而具備速度快、效率高、靈敏度高、操作自動(dòng)化的特點(diǎn)。為了更好地了解高效液相色譜法優(yōu)越性，現(xiàn)從兩方面進(jìn)行比較：

1．高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法

高效液相色譜法比起經(jīng)典液相色譜法的最大優(yōu)點(diǎn)在于高速、高效、高靈敏度、高自動(dòng)化。高速是指在分析速度上比經(jīng)典液相色譜法快數(shù)百倍。由于經(jīng)典色譜是重力加料，流出速度極慢；而高效液相色譜配備了高壓輸液設(shè)備，流速最高可達(dá)103cm·min-1.例如分離苯的羥基化合物，7個(gè)組分只需1min就可完成。對(duì)氨基酸分離，用經(jīng)典色譜法，柱長(zhǎng)約170cm，柱徑0.9cm，流動(dòng)相速度為30cm3·h-1，需用20多小時(shí)才能分離出20種氨基酸；而用高效液相色譜法，只需lh之內(nèi)即可完成。又如用25cm×0.46cm的Lichrosorb－ODS(5μ)的柱，采用梯度洗脫，可在不到0.5h內(nèi)分離出尿中104個(gè)組分.2．高效液相色譜法與氣相色譜法

（l）氣相色譜法分析對(duì)象只限于分析氣體和沸點(diǎn)較低的化合物，它們僅占有機(jī)物總數(shù)的20％。對(duì)于占有機(jī)物總數(shù)近80％的那些高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、摩爾質(zhì)量大的物質(zhì)，目前主要采用高效液相色譜法進(jìn)行分離和分析。(2)氣相色譜采用流動(dòng)相是惰性氣體，它對(duì)組分沒(méi)有親和力，即不產(chǎn)生相互作用力，僅起運(yùn)載作用。而高效液相色譜法中流動(dòng)相可選用不同極性的液體，選擇余地大，它對(duì)組分可產(chǎn)生一定親和力，并參與固定相對(duì)組分作用的劇烈競(jìng)爭(zhēng)。因此，流動(dòng)相對(duì)分離起很大作用，相當(dāng)于增加了一個(gè)控制和改進(jìn)分離條件的參數(shù)，這為選擇最佳分離條件提供了極大方便。(肅3舟)醫(yī)氣貍相法色關(guān)譜夸一棕般展都稻在較永高黑溫填度下塵進(jìn)哲行盟的治，喪而神高誘效咽液膀相茂色顧譜范法對(duì)則送經(jīng)床常旨可抵在室青溫碧條銅件下象工鑄作墳。總挺之看，丸高碧效程液占相近色允譜奔法堅(jiān)是巖吸鍵取句了為氣傭相伏色周譜辜與灘經(jīng)憲典糠液筒相訪色諷譜稱(chēng)優(yōu)耕點(diǎn)歸，帳并心用弄現(xiàn)味代籮化陷手京段臨加報(bào)以耕改誘進(jìn)常，刻因趴此熱得趣到繞迅刮猛裳的揚(yáng)發(fā)亞展事。告目雨前高艙效帶液亭相隨色諸譜爆法罷已鋒被倉(cāng)廣閃泛觀應(yīng)島用于潑分缺析吐對(duì)制生滋物各學(xué)躍和趟醫(yī)叼藥身上梁有拳重粉大果意幟義例的洲大妻分即子家物關(guān)質(zhì)遇，那例智如嫌蛋外白親質(zhì)屢、娛核副酸眼、訓(xùn)氨般基雄酸準(zhǔn)、秒多孔糖嫌類(lèi)秒、耐植態(tài)物窮色害素隔、半高縮慧聚籃物驚、吳染削料姜及秩藥破物拖等渴物秩質(zhì)宜的枝分柱離粘和涉分獻(xiàn)析卵。高榆效計(jì)液吩相氣色魔譜痕法束的風(fēng)儀床器茅設(shè)蛋備陳費(fèi)亡用誦昂口貴主，瞞操厭作管?chē)?yán)芽格橫，示這猴是茅它壞的志主事要缺散點(diǎn)。2保0勉-葛2觀高裹效機(jī)液械相僻色景譜枝儀高床效趟液拒相跑色塔譜悉儀面的揀結(jié)注構(gòu)贏示娛意洽見(jiàn)槽圖巨2挑0紅-零1淺，雙一蹦般肢可換分雅為機(jī)4買(mǎi)個(gè)伴主碑要朗部木分溫：高蠅壓識(shí)輸莖液脈系引統(tǒng)護(hù)，錯(cuò)進(jìn)用樣快系搜統(tǒng)末，陜分膠離蹦系撞統(tǒng)寄和希檢身測(cè)哄系枕統(tǒng)位。此斥外燭還慣配逐有輔抱助適裝沉置：名如榨梯塵度假淋扭洗泊，嘆自繩動(dòng)憲進(jìn)野樣銷(xiāo)及粗?jǐn)?shù)憶據(jù)擁處鋸理?yè)岬葪?。束其您工城作須過(guò)爐程疫如個(gè)下場(chǎng)：慘首酒先刺高榆壓組泵歪將駁貯害液莊器詳中俱流堵動(dòng)餅相遼溶兄劑奏經(jīng)靜過(guò)帆進(jìn)扣樣亭器懼送豆入訂色背譜禽柱勝，羨然刊后眉從石控堤制育器存的緊出削口禍流漸出煤。加當(dāng)足注保入由欲路分溪離返的炮樣然品揚(yáng)時(shí)脊，小流較經(jīng)私進(jìn)閘樣種器憑貯庭液監(jiān)器睬的仇流顆動(dòng)膠相串將永樣它品遞同坊時(shí)墾帶暮入資色抬譜著柱廣進(jìn)牛行愚分馬離冤，昂然丟后買(mǎi)依識(shí)先堵后晚順陜序神進(jìn)蝦入餃檢露測(cè)效器劫，橡記延錄齡儀攤將安檢筆測(cè)吼器融送擱出財(cái)?shù)慕裥盘翘?hào)璃記咳錄紛下攏來(lái)桐，坑由送此星得瞇到華液掙相懇色混譜里圖蜻。1肢．折高凈壓蕉輸尤液兇系圾統(tǒng)由跨于孟高碰效愚液塌相衰色麻譜路所延用笨固感定吉相抹顆觸粒源極勻細(xì)河，周因旺此飲對(duì)瞎流向動(dòng)桂相搶阻列力懶很語(yǔ)大斜，瞞為鋸使急流幕動(dòng)貿(mào)相錢(qián)較帝快首流傷動(dòng)危，鄰必記須落配旱備代有撫高泥壓即輸承液屋系騙統(tǒng)尖。打它效是渣高眠效浩液銅相竄色澇譜望儀齡最他重久要顆的系部級(jí)件山，鐵一累般侄由側(cè)儲(chǔ)微液兩罐托、呀高重壓笛輸占液側(cè)泵鋤、溉過(guò)繞濾顫器睬、筑壓儲(chǔ)力睡脈太動(dòng)摧阻醉力鋒器掏等脈組駐成劑，刃其插中高陜壓咽輸噴液糾泵花是欺核值心旁部醬件。啞對(duì)泥于柳一恩個(gè)荷好平的達(dá)高摸壓鬼輸話(huà)液嘗泵砍應(yīng)伯符致合暢密秒封便性藝好宰，導(dǎo)輸炮出億流蹦量穴恒父定祥，戴壓沈力覺(jué)平運(yùn)穩(wěn)法，刃可厭調(diào)夸范拉圍啦寬趁，爭(zhēng)便氣于起迅隆速短更享?yè)Q忘溶沿劑閱及稻耐艙腐篇蝕賓等伶要在求享。市常傅用牽的衫輸具液絨泵摧分仙為恒蓄流秤泵和恒垃壓垂泵兩周種雙。逮恒炮流芝泵久特區(qū)點(diǎn)漂是霉在胸一杏定燦操基作貞條愚件枕下皂，輸葉出謝流古量尺保紋持董恒謙定漿而芬與妻色剝譜拆柱遍引肺起樣阻車(chē)力照變珠化刷無(wú)歌關(guān)；恒傭壓黨泵析是爆指瓣能口保泊持染輸跪出李壓遇力待恒鋪定扭，漿但白其顛流冠量飽則處隨憑色建譜舍系礙統(tǒng)舌阻惜力嶺而迅變景化，舌故獻(xiàn)保掉留亭時(shí)銳間思的閥重褲視倡性旱差法，子它告?zhèn)兒鹘阌兴緝?yōu)遙缺授點(diǎn)愚。橋目舌前縣恒弄流資泵象正恨逐灘漸解取葬代狡恒孔壓奮泵碰。膚恒妹流他泵北又液稱(chēng)每機(jī)夕械付泵蜓，楚它賺又術(shù)分園機(jī)馳械霸注悲射鳴泵櫻和絕機(jī)提械臟往桐復(fù)璃泵燙兩斤種逼，龜應(yīng)哲用脂最功多司的羊是書(shū)機(jī)嗎械雷往宗復(fù)槍泵岡。2漲．勾進(jìn)搭樣鮮系仗統(tǒng)高愉效嫌液截相旗色肯譜錘柱嬌比蛙氣垃相傲色賠譜儉柱慕短謙得項(xiàng)多炸（備約宵5訓(xùn)～炸3刷0咽c仇m紅）餡，高所他以越柱機(jī)外懇展農(nóng)寬勺（霉又目稱(chēng)孝柱浴外淋效圣應(yīng)衫）風(fēng)較活突炕出癢。懸柱乳外提展堤寬蛇是毀指樂(lè)色改譜傅柱糟外失的炭因詠素碎所唯引弄起梨的輩峰逼展陶寬消，航主最要語(yǔ)包滋括翁進(jìn)椒樣棵系況統(tǒng)曠、孔連瓣接井管淘道析及奧檢箱測(cè)酬器采中置存少在侍死憑體王積碗。較柱塘外惑展中寬縫可雀分估柱淘前猜和由柱叮后索展芽寬饅。號(hào)進(jìn)漢樣紛系木統(tǒng)都是疑引斥起耐往稱(chēng)前測(cè)展遙寬呆的絮主沸要辟因資素間，財(cái)因欺此高紗效壩液庸相弦色蔥譜須法藏中拒對(duì)亞進(jìn)別樣遍技腸術(shù)候要吧求房誠(chéng)較倡嚴(yán)菊。3睡分副離螞系桌統(tǒng)蕩—筍—采色忠譜誓柱色出譜駐柱毒是芳液帳相剃色暴譜醉的心守臟春部存件，果它粘包角括鍛柱虹管艙與瓣固權(quán)定謎相貫兩賊部啄分查。促柱假管始材錦料尿有死玻急璃欄、悅不假銹裳鋼嚼、附鋁穿、機(jī)銅癥及唐內(nèi)育襯由光嫌滑蝦的蠟聚株合練材亮料穿的陳其婚他耳金掀屬偶。桂玻脖璃通管興耐炊壓殘有駝限每，儉故副金駕屬械管叉用肯得僚較多多只。碗一牲般糾色水譜美柱跌長(zhǎng)5光～旁3榨0役c暴m獨(dú)，屋內(nèi)厲徑膊為臘4重～梁5攏m家m紫，刑凝或膠堪色肚譜萌柱既內(nèi)沉徑召3為～另1享2玩m副m脖，規(guī)制秧備鞠往排內(nèi)積徑款較吹大云，幸可蹄達(dá)渣2木5粥m隔m耗以吉上邊。一楊般尚在造分月離描前魂備澡有丙一臂個(gè)僑前升置寧柱枯，寶前懶置鮮柱壇內(nèi)院填逢充繼物辜和妙分綠離壤柱竹完串全避一魯樣精，雷這舍樣踐可復(fù)使婦淋違洗陽(yáng)溶垃劑蠅由苦于甜經(jīng)農(nóng)過(guò)種前頂置滅柱昨?yàn)殇J其土中修的康固蒼定辣相幕飽萬(wàn)和復(fù)，假使僚它栗在透流解過(guò)貫分碗離休柱匠時(shí)鞏不攀再步洗氧脫兵其戒中惠固鈴定沙相報(bào)，榨保卸證憂(yōu)分避離蘿技施的歐性男能鐘不白受患影遮響。柱貼子警裝煮填乞得重好姨壞洲對(duì)湖柱版效偵影鼠響換很梢大挺。舉對(duì)多于陜細(xì)鍋粒帥度天的庫(kù)填父料罷（永＜尸2引0贊μ蘇m提）忌一幫般躬采探用勻吊漿重填花充雹法賺裝適柱，滅先途將老填盒料汽調(diào)跳成飯勻裙?jié){沉，哈然夫后悼在機(jī)高悼壓景泵企作衰用慈下懶，盼快夠速淚將鞋其淋壓捎入爆裝隸有擱洗言脫籠液等的凝色畫(huà)譜蛛柱搶內(nèi)梁，縫經(jīng)雙沖蓬洗值后槽，犬即癥可凡備艙用奔。4語(yǔ)．湊檢題測(cè)賊系此統(tǒng)在升液總相矮色擦譜衡中領(lǐng)，課有皆?xún)杉o(jì)種本基足本堂類(lèi)曉型洋的詞檢惡測(cè)弦器筐。鑄一楚類(lèi)頁(yè)是溶銜質(zhì)胸性株檢跪測(cè)酷器，勸它廁僅齒對(duì)撕被進(jìn)分哄離糟組腿分需的能物滑理穩(wěn)或備化應(yīng)學(xué)霞特由性質(zhì)有南響羽應(yīng)孩，腎屬番于繳這跑類(lèi)趣檢雁測(cè)倉(cāng)器濫的臘有紫詠外身、俗熒皇光賊、炭電裳化珠學(xué)摧檢耐測(cè)恒器集等。殘另?yè)p一連類(lèi)畜是總短體衫檢滾測(cè)央器，疤它獵對(duì)哨試器樣傳和鍛洗搶脫監(jiān)液挪總愈的尿物色理趟或鵲化褲學(xué)有性斃質(zhì)綢有鍛響逃應(yīng)京，互屬矛于攀這拴類(lèi)貓檢響測(cè)協(xié)器頁(yè)的瞧有示吳差欣折無(wú)光業(yè)，衰電歲導(dǎo)畜檢扶測(cè)器喂等棟。壺現(xiàn)初將顧常貨用詳?shù)膮挋z播測(cè)駐器督介溪紹谷如嶺下澆:（擱l芽）目紫格外姨檢忙測(cè)越器（諸2塔）粗熒渡光祖檢柳測(cè)蜻器(飽3延)適示苦差鳴折御光件率驅(qū)檢星測(cè)借器幾槐乎顏所姓有河物略質(zhì)叔都驗(yàn)有憶各再自泰不硬同嶼的為折框射似率壞，螞因拍此糟差謀示羨折惰光失檢蚊測(cè)忠器詞是帆一未種離通粗用衫型美檢衡測(cè)矮器犧。燭靈質(zhì)敏個(gè)度尼可面達(dá)劇1眾0-校7g密·軟c飽m-葵3。腔主梨要炭缺定點(diǎn)屠是果對(duì)風(fēng)溫倘度跳變朋化淘敏灶感狹，蝕并近且太不嫌能謊用偉于悄梯天度公淋?chē)娤匆?。（?澤）將電銜導(dǎo)驢檢繪測(cè)臂器(事5順)禿附娃屬犯系用統(tǒng)它胡包下括打脫喂氣知、劑梯妹度盒淋怠洗慎、看恒救溫聞、沖自蒼動(dòng)引進(jìn)乞樣廉、誦餾四分烤收標(biāo)集臥以風(fēng)及菌數(shù)俊據(jù)更處撇理教等常裝假置劫。對(duì)其木中簡(jiǎn)梯復(fù)度農(nóng)淋惕洗獵裝救置紀(jì)是號(hào)高柔壓需液恥相磨色止譜嘴儀國(guó)中阿尤影為呀重患要符的均附魔屬案裝已置遼.2靈0表-諷3迷高盡效繼液優(yōu)相攏色端譜哲的腐固縮慧定乏相凈和浴流統(tǒng)動(dòng)乓相（苦－扎）崇固幻玉定純相高婦效稿液筆相司色酷譜切固蛾定馬相噸以傷承也受附高累壓屑能染力領(lǐng)來(lái)皆分翅類(lèi)驅(qū)，誼可沫分掘?yàn)閯傉バ赃^(guò)固將體和硬酒膠兩簡(jiǎn)大喘類(lèi)瘦。剛丈性朗固面體以二休氧對(duì)化嫂硅紡為脂基矮質(zhì)，勢(shì)可用承雁受做7軋.裙O溜×休1格08～物1犯.總O膨×課1釀09P完a餅的享高犁壓析，瞇可餐制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