細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)課件

細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

★流式細(xì)胞術(shù)

★WesternBlot

★蛋白質(zhì)芯片.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù).*1細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—流式細(xì)胞儀

流式細(xì)胞儀（FlowCytometer，F(xiàn)CM)

是將流體噴射技術(shù)、激光技術(shù)、空氣技術(shù)、γ射線能譜術(shù)及電子計(jì)算機(jī)等技術(shù)與顯微熒光光度計(jì)密切結(jié)合的一種非常先進(jìn)的檢測(cè)儀器。通過(guò)測(cè)量細(xì)胞及其他生物顆粒的散射光和標(biāo)記熒光強(qiáng)度，來(lái)快速分析顆粒的物理或化學(xué)性質(zhì)，并可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分類(lèi)收集，可以高速分析上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，并能同時(shí)從一個(gè)細(xì)胞中測(cè)得多個(gè)細(xì)胞特征參數(shù)，進(jìn)行定性或定量分析，具有速度快、精度高、準(zhǔn)確性好等特點(diǎn)。

流式細(xì)胞儀.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞2細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—流式細(xì)胞儀工作原理

流式細(xì)胞儀技術(shù)，主要是測(cè)量群體中單個(gè)細(xì)胞經(jīng)適當(dāng)染色后其成分所發(fā)出的散射光和熒光，經(jīng)染色的細(xì)胞在懸液中以單行流過(guò)高強(qiáng)度光源的焦點(diǎn)，當(dāng)每個(gè)細(xì)胞經(jīng)過(guò)焦點(diǎn)時(shí)，發(fā)出一束散射光/或熒光。它們經(jīng)過(guò)過(guò)濾及光鏡系統(tǒng)收集到達(dá)一個(gè)光電檢測(cè)器(光電倍增管或一個(gè)固態(tài)裝置)，光檢測(cè)器把散射光定量轉(zhuǎn)化成電信號(hào)，經(jīng)數(shù)字轉(zhuǎn)換器進(jìn)行數(shù)字化后而成整數(shù)，然后進(jìn)行電子存儲(chǔ)，以后數(shù)據(jù)可以調(diào)出顯示和進(jìn)行分析。如左圖所示。.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—流式細(xì)胞儀工作原理.*3細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞儀流動(dòng)室和液流系統(tǒng)

激光源和光學(xué)系統(tǒng)光電管和檢測(cè)系統(tǒng)

計(jì)算機(jī)和分析系統(tǒng)結(jié)構(gòu)組成：除以下四個(gè)主要部分外，還備有電源及壓縮氣體等附加裝置。

.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—流式細(xì)胞儀流式細(xì)流動(dòng)室和4細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—流式細(xì)胞儀流動(dòng)室和液流系統(tǒng)流動(dòng)室由樣品管、鞘液管和噴嘴等組成，常用光學(xué)玻璃、石英等透明、穩(wěn)定的材料制作。設(shè)計(jì)和制作均很精細(xì)，是液流系統(tǒng)的心臟。樣品管貯放樣品，單個(gè)細(xì)胞懸液在液流壓力作用下從樣品管射出；鞘液由鞘液管從四周流向噴孔，包圍在樣品外周后從噴嘴射出。為了保證液流是穩(wěn)液，一般限制液流速度υ<10m/s。由于鞘液的作用，被檢測(cè)細(xì)胞被限制在液流的軸線上。流動(dòng)室上裝有壓電晶體，受到振蕩信號(hào)可發(fā)生振動(dòng)。液流中心由單列勻速運(yùn)動(dòng)顆粒組成的液柱.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—流式細(xì)胞儀流動(dòng)室和液流系5.*.*6.*.*7細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—流式細(xì)胞儀光電倍增管（PMT）光電管和檢測(cè)系統(tǒng).*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—流式細(xì)胞儀光電倍增管（PMT）8細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—流式細(xì)胞儀光電管和檢測(cè)系統(tǒng)經(jīng)熒光染色的細(xì)胞受合適的光激發(fā)后所產(chǎn)生的熒光是通過(guò)光電轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)變成電信號(hào)而進(jìn)行測(cè)量的。光電倍增管（PMT）最為常用。PMT的響應(yīng)時(shí)間短，僅為ns數(shù)量級(jí)；光譜響應(yīng)特性好，在200～900nm的光譜區(qū)，光量子產(chǎn)額都比較高。光電倍增管的增益從10到10可連續(xù)調(diào)節(jié)，因此對(duì)弱光測(cè)量十分有利。光電管運(yùn)行時(shí)特別要注意穩(wěn)定性問(wèn)題，工作電壓要十分穩(wěn)定，工作電流及功率不能太大。一般功耗低于0.5W；最大陽(yáng)極電流在幾個(gè)毫安。此外要注意對(duì)光電管進(jìn)行暗適應(yīng)處理，并注意良好的磁屏蔽。在使用中還要注意安裝位置不同的PMT，因?yàn)楣庾V響應(yīng)特性不同，不宜互換。從PMT輸出的電信號(hào)仍然較弱，需要經(jīng)過(guò)放大后才能輸入分析儀器。流式細(xì)胞計(jì)中一般備有兩類(lèi)放大器。一類(lèi)是輸出信號(hào)輻度與輸入信號(hào)成線性關(guān)系，稱(chēng)為線性放大器。線性放大器適用于在較小范圍內(nèi)變化的信號(hào)以及代表生物學(xué)線性過(guò)程的信號(hào)，例DNA測(cè)量等。另一類(lèi)是對(duì)數(shù)放大器，輸出信號(hào)和輸入信號(hào)之間成常用對(duì)數(shù)關(guān)系。.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—流式細(xì)胞儀光電管和檢測(cè)系統(tǒng).*9細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—流式細(xì)胞儀計(jì)算機(jī)和分析系統(tǒng)經(jīng)放大后的電信號(hào)被送往計(jì)算機(jī)分析器。多道的道數(shù)是和電信號(hào)的脈沖高度相對(duì)應(yīng)的，也是和光信號(hào)的強(qiáng)弱相關(guān)的。對(duì)應(yīng)道數(shù)年縱坐標(biāo)通常代表發(fā)出該信號(hào)的細(xì)胞相對(duì)數(shù)目。多道分析器出來(lái)的信號(hào)再經(jīng)模-數(shù)轉(zhuǎn)換器輸往微機(jī)處理器編成數(shù)據(jù)文件，或存貯于計(jì)算機(jī)的硬盤(pán)和軟盤(pán)上，或存于儀器內(nèi)以備調(diào)用。計(jì)算機(jī)的存貯容量較大，可存貯同一細(xì)胞的6～8個(gè)參數(shù)。存貯于計(jì)算機(jī)內(nèi)的數(shù)據(jù)可以在實(shí)測(cè)后脫機(jī)重現(xiàn)，進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析，最后給出結(jié)果。細(xì)胞分選系統(tǒng).*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—流式細(xì)胞儀計(jì)算機(jī)和分析系統(tǒng)細(xì)胞10FluorescenceActivatedCellSorting488

nm

laser+-ChargedPlatesSinglecellssortedintotesttubesFALSSensorFluorescencedetector流式細(xì)胞計(jì)的分選功能是由細(xì)胞分選器來(lái)完成的?？偟倪^(guò)程是：由噴嘴射出的液柱被分割成一連串的小水滴，根據(jù)選定的某個(gè)參數(shù)由邏輯電路判明是否將被分選，而后由充電電路對(duì)選定細(xì)胞液滴充電，帶電液滴攜帶細(xì)胞通過(guò)靜電場(chǎng)而發(fā)生偏轉(zhuǎn)，落入收集器中；其它液體被當(dāng)作廢液抽吸掉，某些類(lèi)型的儀器也有采用捕獲管來(lái)進(jìn)行分選的。.*FluorescenceActivatedCellSo11細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—流式細(xì)胞儀

數(shù)據(jù)處理原理：FCM的數(shù)據(jù)處理主要包括數(shù)據(jù)的顯示和分析，至于對(duì)儀器給出的結(jié)果如何解釋則隨所要解決的具體問(wèn)題而定。

數(shù)據(jù)顯示：FCM的數(shù)據(jù)顯示方式包括單參數(shù)直方圖、二維點(diǎn)圖、二維等高圖、假三維圖和列表模式等。X軸：代表熒光信號(hào)或散射光信號(hào)的強(qiáng)度，用“通道數(shù)”表示，可以與光強(qiáng)度之間線性關(guān)系或?qū)?shù)關(guān)系Y軸：代表該通道內(nèi)所出現(xiàn)具有相同光信號(hào)特征性細(xì)胞的頻率單參數(shù)直方圖（Histogram）.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—流式細(xì)胞儀數(shù)據(jù)處理原理：12二維等高圖3DPlot

二維點(diǎn)圖DotPlot.*二維等高圖3DPlot二維點(diǎn)圖DotPlot.*13細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—流式細(xì)胞儀優(yōu)點(diǎn)：1、具有操作簡(jiǎn)便，只要將染色的單個(gè)細(xì)胞推入儀器中，就會(huì)得出數(shù)據(jù)。2、具有較高的靈敏度及測(cè)定速度，而且每次可測(cè)出許多數(shù)據(jù)，一般情況下，每秒可測(cè)5000個(gè)細(xì)胞，能迅速分析和記數(shù)大量細(xì)胞，并能準(zhǔn)確統(tǒng)計(jì)群體中熒光標(biāo)記細(xì)胞的比例。3、應(yīng)用廣泛，即可用于測(cè)定細(xì)胞活力、繁殖周期和細(xì)胞定型分析，也可區(qū)別死亡細(xì)胞、分裂細(xì)胞和靜止細(xì)胞群，既可測(cè)定DNA和RNA、測(cè)凋亡峰，又可測(cè)蛋白含量，特別是胞漿蛋白。.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—流式細(xì)胞儀優(yōu)點(diǎn)：.*14細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—流式細(xì)胞儀應(yīng)用：目前流式細(xì)胞儀(FCM)已在各學(xué)科中獲得應(yīng)用。細(xì)胞生物學(xué)：定量分析細(xì)胞周期并分選不同細(xì)胞周期時(shí)相的細(xì)胞；分析生物大分子如DNA、RNA、抗原、癌基因表達(dá)產(chǎn)物等物質(zhì)與細(xì)胞增殖周期的關(guān)系，進(jìn)行染色體核型分析，并可純化X或Y染色體,等等。.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—流式細(xì)胞儀應(yīng)用：.*15細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—流式細(xì)胞儀

例如流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡—AnnexinV/PI雙染色法

AnnexinV/PI標(biāo)記染色：取500u1心肌緩沖液，輕輕混勻細(xì)胞后加5ulFITC一AmexinV和5ulPI試劑，置冰浴10min后，流式細(xì)胞儀(光源為488nm氨離子激光，預(yù)先用Flow-Check調(diào)整光路)計(jì)數(shù)104以上的細(xì)胞，用FITC/PI雙色分析程序測(cè)得心肌凋亡細(xì)胞(AnnexinV＋/PI—)的百分率。雙陰：活細(xì)胞AnnexinV-PE單陽(yáng)：早期凋亡細(xì)胞雙陽(yáng)：晚期凋亡細(xì)胞7-AADd單陽(yáng)：壞死細(xì)胞.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—流式細(xì)胞儀例16細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlotWesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測(cè)物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過(guò)PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類(lèi)型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。

原理.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlotWeste17細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlotWesternblot步驟示意圖步驟.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlotWeste18細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlot一、蛋白樣品的提取通過(guò)有機(jī)溶劑或水溶法制備總蛋白水溶液提取法針對(duì)水、稀鹽、稀酸或堿溶液中的蛋白質(zhì)。稀鹽和緩沖系統(tǒng)的水溶液對(duì)蛋白質(zhì)穩(wěn)定性好、溶解度大、是提取蛋白質(zhì)最常用的溶劑。有機(jī)溶劑提取法對(duì)于分子中非極性側(cè)鏈較多的蛋白質(zhì)可用有機(jī)溶劑提取，包括乙醇、丙酮和丁醇等。通過(guò)層析或電洗脫法制備目的蛋白.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlot一、蛋白樣19細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlot蛋白樣品的定量1.雙縮脲法：在需要快速，但不很準(zhǔn)確的測(cè)定中，常用此法。硫銨不干擾顯色，這對(duì)蛋白質(zhì)提純的早期階段是非常有利的。雙縮脲法的原理是Cu2+與蛋白質(zhì)的肽鍵，以及酪氨酸殘基絡(luò)合，形成紫藍(lán)色絡(luò)合物，此物在540nm波長(zhǎng)處有最大吸收。雙縮脲法常用于0.5g/L～10g/L含量的蛋白質(zhì)溶液測(cè)定。干擾物有硫醇，以及具有肽性質(zhì)緩沖液，可用沉淀法除去干擾物。2.Lowry法：第一步Cu2+與蛋白質(zhì)在堿性溶液中形成絡(luò)合物，然后這個(gè)絡(luò)合物還原磷鉬磷-磷鎢酸試劑（福林-酚試劑），得到深藍(lán)色物。此法比雙縮脲法靈敏得多，適合于測(cè)定20mg/L～400mg/L含量的蛋白質(zhì)溶液。其干擾物質(zhì)與雙縮脲法相同，而且受他們的影響更大，硫醇和許多其他物質(zhì)的存在會(huì)使結(jié)果嚴(yán)重偏差。3．電泳估算法:樣品倍比稀釋?zhuān)琒DS電泳，同時(shí)做定量marker對(duì)照，可以估算樣品大概濃度..*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlot蛋白樣品的20細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlot4.紫外吸收法：大多數(shù)蛋白質(zhì)在280nm波長(zhǎng)處有特征的最大吸收，這是由于蛋白質(zhì)中有酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸存在的緣故，利用這個(gè)特異性吸收，可以計(jì)算蛋白質(zhì)的含量。如果沒(méi)有干擾物質(zhì)的存在，在280nm處的吸收可用于測(cè)定0.1～0.5mg/ml含量的蛋白質(zhì)溶液。部分純化的蛋白質(zhì)常含有核酸，核酸在260nm波長(zhǎng)處有最大吸收。有核酸時(shí)，所測(cè)得的蛋白質(zhì)濃度必須作適當(dāng)校正。5.Bradford比色法:Bradford比色法比Lowry法測(cè)定蛋白濃度更簡(jiǎn)單迅速。用脫氧膽酸/三氯乙酸沉淀蛋白可排除甘油、去污劑、2-巰基乙醇、乙酸、硫酸銨、Tris和一些堿性緩沖系統(tǒng)的干擾。蛋白樣品的定量.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlot4.紫外吸21細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlot二、SDS-聚丙烯酸胺凝膠電泳（SDS－PAGE）

.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlot二、SDS22細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlot三、樣品的印記--轉(zhuǎn)膜半干轉(zhuǎn)移法將凝膠和固相基質(zhì)象三明治一樣夾在用緩沖液濕潤(rùn)濾紙間。－|紙|膠|膜|紙|＋槽式濕轉(zhuǎn)法將凝膠和固相基質(zhì)夾在濾紙中間，浸泡在轉(zhuǎn)移裝置的緩沖液中。

－|海綿|紙|膠|膜|紙|海綿|＋半干轉(zhuǎn)移法濕轉(zhuǎn)法.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlot三、樣品的23細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlot四、封閉將轉(zhuǎn)印膜浸泡到封閉液中，將膜上沒(méi)有結(jié)合蛋白質(zhì)的區(qū)域結(jié)合上蛋白質(zhì)，目的是使抗體與特異的蛋白質(zhì)結(jié)合。封閉液：5%脫脂奶粉或BSA（室溫孵育1h）WesternBlot膜封閉液Tween-20的作用：減少非特異性吸附，不影響抗體與抗原的結(jié)合。搖床上緩慢搖動(dòng)封閉，室溫2h或4℃過(guò)夜。.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlot四、封閉24細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlot五、一抗、二抗孵育與洗膜把NC膜放在密閉塑料袋或者培養(yǎng)皿中，根據(jù)膜面積以0.1mL/cm2的量加入一抗溶液，搖床上平緩搖動(dòng)，于室溫孵育1-2小時(shí)或4℃過(guò)夜?；厥找豢谷芤?，用TBST漂洗膜3次，每次10min。加入用封閉液配制的二抗，搖床上緩慢搖動(dòng)，于室溫孵育1-2小時(shí)或4℃過(guò)夜?；厥找豢谷芤?，用TBST漂洗膜3次，每次10min。最后用TBS漂洗膜2次，每次10min。.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlot五、一抗、25細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlot六、反應(yīng)顯色重組蛋白一般用AP顯色或是DAB顯色，裂解液一般用發(fā)光法

辣根過(guò)氧化物酶法（HRP）：HRP標(biāo)記二抗用DAB顯色，按順序依次將DAB三種劑各取3滴于5ml蒸餾水中，避光混勻，將膜加入顯色液中避光顯色5-15min終止反應(yīng)，對(duì)照Marker記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果，將NC膜晾干掃描保存。堿性磷酸酶法（AP）：AKP標(biāo)記二抗用AP顯色，在10mlAKP緩沖液中加入66μlNBT溶液和33μl

BCIP溶液混勻，室溫下將膜放入顯色（37℃可加速反應(yīng)）5-15min。對(duì)照Marker記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果，將NC膜晾干掃描保存。

3.化學(xué)發(fā)光顯色法(HRP)：將兩種顯色底物1：1等體積混合后將其覆蓋在膜表面使其均勻，用玻璃膠片把膜包起來(lái)，馬上在暗室中將X光片覆蓋在膜的上面（時(shí)間根據(jù)光的亮度來(lái)衡量），顯影、定影。（熒光在一段時(shí)間后會(huì)越來(lái)越弱要控制好時(shí)間）。.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlot六、反應(yīng)顯26細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlot七、結(jié)果分析目的蛋白的灰度值除以?xún)?nèi)參的灰度值以校正誤差，所得結(jié)果代表某樣品的目的蛋白相對(duì)含量。.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlot七、結(jié)果分27細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlot它結(jié)合了凝膠分辨力高和固相免疫測(cè)定的特異敏感等多種優(yōu)點(diǎn)，與免疫沉淀法比較，這種方法無(wú)需對(duì)靶蛋白進(jìn)行同位素標(biāo)記。幾乎總在變性條件下進(jìn)行，可以避免溶解、聚集以及靶蛋白與外來(lái)蛋白的共沉淀等諸多問(wèn)題。具有從混雜抗原中檢測(cè)出特定抗原，或從多克隆抗體中檢測(cè)出單克隆抗體的優(yōu)越性，還可以對(duì)轉(zhuǎn)移到固相膜上的蛋白質(zhì)進(jìn)行連續(xù)分析，具有蛋白質(zhì)反應(yīng)均一性，固相膜保存時(shí)間長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)。被廣泛地用于蛋白質(zhì)研究，基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)的研究。優(yōu)點(diǎn).*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlot它結(jié)合了凝28細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlot應(yīng)用目的蛋白的表達(dá)特性分析目的蛋白與其它蛋白的互作目的蛋白的組織定位目的蛋白的表達(dá)量分析.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—WesternBlot應(yīng)用目的29細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—蛋白質(zhì)芯片中文名稱(chēng)：蛋白質(zhì)芯片英文名稱(chēng)：proteinchip其他名稱(chēng)：蛋白質(zhì)微陣列(proteinmicroarray)蛋白質(zhì)芯片是指固定于支持介質(zhì)上的蛋白質(zhì)構(gòu)成的微陣列。又稱(chēng)蛋白質(zhì)微陣列(Proteinmiogrorray)，最早是在生物功能基因組學(xué)研究中繼基因芯片之后，作為基因芯片功能的補(bǔ)充發(fā)展起來(lái)的。是在一個(gè)基因芯片大小的載體上，按使用目的的不同，點(diǎn)布相同或不同種類(lèi)的蛋白質(zhì)，然后再用標(biāo)記了熒光染料的蛋白質(zhì)結(jié)合，掃描儀上讀出熒光強(qiáng)弱，計(jì)算機(jī)分析出樣本結(jié)果。簡(jiǎn)介.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—蛋白質(zhì)芯片中文名稱(chēng)：蛋白質(zhì)芯30細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—蛋白質(zhì)芯片Pro芯片原理蛋白芯片技術(shù)的研究對(duì)象是蛋白質(zhì)，其原理是對(duì)固相載體進(jìn)行特殊的化學(xué)處理，再將已知的蛋白分子產(chǎn)物固定其上(如酶、抗原、抗體、受體、配體、細(xì)胞因子等)，根據(jù)這些生物分子的特性，捕獲能與之特異性結(jié)合的待測(cè)蛋白(存在于血清、血漿、淋巴、間質(zhì)液、尿液、滲出液、細(xì)胞溶解液、分泌液等)，經(jīng)洗滌、純化，再進(jìn)行確認(rèn)和生化分析；它為獲得重要生命信息(如未知蛋白組分、序列。體內(nèi)表達(dá)水平生物學(xué)功能、與其他分子的相互調(diào)控關(guān)系、藥物篩選、藥物靶位的選擇等)提供有力的技術(shù)支持。.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—蛋白質(zhì)芯片Pro芯片原理.31細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—蛋白質(zhì)芯片蛋白質(zhì)微陣列

微孔板蛋白芯片

三維凝膠塊芯片分類(lèi).*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—蛋白質(zhì)芯片蛋白質(zhì)微陣列分32細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—蛋白質(zhì)芯片Pro芯片的具體制備方法1.固相載體及其處理載體（滴定板、濾膜、凝膠、載玻片）

2.蛋白質(zhì)的預(yù)處理選擇具有較高純度和完好生物活性的蛋白進(jìn)行溶解3.點(diǎn)制微陣列可使用點(diǎn)制基因微陣列的商品化點(diǎn)樣儀或噴墨法等4.固定微陣列上的蛋白樣點(diǎn)膜為載體：芯片放入濕盒，37°C1h載玻片為載體：化學(xué)修飾產(chǎn)生醛基固定蛋白5.微陣列的封閉主要封閉試劑：BSA（牛血清白蛋白）或Gly（甘氨酸）.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—蛋白質(zhì)芯片Pro芯片的具體33細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—蛋白質(zhì)芯片蛋白質(zhì)芯片的檢測(cè)法1.探針標(biāo)記檢測(cè)法（S）2.無(wú)探針標(biāo)記檢測(cè)法3.動(dòng)態(tài)分析檢測(cè)法（S）.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—蛋白質(zhì)芯片蛋白質(zhì)芯片的檢測(cè)法34細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—蛋白質(zhì)芯片

同位素標(biāo)記檢測(cè)熒光標(biāo)記檢測(cè)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)酶免疫標(biāo)記檢測(cè)膠體金標(biāo)記檢測(cè)1.探針標(biāo)記檢測(cè)法（S）.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—蛋白質(zhì)芯片同位素標(biāo)記檢測(cè)135細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—蛋白質(zhì)芯片2.無(wú)探針標(biāo)記檢測(cè)法表面增強(qiáng)激光解吸離子化技術(shù)(Surfaceenhancedlaserdesorption/ionization,SELDI)表面等離子體共振檢測(cè)技術(shù)

（surfaceplasmonresonance,SPR）原子力顯微鏡檢測(cè)技術(shù)（atomicforcemicroscope,AFM）.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—蛋白質(zhì)芯片2.無(wú)探針標(biāo)記檢36細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—蛋白質(zhì)芯片表面等離子共振生物傳感器（surfaceplasmonresonance，SPR）檢測(cè)法。SPR檢測(cè)法的原理：利用表面等離子共振現(xiàn)象監(jiān)測(cè)傳感片表面介質(zhì)的折射率變化，而這一變化僅和傳感片表面結(jié)合的生物大分子的量成正比，溶液中的分子不會(huì)干擾。SPR現(xiàn)在已經(jīng)成為一個(gè)比較成熟的多方面研究受體-配基相互作用動(dòng)力學(xué)的檢測(cè)工具。例如，Sapsford等發(fā)展了一個(gè)抗體芯片的生物傳感器去研究抗體作用的動(dòng)力學(xué)。3.動(dòng)態(tài)分析檢測(cè)法（S）.*細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

—蛋白質(zhì)芯片表面等離子共振生物37細(xì)胞