治療性抗體研發(fā)的進展和關(guān)鍵技術(shù)課件

治療性抗體研發(fā)的進展和關(guān)鍵技術(shù)整理課件1治療性抗體研發(fā)的進展和關(guān)鍵技術(shù)整理課件1主要內(nèi)容治療性抗體研發(fā)概況治療性抗體研發(fā)的主要進展治療性抗體研發(fā)中要注意的問題整理課件2主要內(nèi)容治療性抗體研發(fā)概況整理課件2整理課件3整理課件3整理課件4整理課件4用抗體藥物治療的疾病腫瘤自身免疫病感染性疾病抗移植排斥心血管疾病骨質(zhì)疏松罕見病眼黃斑變性炭疽整理課件5用抗體藥物治療的疾病腫瘤骨質(zhì)疏松整理課件5抗體結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系整理課件6抗體結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系整理課件6抗體藥物的作用機理直接效應(yīng)誘導(dǎo)凋亡抑制增殖阻斷生長因子或生長因子受體干擾血管生成間接效應(yīng)依賴補體的細胞毒（CDC）依賴抗體的細胞毒（ADCC)

作為毒素、放射性同位素和細胞毒藥物的載體形成抗獨特型抗體通過雙特異性抗體靶向效應(yīng)細胞整理課件7抗體藥物的作用機理直接效應(yīng)誘導(dǎo)凋亡整理課件7抗體藥物在臨床應(yīng)用中面臨的挑戰(zhàn)免疫原性殺傷靶細胞的活性弱成藥性問題新靶點整理課件8抗體藥物在臨床應(yīng)用中面臨的挑戰(zhàn)免疫原性整理課件8抗體藥物研發(fā)的主要進展降低抗體的免疫原性改變抗體的效應(yīng)功能提高抗體表達量引入先進的抗體表征和質(zhì)控方法改進抗體規(guī)?；a(chǎn)技術(shù)新靶點的發(fā)現(xiàn)整理課件9抗體藥物研發(fā)的主要進展降低抗體的免疫原性整理課件9CDR移植FR移植SDR移植表面氨基酸重塑Phagedisplay轉(zhuǎn)基因鼠單細胞PCR人工設(shè)計抗體人源化和人源抗體整理課件10CDR移植Phagedisplay抗體人源化和人源抗體整理人源抗體制備的主要技術(shù)EB病毒轉(zhuǎn)化人B細胞人-人雜交瘤技術(shù)抗體庫技術(shù)轉(zhuǎn)基因小鼠人工設(shè)計和合成人源抗體整理課件11人源抗體制備的主要技術(shù)EB病毒轉(zhuǎn)化人B細胞整理課件11抗體庫技術(shù)轉(zhuǎn)基因小鼠整理課件12抗體庫技術(shù)轉(zhuǎn)基因小鼠整理課件12人工設(shè)計和合成人源抗體Her2晶體結(jié)構(gòu)D4SDS非還原電泳155KDaHF人源表達抗體的純化和功能鑒定HF人源抗體基因合成、構(gòu)建、表達人源化抗體設(shè)計、虛擬篩選抗體專家分析系統(tǒng)抗原抗體復(fù)合物結(jié)構(gòu)信息分析HF人源抗體對Her2+

+細胞的ADCC殺傷效應(yīng)分析HFSKVO3–Her2+++MCF7-Her2+HerceptinSKVO3–Her2+++MCF7-Her2+HF人源抗體對Her2靶點的特異性識別整理課件13人工設(shè)計和合成人源抗體Her2晶體結(jié)構(gòu)D4SDS非1986199419971998200020012002200320042006200720082009201020112012鼠源

嵌合

人源化

人源FDA批準的抗體藥物OKT3ReoProRituxanZenapaxSimulectSynagisRemicadeHerceptinEnbrelMylotargCampathZevalinHumiraXolairBexxarRaptivaAvastinErbituxTysabriLucentisVectibixSolirisCimziaActemraStelaraSimponiIlarisArzerraNumaxProliaABThraxBenlystaYervoyPerjeta整理課件141986鼠源嵌合第二代抗體藥物抗TNFadalimuab(Humira，全人抗體）

certolizumab（Cimzia，PEG修飾的Fab）

golimumab（Simponi，全人抗體）抗CD20ofatumumab（Arzerra，全人抗體）抗RSVmotarizumab（親和力更高）抗EGFRpanitumumab（Vectibix，全人抗體）整理課件15第二代抗體藥物抗TNFadalimuab(Hum抗體效應(yīng)功能的改造定點突變改造Fc改變糖基化雙特異性或多特異性抗體整理課件16抗體效應(yīng)功能的改造定點突變改造Fc整理課件16減弱抗體的效應(yīng)功能Fc上進行定點突變

Teplizumab(Leu234Ala,Leu235Ala)去糖基化

Otelixizumab(去糖基化，Asn297Ala)選擇IgG4亞型或雜合亞型（IgG2/IgG4）Fc融合蛋白整理課件17減弱抗體的效應(yīng)功能Fc上進行定點突變整理課件17提高抗體的效應(yīng)功能雙特異性抗體改變抗體效應(yīng)功能偶聯(lián)細胞毒物質(zhì)抗體Fc突變改變抗體糖基化細胞內(nèi)抗體抗體融合蛋白整理課件18提高抗體的效應(yīng)功能雙特異性抗體改變抗體偶聯(lián)細胞毒物質(zhì)抗體Fc整理課件19整理課件191抗體Fc突變提高效應(yīng)功能突變Ser239Asp，Glu330Leu，ILe332Glu提高ADCC突變Gly236Ala，Ser239Asp，ILe332Glu提高ADCP和ADCC雜合IgG亞型提高CDC突變Met252Tyr，Ser254Thr，Thr256Glu增加抗體的半壽期整理課件201抗體Fc突變提高效應(yīng)功能突變Ser239Asp，Glu32改變抗體Fc的糖基化整理課件212改變抗體Fc的糖基化整理課件21各種糖基化變化對抗體功能的影響來自潘海報告整理課件22各種糖基化變化對抗體功能的影響來自潘海報告整理課件22第三代抗體藥物抗CD20obinutuzumab（糖基化改造，提高

ADCC）

AME-133v(Fc改造，提高ADCC)TRLI-05(Fc改造，提高ADCC)Pro13192(Fc改造，提高ADCC)抗RSV/FMEDI-557(Fc改造，增加半壽期)整理課件23第三代抗體藥物抗CD20obinutuzumab（糖3抗體上偶聯(lián)細胞毒物質(zhì)整理課件243抗體上偶聯(lián)細胞毒物質(zhì)整理課件24整理課件25整理課件25單抗:癌細胞表面過量表達的抗原且能內(nèi)吞。偶聯(lián)鏈:在血液中穩(wěn)定但可以在細胞內(nèi)釋放毒素。毒素藥物:需要極毒的可以抑制細胞生長的化合物賴氨酸偶聯(lián)輕重鏈間二硫鍵偶聯(lián)定點偶聯(lián)KADCYLA(T-DM1)Genentech/ImmunogenADCETRIS(aCD33-vcMMAE)SeattleGeneticsThio-MaborAmbrx’sunnaturalAAincoporation抗體-藥物偶聯(lián)技術(shù)整理課件26單抗:癌細胞表面過量表達的抗原且能內(nèi)吞。賴氨酸偶聯(lián)輕重鏈FDA批準的ADC藥物放射性同位素，Bexxar,Zevalin毒素小分子藥物，Mylotarg，T-DM1Adcetris整理課件27FDA批準的ADC藥物放射性同位素，Bexxar,Ze4雙特異性抗體整理課件284雙特異性抗體整理課件28歐洲上市的雙特異性抗體整理課件29歐洲上市的雙特異性抗體整理課件29在臨床試驗的雙特異性抗體抗體名稱靶抗原臨床試驗SAR156597IL4xIL13PhaseIAFM13CD30xCD16APhaseIFBT-A05,Bi20CD20xCD3PhaseIMT110EpCAMxCD3PhaseIMT111,MEDI565CEAxCD3PhaseIIMCgp100Gp100xCD3PhaseITF2CEAxIMP288haptenPhaseIMEHD-7945AEGFRxHER3;dualIgG1PhaseIMM-111HER2xHER3PhaseICVX-241Ang2xVEGF;dualIgG1PhaseIIOzoralizumabATN103TNFxalbuminPhaseII整理課件30在臨床試驗的雙特異性抗體抗體名稱靶抗原臨床試驗SAR15655

免疫細胞因子整理課件315免疫細胞因子整理課件31靶抗原選擇針對已確認過的靶臨床確認實驗確認尋找新的功能性靶抗原整理課件32靶抗原選擇針對已確認過的靶整理課件32自身免疫病的治療靶整理課件33自身免疫病的治療靶整理課件33上市抗腫瘤抗體藥物的靶抗原靶分子適應(yīng)癥CD20NHLCLLHER2乳腺癌CD52CLLEGFR結(jié)腸癌VEGF結(jié)腸癌肺癌CD33AMLCTLA-4黑色素瘤CD30

淋巴瘤

整理課件34上市抗腫瘤抗體藥物的靶抗原靶分子適整理課件35整理課件35整理課件36整理課件36發(fā)現(xiàn)藥物靶標的主要方法分子流行病學(xué)調(diào)查人類遺傳學(xué)研究人類功能基因組學(xué)蛋白組學(xué)生物信息學(xué)藥理學(xué)模式動物整理課件37發(fā)現(xiàn)藥物靶標的主要方法分子流行病學(xué)調(diào)查整理課件37候選基因可成藥的候選藥靶與疾病的相關(guān)性整理課件38候選基因可成藥的候選藥靶與疾病的相關(guān)性整理課件38治療性抗體研發(fā)中要注意的問題抗體分子結(jié)構(gòu)特點：四條肽鏈，重鏈糖基化，結(jié)構(gòu)上有較多二硫鍵L整理課件39治療性抗體研發(fā)中要注意的問題抗體分子結(jié)構(gòu)特點：四條肽鏈，重鏈ProteinexpressionSolubilitystability

抗體結(jié)構(gòu)與成藥性的關(guān)系整理課件40Proteinexpression抗體結(jié)構(gòu)與成藥性的關(guān)系MasterCellBankWorkingCellBankRawMaterialsSmall-scaleCellCultureLarge-scaleCellCultureProductRecoveryProductFiltrationFormulationPoolBulksSterileFilter,Fill,andPartialStopperVialsLyophilizeCapVialsLiquidProductsProductInspectionContainerIntegrityTestingLabeledFinalVialProductPackaging單抗體生產(chǎn)工藝和過程DrugSubstance李鋒DrugProduct整理課件41MasterCellBankWorkingCellB從細胞表達到病人臨床注射，單抗體藥物可能發(fā)生多種反應(yīng)變化細胞培養(yǎng)配伍制劑和儲藏分離純化臨床注射和新陳代謝酶糖基化化學(xué)糖基化還原反應(yīng)序列變異……還原反應(yīng)水解反應(yīng)聚合化……氧化反應(yīng)異構(gòu)化化學(xué)糖基化……脫氨基化巰基半胱胺酸化酶降解反應(yīng)……理化分析和質(zhì)量控制對于抗體制藥工業(yè)各個環(huán)節(jié)起著支持和指導(dǎo)的重要作用。如同眼睛對人的作用一樣，沒有好的分析手段和方法，抗體生產(chǎn)過程就可能走向歧途。引自張伯彥報告整理課件42從細胞表達到病人臨床注射，單抗體藥物可能發(fā)生多種反應(yīng)變化細胞可變區(qū)：選擇Gln為氨基末端，減少電荷變異突變CDR區(qū)上不穩(wěn)定的點突變某些氨基酸，避免抗體聚合去除可變區(qū)上的糖基化位點恒定區(qū)：鉸鏈區(qū)改造避免出現(xiàn)半個抗體和不規(guī)則二硫鍵或異型結(jié)構(gòu)提高與FcRn結(jié)合，增加血清半壽期影響抗體藥物穩(wěn)定性和效能的因素整理課件43可變區(qū)：影響抗體藥物穩(wěn)定性和效能的因素整理課件43單抗體藥物產(chǎn)品是各種變異體的混合物

電荷變異體byiCIEF

7.07.27.47.67.88.08.28.48.68.89.09.29.4LowerpIMarkerUpperpIMarkerMainPeak,54%

AcidicVariants,28%BasicVariants,18%

序列變異體byTrypticPeptideMap

Clone#

M83R

體積變異體

bySEC

二聚體

脫氨基化(3×2)Met氧化(2×2)糖基化（2×2)高甘露糖化,G0,G1,G1’,G2（5）唾液酸化（5）C-端Lys（2）2×6×4×4×5×5×2=9600(9600)2≈108

約1億個可能的變異體！美國FDA：StevenKozlowski基因特克：WassimNashabehOODDDGGKKpyro-EODGGDODpyro-E整理課件44單抗體藥物產(chǎn)品是各種變異體的混合物Amidation(C-term)*Di-,tri-sulfidebondformationN,O-GlycosylationC-mannosylation(W)Proteolyticprocessing(C-term)SequenceVariants

Oxidation(M,W,H,F,Y)S-CysteinylationDisulfidescramblingS-GlutathionylationThioetherformationReductionDeamidation(NG,NT,NS)Isomerization(DG,DS,DD)TransaminationGlycation(K)Hydrolysis(DP)1。影響抗體質(zhì)量的蛋白表達后修飾細胞內(nèi)細胞外都有發(fā)生；2。質(zhì)控的目標是降低或避免在生產(chǎn)過程中不希望看到的

PTM和序列變異發(fā)生的現(xiàn)象?？寺『Y選是質(zhì)量控制的關(guān)鍵步驟整理課件45Amidation(C-term)*Oxidation(mAbVariantsandCharacterizationMethodologiesSizeVariants(體積變異體）Terminologies:Aggregates,mainpeak,fragmentsAssays:HPSEC,CE-SDS,SDS,AUCChargeVariants（電荷變異體）Terminologies:Acidicpeak,mainpeak,andbasicpeakvariantsAssays:HPIEC,iCIEF,pH-IECSequenceVariants（序列變異體）:causedbyunintendedaminoacidsubstitutionsTerminologies:sequencepolymorphism;mutation;mis-incorporation;sequenceextension,insertion,deletion,andcrossover.Assays:MultipleproteolysispeptidemappingmethodswithLC-UV-MS/MSdataanalysisStructuralVariants（高級結(jié)構(gòu)變異體）Terminologies:highorderstructure(HOS);tertiarystructuralisomer.Assays:HDX-MS,

hydroxylradicaloxidationfoot-printing,otheremergingtechniques.46整理