第二章-實(shí)驗(yàn)室常用移液器課件

第二章實(shí)驗(yàn)室常用移液器永州職業(yè)技術(shù)學(xué)院楊曉斌教學(xué)基本要求掌握（1）移液器的工作原理（2）移液器的基本結(jié)構(gòu)和性能要求（3）移液器的使用方法熟悉（1）移液器的維護(hù)（2）移液器常見故障的排除了解（1）移液器的種類（2）移液器的專業(yè)校準(zhǔn)3第二章實(shí)驗(yàn)室常用移液器第二節(jié)移液器的基本結(jié)構(gòu)、性能與使用2第一節(jié)常用移液器的工作原理

31第三節(jié)移液器的維護(hù)與常見故障的排除33前言良好的分析技術(shù)對(duì)于臨床檢驗(yàn)是極為重要的，在各種臨床檢驗(yàn)分析技術(shù)中，首先要熟練掌握的就是準(zhǔn)確的移液技術(shù)，它是檢驗(yàn)技術(shù)人員的基本功，是保證檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確的前提和條件。目前，移液器替代了過(guò)去的玻璃刻度吸管，作為一種方便有效的精密計(jì)量器材已廣泛應(yīng)用于各類實(shí)驗(yàn)室。返回目錄第一節(jié)常用移液器的工作原理第一節(jié)常用移液器的工作原理移液器（locomotivepipette）又名微量加樣器或移液槍，是連續(xù)可調(diào)、計(jì)量和轉(zhuǎn)移液體的專用器材。目前移液器的吸液范圍從小于1μl至10ml之間。返回目錄7根據(jù)其移液的物理學(xué)原理可分為使用空氣墊(又稱活塞沖程)加樣的移液器和使用無(wú)空氣墊的活塞正移動(dòng)加樣的移液器。根據(jù)移液量是否可調(diào)又可分為定量移液器和可調(diào)式移液器。第一節(jié)常用移液器的工作原理返回目錄8一、移液器的工作原理移液器的基本工作原理是依據(jù)胡克定律。在一定限度內(nèi)彈簧伸展的長(zhǎng)度與彈力成正比，也就是移液器的吸液體積與移液器內(nèi)的彈簧伸展的長(zhǎng)度成正比。移液器內(nèi)活塞通過(guò)彈簧的伸縮運(yùn)動(dòng)來(lái)實(shí)現(xiàn)吸液和放液。在活塞推動(dòng)下，排出部分空氣，利用大氣壓吸入液體，再由活塞推動(dòng)空氣排出液體。返回目錄9二、常用移液器的工作原理目前臨床常用的移液器主要有空氣墊移液器、活塞正移動(dòng)移液器、多通道移液器和電子移液器。返回目錄101．空氣墊移液器

空氣墊移液器主要用于固定或可調(diào)體積液體的加樣，加樣體積的范圍在1μl至l0ml之間?？諝鈮|的作用是將吸至塑料吸頭內(nèi)的液體與移液器內(nèi)的活塞分隔開，空氣墊隨著移液器活塞的彈簧伸縮而移動(dòng)，進(jìn)而帶動(dòng)吸頭中的液體?？諝鈮|移液器最大的不足之處就是容易受溫度、氣壓和空氣濕度的影響，導(dǎo)致加樣的準(zhǔn)確度降低。返回目錄112．活塞正移動(dòng)移液器該類移液器可以在空氣墊移液器難以應(yīng)用的情況下使用。如移取具有高蒸汽壓、高黏稠度以及密度大于2.0g/cm3的液體。活塞正移動(dòng)移液器的吸頭與空氣墊移液器吸頭不同，其內(nèi)含一個(gè)可與移液器活塞耦合的活塞，這種吸頭不能使用普通的吸頭或不同廠家的吸頭。返回目錄123．多通道移液器和電子移液器多通道移液器通常為8通道或12通道，與96孔（8×12）微孔板一致。多通道移液器的使用不但可減少實(shí)驗(yàn)操作人員的加樣次數(shù)，而且可提高加樣的精密度。返回目錄13電子移液器多為半自動(dòng)加樣系統(tǒng)，加樣重復(fù)性高，可減少人為誤差和污染，應(yīng)用范圍廣。返回目錄第二節(jié)移液器的結(jié)構(gòu)、性能與使用15第二節(jié)移液器的結(jié)構(gòu)、性能與使用移液器是臨床實(shí)驗(yàn)室中最常使用的移液器材之一，雖然其基本結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，使用方便，但對(duì)移液器的性能要求比較嚴(yán)格，作為專業(yè)的檢驗(yàn)人員應(yīng)當(dāng)掌握移液器的基本結(jié)構(gòu)和使用方法。返回目錄16一、移液器的基本結(jié)構(gòu)移液器是一種量出式量器，移液量由一個(gè)配合良好的活塞在活塞套內(nèi)移動(dòng)的距離來(lái)確定。移液器的基本結(jié)構(gòu)主要由顯示窗、容量調(diào)節(jié)部件、活塞、O-形環(huán)、吸引管和吸液嘴（俗稱槍頭）等部分組成

返回目錄17二、移液器的性能要求移液量能否按照實(shí)驗(yàn)的要求精確量取，直接關(guān)系到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。返回目錄18（一）計(jì)量性能要求移液器在標(biāo)準(zhǔn)溫度20℃時(shí)，其容量允許誤差和測(cè)量重復(fù)性應(yīng)符合《中華人民共和國(guó)國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程——移液器》的要求.返回目錄19（二）通用技術(shù)要求①標(biāo)有產(chǎn)品名稱、生產(chǎn)商、標(biāo)稱容量等基本信息②移液器外殼塑料表面應(yīng)平整、光滑，

外觀要求

按鈕上下移動(dòng)應(yīng)靈活、分檔界限明顯，在正確使用情況下不得有卡住現(xiàn)象。按鈕采用聚丙烯或性能相似材料制成，無(wú)明顯彎曲，內(nèi)壁光潔、平滑，排液后沒(méi)有明顯液體遺留，有相應(yīng)配套的吸液嘴吸液嘴

在0.04MPa的壓力下，5s內(nèi)不得有漏氣現(xiàn)象。

密合性可調(diào)移液器的容量調(diào)節(jié)指示部分在調(diào)節(jié)范圍內(nèi)轉(zhuǎn)動(dòng)要靈活，數(shù)字指示要清晰、完整。調(diào)節(jié)器

返回目錄20（三）移液器的檢測(cè)1．氣密性檢測(cè)①目視法檢測(cè)：將吸取液體后的移液器垂直靜置15秒，觀察是否有液滴緩慢的流出。若有流出，說(shuō)明有漏氣現(xiàn)象；②壓力泵檢測(cè)：使用專用的壓力泵，檢測(cè)壓力情況，判斷是否漏氣。返回目錄21（三）移液器的檢測(cè)移液器漏氣的處理可能原因處理辦法吸頭不匹配使用原裝匹配的吸頭裝配吸頭時(shí)沒(méi)上緊注意裝配吸頭的方法（參考說(shuō)明書）移液器內(nèi)部氣密性不好請(qǐng)廠商工程師處理返回目錄22（三）移液器的檢測(cè)2．準(zhǔn)確性檢測(cè)①量程小于1μl：建議使用分光光度法檢測(cè)。②量程大于1μl：用稱重法檢測(cè)。通過(guò)對(duì)水的稱重，轉(zhuǎn)換成體積來(lái)鑒別移液器的準(zhǔn)確性。返回目錄23（四）移液器的專業(yè)校準(zhǔn)移液器的工作量大，長(zhǎng)期使用，將會(huì)使彈簧彈力發(fā)生變形，加之使用塑料材料，不耐磨擦，容易產(chǎn)生誤差。新購(gòu)進(jìn)的移液器必須進(jìn)行校準(zhǔn)才能使用。正在使用的移液器，由于長(zhǎng)期使用會(huì)造成其設(shè)定體積與吸取體積的誤差。目前，由于實(shí)驗(yàn)室自身?xiàng)l件的限制，一般實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的常規(guī)檢測(cè)并不能完全取代專業(yè)的校準(zhǔn)工作。返回目錄24三、移液器的使用方法移液器的操作是科學(xué)試驗(yàn)的第一步，是一個(gè)非?；A(chǔ)的試驗(yàn)操作，而錯(cuò)誤的操作容易產(chǎn)生移液偏差，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確。返回目錄25（一）設(shè)定移液體積從大體積調(diào)為小體積，則按照正常的調(diào)節(jié)方法，逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)旋鈕即可。從小體積調(diào)為大體積時(shí)，則可先順時(shí)針旋轉(zhuǎn)刻度旋鈕至超過(guò)設(shè)定體積的刻度，再回調(diào)至設(shè)定體積，這樣可以保證量取的最高精確度。返回目錄26（一）設(shè)定移液體積千萬(wàn)不要將旋鈕旋出量程，否則會(huì)卡住內(nèi)部機(jī)械裝置而損壞移液器。返回目錄27（二）裝配吸液嘴單通道移液器，將移液端垂直插入吸頭，左右微微轉(zhuǎn)動(dòng)，上緊即可。多通道移液器，將移液器的第一道對(duì)準(zhǔn)第一個(gè)吸頭，傾斜插入，前后稍微搖動(dòng)上緊，吸頭插入后略超過(guò)O型環(huán)即可返回目錄28（三）移液方法移液前，保證移液器、槍頭和液體處于相同溫度。吸液前，可以先吸放幾次液體以潤(rùn)濕吸液嘴。吸液時(shí)，保持豎直，槍頭插入液面下2～3毫米。返回目錄29前進(jìn)移液法用大拇指將按鈕按下至第一停點(diǎn)，然后慢慢松開按鈕回原點(diǎn)。接著將按鈕按至第一停點(diǎn)排出液體，稍停片刻繼續(xù)按按鈕至第二停點(diǎn)吹出殘余的液體，最后松開按鈕返回目錄30反向移液法一般用于轉(zhuǎn)移高粘液體、生物活性液體、易起泡液體或極微量的液體。吸取液體時(shí)先按下按鈕至第二停點(diǎn)，慢慢松開按鈕至原點(diǎn)。將按鈕按至第一停點(diǎn)排出液體，保持按鈕位于第一停點(diǎn)，取下有殘留液體的吸液嘴，棄之。返回目錄31（四）移液器的放置使用完畢，可以將其豎直掛在移液器架上。當(dāng)移液器槍頭里有液體時(shí)，切勿將移液器水平放置或倒置，以免液體倒流腐蝕活塞彈簧。返回目錄第三節(jié)移液器的維護(hù)與常見故障的排除33第三節(jié)移液器的維護(hù)與常見故障的排除移液器以操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確性高等優(yōu)點(diǎn)得到了廣泛應(yīng)用，為使移液器始終保持最佳性能，必須定期進(jìn)行維護(hù)，并及時(shí)排除故障。返回目錄34移液器的拆卸方法返回目錄35移液器的拆卸方法返回目錄36（一）清潔和消毒內(nèi)外部清潔

①外殼的清潔：清潔液擦洗，雙蒸水淋洗，晾干；②內(nèi)部的清洗：拆卸移液器下半部分，按①步驟清洗后在活塞表面涂上一層薄硅酮油脂。消毒滅菌處理

①常規(guī)高溫高壓滅菌處理：包裝滅菌部件于121℃，100kPa，滅菌20分鐘，室溫下晾干，活塞涂一層薄硅酮油脂，再組裝；②紫外線照射滅菌：表面消毒。DNA污染的去除

移液器下半部分拆卸下來(lái)的內(nèi)外套筒，95℃下于清洗液中浸泡30分鐘，再用蒸餾水沖洗套筒，60℃下烘干或完全晾干后在活塞表面涂上硅酮油脂再組裝。123返回目錄37（二）不同性質(zhì)液體移液時(shí)的操作特性和保養(yǎng)方法為確保移液的準(zhǔn)確度，建議根據(jù)具體使用情況采用相應(yīng)的清洗及保養(yǎng)方法，以延長(zhǎng)移液器使用壽命。返回目錄38移液器在不同使用情況下應(yīng)采取的清洗和保養(yǎng)方法液體性質(zhì)操作特性清洗和保養(yǎng)方法水溶液和緩沖液用蒸餾水校準(zhǔn)移液器，結(jié)果非常準(zhǔn)確打開移液器，用雙蒸水沖洗污染部分，可以在干燥箱中干燥，溫度不超過(guò)60℃。給活塞涂抹少量潤(rùn)滑油無(wú)機(jī)酸/堿如果經(jīng)常移取高濃度的酸/堿液，建議偶爾用雙蒸水清洗移液器的下半支。并推薦使用帶有濾芯的吸嘴Eppendorf移液器使用的塑料材料和陶質(zhì)活塞都是耐酸耐堿材料（除氫氟酸）。但是酸液/堿液的蒸汽可能會(huì)進(jìn)入移液器的下部，影響其性能。清潔方法同“水溶液”部分具有潛在傳染性的液體為了避免污染，應(yīng)該使用帶有濾芯的吸嘴。或者使用正向置換方法移取污染部分進(jìn)行121℃，20分鐘高壓滅菌。或?qū)⒁埔浩飨虏拷雽?shí)驗(yàn)室常規(guī)消毒劑中。隨后用雙蒸水清洗，并用如上所述的方法進(jìn)行干燥。細(xì)胞培養(yǎng)物為了保證無(wú)菌，應(yīng)使用Eppendorf帶有濾芯的吸嘴參照“具有潛在傳染性的液體”的清潔方法返回目錄39移液器在不同使用情況下應(yīng)采取的清洗和保養(yǎng)方法液體性質(zhì)操作特性清洗和保養(yǎng)方法有機(jī)溶劑1．密度與水不同。因此必須調(diào)節(jié)移液器。2．由于蒸汽壓高和濕潤(rùn)行為的變化，應(yīng)該快速移液。3．移液結(jié)束后，拆開移液器，讓液體揮發(fā)。通常對(duì)于蒸氣壓高的液體，任其自然揮發(fā)的過(guò)程就足夠了?；蛘邔⑾虏拷胂緞┲?。用雙蒸水清洗，并用如上所述的干燥方法將其干燥放射性溶液為了避免污染，應(yīng)該使用帶有濾芯的吸嘴?；蛘呤褂谜蛑脫Q方法拆開移液器，將污染部分浸入復(fù)合溶液或?qū)Ｓ玫那鍧嵢芤?，用雙蒸水清洗，并用如上所述的干燥方法將其干燥核酸/蛋白質(zhì)溶液為了避免污染，應(yīng)該使用帶有濾芯的吸嘴。或者使用正向置換方法（1）蛋白質(zhì)：拆開移液器，用去污劑清洗，清洗和干燥方法如上所述。（2）核酸：在氨基乙酸／鹽酸緩沖液（pH2）中煮沸10分鐘（確保瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)不到DNA殘留），用雙蒸水清洗干凈，并用如上所述的干燥方法將其干燥。同時(shí)給活塞涂抹少量潤(rùn)滑油返回目錄40二、移液器常見故障的排除移液器的使用頻率較高，同時(shí)可能存在操作人員使用不當(dāng)，易導(dǎo)致移液器出現(xiàn)故障，因此，操作人員應(yīng)當(dāng)熟悉移液器常見故障，并具備排除故障的基本能力。返回目錄41移液器的常見故障及排除常見故障可能原因解決辦法吸液嘴內(nèi)有殘液吸液嘴不適配吸液嘴塑料濕潤(rùn)性不均一吸液嘴未裝好使用原配吸液嘴裝緊吸液嘴重裝新吸液嘴漏液或移液量太少吸液嘴不適配吸液嘴和連件間有異物活塞或O-形環(huán)上硅油不夠O-形環(huán)與活塞未扣好或O-形環(huán)損壞操作不當(dāng)需要校準(zhǔn)或液體密度與水差異大移液器被損壞使用原配吸液嘴