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文檔簡介
專題和蛋質技術專題整合第1頁,課件共17頁,創(chuàng)作于2023年2月第2頁,課件共17頁,創(chuàng)作于2023年2月提取DNA利用的是DNA、RNA、蛋白質和脂質的理化性質的差異。具體地說,DNA與其他物質在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同,再通過冷酒精進一步去除其他雜質。另外DNA對高溫和洗滌劑的耐受性較高,不易被破壞。鑒定時可采用二苯胺試劑沸水浴加熱呈藍色來判斷DNA的存在。DNA與蛋白質的提取
第3頁,課件共17頁,創(chuàng)作于2023年2月提取與分離蛋白質是根據蛋白質的分子形狀和大小,所帶電荷的性質和多少,溶解度、吸附性質以及對其他分子的親和力等理化性質,將不同種類的蛋白質分離開。凝膠色譜法可以將相對分子質量不同的蛋白質有效分離。DNA與蛋白質的提取技術比較電泳法可將帶有不同電荷的蛋白質分離。DNA血紅蛋白材料選取雞血細胞等DNA含量相對較高的生物組織哺乳動物的成熟紅細胞細胞破碎加蒸餾水、加洗滌劑和食鹽攪拌、研磨加蒸餾水和甲苯充分攪拌第4頁,課件共17頁,創(chuàng)作于2023年2月去除雜質①用不同濃度的NaCl溶液處理②用酒精溶液處理③用蛋白酶處理①透析處理②純化處理鑒定加入二苯胺,沸水浴SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質的相對分子質量第5頁,課件共17頁,創(chuàng)作于2023年2月PCR技術與凝膠色譜法的比較
PCR凝膠色譜法過程變性:90℃以上高溫解旋↓復性:50℃左右引物與單鏈結合↓延伸:72℃合成子鏈凝膠色譜柱的制作↓裝填:凝膠裝填均勻,無氣泡↓純化酶需要熱穩(wěn)定性高的TaqDNA聚合酶不需要酶溫度高溫常溫第6頁,課件共17頁,創(chuàng)作于2023年2月DNA粗提取與鑒定中不同試劑的用途及原理比較
第7頁,課件共17頁,創(chuàng)作于2023年2月試劑質量濃度用途原理NaCl溶液2mol/L溶解DNADNA在NaCl溶液中的溶解度隨溶液濃度的變化而改變,溶解度在質量濃度為2mol/L時最大、在質量濃度為0.14mol/L時最小0.14mol/L析出DNA2mol/L鑒定時的溶劑酒精95%(體積分數(shù))除去雜質以提純DNADNA不溶于酒精,但是細胞中的某些物質則可以溶于酒精二苯胺/鑒定劑DNA遇二苯胺(沸水浴)會變藍色檸檬酸鈉0.03g/mL抗凝劑除去血液中的鈣離子,防止血液凝固第8頁,課件共17頁,創(chuàng)作于2023年2月【典例1】
下表是關于DNA粗提取與鑒定實驗中所使用的材料、操作及其作用的表述,正確的是 ()。試劑操作作用A檸檬酸鈉與雞血混合溶解細胞中DNAB蒸餾水與雞血細胞混合保持細胞形狀C蒸餾水加入到溶解有DNA的NaCl溶液中析出DNA絲狀物D冷卻的酒精加入到過濾后含DNA的NaCl溶液中產生特定的顏色反應第9頁,課件共17頁,創(chuàng)作于2023年2月解析在DNA的粗提取與鑒定實驗中,檸檬酸鈉可以防止血液凝固;雞血中加入蒸餾水可以使細胞膜和核膜破裂;DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同,在質量濃度為0.14mol/LNaCl溶液中溶解度最低,有利于DNA析出;DNA不溶于酒精,可以獲得較純的DNA;DNA遇二苯胺(水浴加熱)產生藍色反應。答案C第10頁,課件共17頁,創(chuàng)作于2023年2月(1)為避免外源DNA等因素的污染,PCR實驗中使用的微量離心管、槍頭、緩沖液以及蒸餾水等在使用前必須進行高壓滅菌。(2)在微量離心管中添加反應成分時,每吸取一種試劑后,移液器上的槍頭必須更換。(3)所有的成分都加入后,蓋嚴離心管的蓋子,用手指輕輕彈擊管的側壁,混勻后離心處理,使反應液集中在離心管底部。PCR技術操作注意事項
第11頁,課件共17頁,創(chuàng)作于2023年2月(4)PCR實驗中應注意各種反應成分的用量,用量不當、漏加成分、PCR程序設置不當?shù)龋锌赡軐е翫NA片段擴增的失敗。(5)PCR擴增的是位于兩種引物之間的DNA片段,合理設計引物是PCR成功的關鍵。第12頁,課件共17頁,創(chuàng)作于2023年2月【典例2】PCR實驗中使用的微量離心管、緩沖溶液以及蒸餾水使用前必須進行的關鍵步驟是 ()。 A.反復洗滌 B.用酒精擦洗 C.高壓滅菌 D.在-20℃儲存 解析為了避免外源DNA等因素的污染,PCR實驗中使用的微量離心管、槍頭、緩沖液以及蒸餾水等在使用前必須進行高壓滅菌。PCR所用的緩沖液和酶應分裝成小份,并在-20℃儲存。使用前,將所需的試劑從冰箱內拿出,放在冰塊上緩慢融化。 答案C
第13頁,課件共17頁,創(chuàng)作于2023年2月【例1】(2011·廣東理綜,5)下列關于豬血紅蛋白提純的描述,不正確的是 ()。 A.洗滌紅細胞時,使用生理鹽水可防止紅細胞破裂 B.豬成熟紅細胞中缺少細胞器和細胞核,提純時雜蛋白較少 C.血紅蛋白的顏色可用于凝膠色譜法分離過程的監(jiān)測 D.在凝膠色譜法分離過程中,血紅蛋白比分子量較小的雜蛋白移動慢第14頁,課件共17頁,創(chuàng)作于2023年2月解析豬成熟紅細胞中缺少細胞器和細胞核,提純時雜蛋白較少,是提純血紅蛋白的理想材料。提純血紅蛋白分四步:紅細胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液、透析,其中洗滌紅細胞時,要用生理鹽水反復洗滌,既要將紅細胞洗滌干凈,又要不破壞紅細胞,然后再用蒸餾水和甲苯使紅細胞破裂,釋放出血紅蛋白。分離提純血紅蛋白時用凝膠色譜法,是根據相對分子質量的大小來分離蛋白質,相對分子質量大的蛋白質移動速度較快;血紅蛋白的顏色可用于觀察紅色區(qū)帶的移動情況,并據此判斷分離效果。故D不正確。答案D第15頁,課件共17頁,創(chuàng)作于2023年2月【例2】
(江蘇高考)下列敘述中錯誤的是 ()。 A.改變NaCl溶液的濃度只能使DNA溶解而不能使其析出 B.在沸水浴中,DNA遇二苯胺試劑會呈現(xiàn)藍色 C.用電泳法可分離帶電性質、分子大小和形狀不同的蛋白質 D.用透析法可去除蛋白質樣品中的小分子物質 解析提取DNA的原理,是DNA在不同濃度NaCl溶液中的溶解度不同。DNA在質量濃度為0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最小,因此如果將NaCl濃度調至質量濃度為0.14mol/L會使DNA溶解度變小而呈析出狀態(tài)。 答案A第16頁,課件共17頁,創(chuàng)作于2023年2月考情分
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