專題 和蛋質(zhì)技術(shù)專題整合

專題和蛋質(zhì)技術(shù)專題整合第1頁，課件共17頁，創(chuàng)作于2023年2月第2頁，課件共17頁，創(chuàng)作于2023年2月提取DNA利用的是DNA、RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的理化性質(zhì)的差異。具體地說，DNA與其他物質(zhì)在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，再通過冷酒精進一步去除其他雜質(zhì)。另外DNA對高溫和洗滌劑的耐受性較高，不易被破壞。鑒定時可采用二苯胺試劑沸水浴加熱呈藍色來判斷DNA的存在。DNA與蛋白質(zhì)的提取

第3頁，課件共17頁，創(chuàng)作于2023年2月提取與分離蛋白質(zhì)是根據(jù)蛋白質(zhì)的分子形狀和大小，所帶電荷的性質(zhì)和多少，溶解度、吸附性質(zhì)以及對其他分子的親和力等理化性質(zhì)，將不同種類的蛋白質(zhì)分離開。凝膠色譜法可以將相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)有效分離。DNA與蛋白質(zhì)的提取技術(shù)比較電泳法可將帶有不同電荷的蛋白質(zhì)分離。DNA血紅蛋白材料選取雞血細胞等DNA含量相對較高的生物組織哺乳動物的成熟紅細胞細胞破碎加蒸餾水、加洗滌劑和食鹽攪拌、研磨加蒸餾水和甲苯充分攪拌第4頁，課件共17頁，創(chuàng)作于2023年2月去除雜質(zhì)①用不同濃度的NaCl溶液處理②用酒精溶液處理③用蛋白酶處理①透析處理②純化處理鑒定加入二苯胺，沸水浴SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量第5頁，課件共17頁，創(chuàng)作于2023年2月PCR技術(shù)與凝膠色譜法的比較

PCR凝膠色譜法過程變性：90℃以上高溫解旋↓復性：50℃左右引物與單鏈結(jié)合↓延伸：72℃合成子鏈凝膠色譜柱的制作↓裝填：凝膠裝填均勻，無氣泡↓純化酶需要熱穩(wěn)定性高的TaqDNA聚合酶不需要酶溫度高溫常溫第6頁，課件共17頁，創(chuàng)作于2023年2月DNA粗提取與鑒定中不同試劑的用途及原理比較

第7頁，課件共17頁，創(chuàng)作于2023年2月試劑質(zhì)量濃度用途原理NaCl溶液2mol/L溶解DNADNA在NaCl溶液中的溶解度隨溶液濃度的變化而改變，溶解度在質(zhì)量濃度為2mol/L時最大、在質(zhì)量濃度為0.14mol/L時最小0.14mol/L析出DNA2mol/L鑒定時的溶劑酒精95%(體積分數(shù))除去雜質(zhì)以提純DNADNA不溶于酒精，但是細胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精二苯胺/鑒定劑DNA遇二苯胺(沸水浴)會變藍色檸檬酸鈉0.03g/mL抗凝劑除去血液中的鈣離子，防止血液凝固第8頁，課件共17頁，創(chuàng)作于2023年2月【典例1】

下表是關(guān)于DNA粗提取與鑒定實驗中所使用的材料、操作及其作用的表述，正確的是 ()。試劑操作作用A檸檬酸鈉與雞血混合溶解細胞中DNAB蒸餾水與雞血細胞混合保持細胞形狀C蒸餾水加入到溶解有DNA的NaCl溶液中析出DNA絲狀物D冷卻的酒精加入到過濾后含DNA的NaCl溶液中產(chǎn)生特定的顏色反應第9頁，課件共17頁，創(chuàng)作于2023年2月解析在DNA的粗提取與鑒定實驗中，檸檬酸鈉可以防止血液凝固；雞血中加入蒸餾水可以使細胞膜和核膜破裂；DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，在質(zhì)量濃度為0.14mol/LNaCl溶液中溶解度最低，有利于DNA析出；DNA不溶于酒精，可以獲得較純的DNA；DNA遇二苯胺(水浴加熱)產(chǎn)生藍色反應。答案C第10頁，課件共17頁，創(chuàng)作于2023年2月(1)為避免外源DNA等因素的污染，PCR實驗中使用的微量離心管、槍頭、緩沖液以及蒸餾水等在使用前必須進行高壓滅菌。(2)在微量離心管中添加反應成分時，每吸取一種試劑后，移液器上的槍頭必須更換。(3)所有的成分都加入后，蓋嚴離心管的蓋子，用手指輕輕彈擊管的側(cè)壁，混勻后離心處理，使反應液集中在離心管底部。PCR技術(shù)操作注意事項

第11頁，課件共17頁，創(chuàng)作于2023年2月(4)PCR實驗中應注意各種反應成分的用量，用量不當、漏加成分、PCR程序設(shè)置不當?shù)?，均有可能導致DNA片段擴增的失敗。(5)PCR擴增的是位于兩種引物之間的DNA片段，合理設(shè)計引物是PCR成功的關(guān)鍵。第12頁，課件共17頁，創(chuàng)作于2023年2月【典例2】PCR實驗中使用的微量離心管、緩沖溶液以及蒸餾水使用前必須進行的關(guān)鍵步驟是 ()。 A．反復洗滌 B．用酒精擦洗 C．高壓滅菌 D．在－20℃儲存 解析為了避免外源DNA等因素的污染，PCR實驗中使用的微量離心管、槍頭、緩沖液以及蒸餾水等在使用前必須進行高壓滅菌。PCR所用的緩沖液和酶應分裝成小份，并在－20℃儲存。使用前，將所需的試劑從冰箱內(nèi)拿出，放在冰塊上緩慢融化。 答案C

第13頁，課件共17頁，創(chuàng)作于2023年2月【例1】(2011·廣東理綜，5)下列關(guān)于豬血紅蛋白提純的描述，不正確的是 ()。 A．洗滌紅細胞時，使用生理鹽水可防止紅細胞破裂 B．豬成熟紅細胞中缺少細胞器和細胞核，提純時雜蛋白較少 C．血紅蛋白的顏色可用于凝膠色譜法分離過程的監(jiān)測 D．在凝膠色譜法分離過程中，血紅蛋白比分子量較小的雜蛋白移動慢第14頁，課件共17頁，創(chuàng)作于2023年2月解析豬成熟紅細胞中缺少細胞器和細胞核，提純時雜蛋白較少，是提純血紅蛋白的理想材料。提純血紅蛋白分四步：紅細胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液、透析，其中洗滌紅細胞時，要用生理鹽水反復洗滌，既要將紅細胞洗滌干凈，又要不破壞紅細胞，然后再用蒸餾水和甲苯使紅細胞破裂，釋放出血紅蛋白。分離提純血紅蛋白時用凝膠色譜法，是根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小來分離蛋白質(zhì)，相對分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)移動速度較快；血紅蛋白的顏色可用于觀察紅色區(qū)帶的移動情況，并據(jù)此判斷分離效果。故D不正確。答案D第15頁，課件共17頁，創(chuàng)作于2023年2月【例2】

(江蘇高考)下列敘述中錯誤的是 ()。 A．改變NaCl溶液的濃度只能使DNA溶解而不能使其析出 B．在沸水浴中，DNA遇二苯胺試劑會呈現(xiàn)藍色 C．用電泳法可分離帶電性質(zhì)、分子大小和形狀不同的蛋白質(zhì) D．用透析法可去除蛋白質(zhì)樣品中的小分子物質(zhì) 解析提取DNA的原理，是DNA在不同濃度NaCl溶液中的溶解度不同。DNA在質(zhì)量濃度為0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最小，因此如果將NaCl濃度調(diào)至質(zhì)量濃度為0.14mol/L會使DNA溶解度變小而呈析出狀態(tài)。 答案A第16頁，課件共17頁，創(chuàng)作于2023年2月考情分