miRNA功能篩選與分析

miRNA功能篩選與分析丁香園

盡管目前在各種物種中發(fā)現(xiàn)了成千上萬個(gè)miRNA，但已經(jīng)鑒定功能的miRNA卻少之又少。miRNA通常與靶基因mRNA3'UTR區(qū)發(fā)生相互作用，進(jìn)而關(guān)閉或抑制基因的表達(dá)，30%的基因表達(dá)受miRNA調(diào)控，影響到細(xì)胞增殖，細(xì)胞凋亡，細(xì)胞分化及相關(guān)信號(hào)通路等生命過程。

銳博生物擁有高度自動(dòng)化的高通量高內(nèi)涵篩選平臺(tái)，能夠?yàn)槟峁┲档眯刨嚨膍iRNA功能篩選服務(wù)。您只需要提供miRNA名稱及待研究的細(xì)胞系即可。

圖1

miRNA功能篩選方法

一、miRNA功能篩選方法

高內(nèi)涵篩選（HighContentScreening，HCS）是一種能夠進(jìn)行熒光顯微成像和定量圖像分析的自動(dòng)化篩選技術(shù)，能夠在細(xì)胞水平進(jìn)行系統(tǒng)性定量分析，利用各種熒光標(biāo)記物（如Hoechst、GFP、熒光抗體等）來檢測(cè)各類藥物對(duì)細(xì)胞作用的多維信息，分析特殊分子靶位和生物特征，是藥效結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)、藥物靶標(biāo)確認(rèn)、RNAi篩選、藥物先導(dǎo)物優(yōu)化和藥物毒性評(píng)價(jià)的技術(shù)平臺(tái)。

二、miRNA功能研究工具：

1）

miRNAmimic

micrONTMmiRNAmimic是運(yùn)用化學(xué)方法合成的miRNA模擬物，能模擬細(xì)胞中成熟miRNA的高水平表達(dá)，以增強(qiáng)內(nèi)源miRNA的調(diào)控作用，進(jìn)行功能獲得性（gain-of-function）研究。

2）

miRNAinhibitor

micrOFFTMmiRNAinhibitor是化學(xué)合成的，經(jīng)過特殊修飾的miRNA抑制劑，通過特異性地與成熟miRNA分子結(jié)合而抑制其作用，可以削弱細(xì)胞中miRNA導(dǎo)致的調(diào)控作用，從而進(jìn)行miRNA功能缺失性（loss-of-function）研究?？梢杂脕砗Y選miRNA靶位點(diǎn)，篩選調(diào)控某一基因表達(dá)的miRNA，篩選影響細(xì)胞生長、增殖等過程的miRNA。

3）

miRNAagomir

micrONTMmiRNAagomir是經(jīng)過特殊化學(xué)修飾的miRNA激動(dòng)劑，通過模擬內(nèi)源性miRNA進(jìn)入miRISC復(fù)合物來調(diào)節(jié)靶基因mRNA的表達(dá)而發(fā)揮作用。與普通的miRNAmimic相比，miRNAagomir在動(dòng)物體內(nèi)具有更高的穩(wěn)定性和miRNA活性，更易通過細(xì)胞膜，組織間隙而富集于靶細(xì)胞。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中可以用全身或局部注射等方法進(jìn)行給藥，作用效果持續(xù)時(shí)間可長達(dá)6周。

4）

miRNAantagomir

micrOFFTMmiRNAantagomir是經(jīng)過特殊化學(xué)修飾的miRNA拮抗劑，通過與體內(nèi)的成熟miRNA競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，阻止miRNA與其靶基因mRNA的互補(bǔ)配對(duì)，抑制miRNA發(fā)揮作用。

miRNAantagomir均為miRNA成熟鏈的反向互補(bǔ)序列，全鏈進(jìn)行甲基化修飾，在5'端和3'端分別有2個(gè)和4個(gè)堿基硫代修飾，并在3'端連接有高親和性膽固醇修飾。與普通抑制劑相比，micrOFFTMmiRNAantagomir在動(dòng)物體內(nèi)外具有更高的穩(wěn)定性和抑制效果，更易通過細(xì)胞膜、組織間隙而富集于靶細(xì)胞。miRNAantagomir在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中轉(zhuǎn)染效率更高，甚至不需要轉(zhuǎn)染試劑，從而避免了轉(zhuǎn)染試劑包裝過程的復(fù)雜步驟及其對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中可用全身或局部注射等方法進(jìn)行給藥，作用效果持續(xù)時(shí)間可長達(dá)6周。

三、miRNA功能分析方法1）miRNA過表達(dá)選擇依據(jù)2）miRNA抑制方法的選擇

3）基因表達(dá)譜芯片

miRNA通常與靶基因mRNA3'UTR序列發(fā)生相互作用，導(dǎo)致關(guān)閉或抑制靶基因的表達(dá)。由于miRNA作用方式的特殊性，其可能與多個(gè)基因發(fā)生調(diào)控作用，進(jìn)而影響到其他基因的表達(dá)變化。基因表達(dá)譜芯片可以大規(guī)模、高通量地分析各種生物過程變化中基因表達(dá)變化的全面信息。銳博生物采用先進(jìn)的原位合成技術(shù)可高質(zhì)量地合成數(shù)以萬計(jì)寡核酸探針，系統(tǒng)全面地分析基因表達(dá)譜變化，可以依據(jù)客戶的需求定制感興趣的任何基因組合表達(dá)譜芯片，亦可定制已知基因組任何物種（包括但不限于大猩猩、恒河猴、馬、牛、狗、豬