鄰二氮雜菲分光光度法測(cè)定鐵

鄰二氮雜菲分光光度法測(cè)定鐵1實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解分光光度法測(cè)定物質(zhì)含量的一般條件及其選定方法。2掌握鄰二氮雜菲分光光度法測(cè)定鐵的方法3了解722型分光光度計(jì)的構(gòu)造和使用方法2實(shí)驗(yàn)原理1光度法測(cè)定條件：分光光度法測(cè)定物質(zhì)含量時(shí)應(yīng)注意的條件主要是顯色反應(yīng)的條件和測(cè)量吸光度的條件。2鄰二氮雜菲-亞鐵配合物：鄰二氮雜菲是測(cè)定缺的一種很好的試劑在ph=2-9條件下，缺與鄰二氮雜菲生成極穩(wěn)定的橘紅色配合物，此配合物的lgK穩(wěn)=21.3，摩爾吸光系數(shù)為11000。在顯色前首先用鹽酸羥胺把三價(jià)鐵離子還原為二價(jià)鐵離子，其反應(yīng)式為2Fe3++2NH2OH.HCl=2Fe2++N2+2H2O+4H++2Cl-3儀器與試劑儀器：分光光度計(jì)，容量瓶，移液管，洗瓶。試劑：(1)100ug/mL鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液(2)20ug/mL的鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液4實(shí)驗(yàn)步驟1條件實(shí)驗(yàn)(1)吸收曲線的測(cè)繪 用吸量管移取20ug/mL鐵的標(biāo)準(zhǔn)溶液5.00mL于50mL容量瓶中，用吸量管依次加入5%的鹽酸羥胺溶液1mL，搖勻，加1mol/LNaAc溶液5mL和0.1%鄰二氮菲溶液3mL，以水稀釋至刻度，搖勻。在分光光度計(jì)上用lcm比色皿，以水為參比溶液，在570-430nm之間，每隔10nm測(cè)定一次吸光度，以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制吸收曲線，找出最大吸收波長(zhǎng)max(2)鄰二氮雜菲-亞鐵配合物的穩(wěn)定性在最大吸收波長(zhǎng)處每隔一定時(shí)間測(cè)定其吸光度然后以時(shí)間為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制曲線(3)顯色劑濃度實(shí)驗(yàn)取7只50mL容量瓶，并且對(duì)其編號(hào)用吸量管依次加入20ug/mL的鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液5mL與容量瓶中和5%鹽酸羥胺溶液1mL，搖勻，經(jīng)二分鐘后，加入1mol/LNaAc溶液5mL，然后分別加入0.1%的鄰二氮菲溶液0.3mL，0.6mL，1.0mL，2.0mL，3.0mL,4.0mL，以水稀釋至刻度，搖勻。在分光光度計(jì)上，用lcm比色皿，在適宜波長(zhǎng)下，以水為參比溶液，測(cè)定以上七個(gè)溶液的吸光度。以鄰二氮菲的體積(mL)為橫座標(biāo)，相應(yīng)的吸光度為縱座標(biāo)，繪制吸光度-顯色劑用量曲線，找出在測(cè)定中應(yīng)加人的顯色劑的體積(mL)。(7)鐵含量的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)繪：去50mL容量瓶6只，分別移取(務(wù)必準(zhǔn)確移取)20ug/mL鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液2.0mL，4.0mL，6.0mL，8.0mL，10.0mL于五只容量瓶中不加鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液醅空白液作參比，然后各加1MOL5%鹽酸羥胺溶液，搖勻經(jīng)二分鐘后，再各加5ML1MOL.L-1NaAc溶液及3ML0.1%鄰二氮雜菲溶液，用水稀釋至刻度搖勻在分光光度計(jì)上，一同1cm比色皿在最大吸收波長(zhǎng)510nm處測(cè)定各溶液吸光度，以鐵含量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。未知液中鐵含量的測(cè)定，吸取5ML未知液代替標(biāo)準(zhǔn)溶液，其他步驟均同上，測(cè)定吸光度，由未知液吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出5ML未知液中鐵含量然后以每毫升未知液中含鐵多少微克表示結(jié)果。五：(1)吸收曲線的測(cè)繪吸收曲線—系列—系列1波長(zhǎng)從吸收曲線可以看出鄰二氮雜菲-亞鐵配合物在波長(zhǎng)510nm處吸光度最大，因此測(cè)定鐵時(shí)宜用波長(zhǎng)為510nm。鄰二氮雜