雙波長(zhǎng)法測(cè)定安鈉咖中組分含量

WordWord資料院系：醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系 班級(jí)：11檢驗(yàn)本科1班****雙波長(zhǎng)法測(cè)定安鈉咖中組分含量實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?、掌握紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的基本操作；2、掌握雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定二元混合物中待測(cè)組分含量的原理和方法；3、掌握在物質(zhì)中吸收曲線上尋找吸收點(diǎn)、測(cè)定波長(zhǎng)、參比波長(zhǎng)的方法；4、掌握標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制及應(yīng)用；5、了解雙波長(zhǎng)分光光度法在單光束分光光度計(jì)上的測(cè)定方式。實(shí)驗(yàn)原理每毫升安鈉咖注射液中含0.12g無(wú)水咖啡因和0.13g苯甲酸鈉，要求二組分的含量均應(yīng)為標(biāo)示量的93%~107%。在0.10mol/L鹽酸溶液中，苯甲酸鈉在230nm波長(zhǎng)處有一較強(qiáng)吸收峰，咖啡因在272nm波長(zhǎng)處有一較強(qiáng)吸收峰；二者吸收曲線重疊十分嚴(yán)重，直接采用吸光度進(jìn)行定量測(cè)定時(shí)，相互之間有嚴(yán)重干擾。根據(jù)光吸收定律，溶液吸光度應(yīng)為各個(gè)組分吸光度的加合。當(dāng)在230nm波長(zhǎng)處測(cè)定苯甲酸鈉（此時(shí)把咖啡因視為干擾組分）時(shí)，測(cè)定的吸光度為：TOC\o"1-5"\h\zA安鈉咖=A苯甲酸鈉十A咖啡因

230 230 230但是在咖啡因的吸收曲線可以發(fā)現(xiàn)，咖啡因在230nm和257nm兩波長(zhǎng)處得吸收相等（吸光度值相等，即等吸收點(diǎn)）：A咖啡因=A咖啡因

230 257因此，通過(guò)直接測(cè)定混合物溶液在230nm和257nm兩波長(zhǎng)處得吸光度值，再計(jì)算二吸光度的差值，可消除咖啡因?qū)Ρ郊姿徕c測(cè)定的干擾：AA=A安鈉咖-A安鈉咖=（A苯甲酸鈉十A咖啡因）-（A苯甲酸鈉十A咖啡因）230 257 230 230 257 257=A苯甲酸鈉-A苯甲酸鈉=（￡苯甲酸鈉b-￡苯甲酸鈉b）C苯甲酸鈉230 257 230 257=KC苯甲酸鈉可以看出，混合物溶液在230nm和257nm兩波長(zhǎng)處得吸光度差值僅與苯甲酸鈉濃度成正比，而與咖啡因濃度無(wú)關(guān)，從而實(shí)現(xiàn)苯甲酸鈉的定量分析。同理，當(dāng)在272nm波長(zhǎng)處測(cè)定咖啡因（視苯甲酸鈉為干擾組分）時(shí)，可選擇272nm和253nm兩個(gè)苯甲酸鈉的等吸收點(diǎn)波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定，混合物溶液在這兩個(gè)波長(zhǎng)處得吸光度差值僅與咖啡因濃度成正比，而與苯甲酸鈉濃度無(wú)關(guān)，可消除苯甲酸鈉對(duì)咖啡因測(cè)定的干擾，從而實(shí)現(xiàn)咖啡因的定量分析：AA=KC咖啡因?qū)嶒?yàn)儀器與試劑1.752Pro型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 2.標(biāo)準(zhǔn)咖啡因儲(chǔ)備溶液（0.2500mg/ml）3.標(biāo)準(zhǔn)甲酸鈉儲(chǔ)備溶液（0.2500mg/ml） 4.鹽酸溶液（0.10mol/L）

5.50ml容量瓶5.50ml容量瓶12個(gè)6.5ml移液管4只7.1cm石英比色皿2個(gè) 8.安鈉咖樣品溶液實(shí)驗(yàn)步驟.咖啡因標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制按照下表配制咖啡因標(biāo)準(zhǔn)系列溶液編 號(hào)咖1咖2咖3咖4咖5移取0.25mg/ml標(biāo)準(zhǔn)咖啡因儲(chǔ)備溶液體積1.00ml2.00ml3.00ml4.00ml5.00ml系列標(biāo)準(zhǔn)咖啡因溶液濃度5pg/ml10pg/ml15pg/ml20pg/ml25pg/ml說(shuō)明以上溶液均用移液管移取至50ml容量瓶中，用0.10mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度并搖勻。.苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制按照下表配制苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)系列溶液編 號(hào)苯1苯2苯3苯4苯5移取0.25mg/ml標(biāo)準(zhǔn)苯甲酸鈉儲(chǔ)備溶液體積1.00ml2.00ml3.00ml4.00ml5.00ml系列標(biāo)準(zhǔn)咖啡因溶液濃度5|jg/ml10|jg/ml15|jg/ml20|jg/ml25口g/ml說(shuō)明 以上溶液均用移液管移取至50ml容量瓶中，用0.10mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度并搖勻。.標(biāo)準(zhǔn)混合溶液和樣品溶液配制按照下表配制標(biāo)準(zhǔn)混合溶液和樣品溶液編號(hào)6（標(biāo)混）7（樣品溶液）移取0.2500mg/ml標(biāo)準(zhǔn)咖啡因儲(chǔ)備溶液2.00ml,0.2500mg/ml標(biāo)準(zhǔn)苯甲酸鈉儲(chǔ)備溶液2.00ml移取安鈉咖樣品溶液1.00ml說(shuō)明以上溶液均用移液管移取至50ml容量瓶中，用0.10mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度并搖勻。.咖啡因等吸收點(diǎn)波長(zhǎng)組合

在選定的波長(zhǎng)處，用北皿比色皿，以0.10mol/L鹽酸溶液作為參比溶液，按照下表測(cè)定咖3溶液在下列波長(zhǎng)處的吸光度值，并對(duì)測(cè)定數(shù)值進(jìn)行比較，選擇用于苯甲酸鈉定量測(cè)定的波長(zhǎng)組合。波長(zhǎng)230nm253nm254nm255nm256nm257nm258nm259nm260nm261nm吸光度0.4880.3900.4110.4310.4580.4870.5130.5370.5580.589測(cè)定波長(zhǎng)出吸光度值測(cè)定波長(zhǎng)為230nm，其吸光度：A=0.488選擇的參考波長(zhǎng)吸光度與230nm波長(zhǎng)相等點(diǎn)的波長(zhǎng)：入1=257nm.苯甲酸鈉等吸收點(diǎn)波長(zhǎng)組合在選定的波長(zhǎng)處，用10皿比色皿，以0.10mol/L鹽酸溶液作為參比溶液，按照下表測(cè)定苯3溶液在下列波長(zhǎng)處的吸光度值，并對(duì)測(cè)定數(shù)值進(jìn)行比較，選擇用于咖啡因定量測(cè)定的波長(zhǎng)組合。波長(zhǎng)272nm249nm250nm251nm252nm253nm254nm255nm256nm257nm吸光度0.1470.2140.1880.1750.1620.1510.1470.1380.1320.128測(cè)定波長(zhǎng)出吸光度值測(cè)定波長(zhǎng)為272nm，其吸光度：A=0.147選擇的參考波長(zhǎng)吸光度與272nm波長(zhǎng)相等點(diǎn)的波長(zhǎng)：入2=254nm.系列標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品溶液的測(cè)定在選定的組合波長(zhǎng)處，用10皿比色皿，以0.10mol/L鹽酸溶液作為參比溶液，按照下表分別測(cè)定系列標(biāo)準(zhǔn)溶液、標(biāo)準(zhǔn)混合溶液及樣品溶液的吸光度值，并計(jì)算對(duì)應(yīng)的吸光度差值。溶液編號(hào)測(cè)定波長(zhǎng)測(cè)定波長(zhǎng)230nm入1AA1272nm入2AA2咖10.2950.1800.115咖20.5430.2950.248咖3—0.7850.4020.383

咖41.0320.5170.515咖51.2680.6310.637苯10.4590.0810.378苯20.8260.1000.726苯31.1490.1231.026苯41.5090.1451.364 - -苯51.8650.1691.696 — 6（標(biāo)混）1.0580.3880.6700.6020.3420.2607（樣品）2.010.6721.3381.0780.5950.483實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制根據(jù)上述測(cè)定結(jié)果，在以吸光度差值作為縱坐標(biāo)，系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度作為橫坐標(biāo)制圖，分別繪制AA1-苯甲酸鈉系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度、AA2-咖啡因系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線?！鰽b苯甲酸鈉系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線苯甲酸雄I系列標(biāo)推溶微濃度（Mg/ml）△A2-咖啡因系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線.樣品溶液中苯甲酸鈉、咖啡因含量的計(jì)算根據(jù)7號(hào)樣品溶液在組合波長(zhǎng)的吸光度差值通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線函數(shù)式求出其中苯甲酸鈉、咖啡因的濃度值，用下式計(jì)算出苯甲酸鈉、咖啡因的含量：c=c 義50.00X取讀值根據(jù)AA1-苯甲酸鈉系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線方程式y(tǒng)=0.0655x+0.0558可得到樣品溶液中苯甲酸鈉溶液濃度c-AAi-0.0558.L338—0.0558.19.58叔mli0.0655 0.0655所以c=cx50.00=0.979mg/ml苯甲酸鈉i根據(jù)AA2-咖啡因系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線方程式y(tǒng)=0.0262x-0.0137可得樣品溶液中咖啡因溶液濃度c-AA2+0.0137.0.483+0.0137.18.96Mg/ml2 0.0262 0.0262所以c-cx50.00-0.948mg/ml咖啡因23.比較法計(jì)算苯甲酸鈉、咖啡因標(biāo)示量分別采用下列公式計(jì)算樣品溶液中苯甲酸鈉咖啡因標(biāo)示量，其中120、250、130為國(guó)家藥典規(guī)定的轉(zhuǎn)換系數(shù)：AA樣品250“1.338250,本甲酸鈉標(biāo)示量（％） 1x x50 x x50-192.02AA標(biāo)混130 0.6701301AA樣品250〈八0.483250,咖啡因標(biāo)示量（％）=2—x x50= xx50=193.51AA標(biāo)混120 0.2601202實(shí)驗(yàn)討論.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)注意：①測(cè)定系列標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液時(shí)，必須使用同一只比色皿；②比色皿放入分光光度計(jì)樣品室前，必須用吸水紙將外表面擦拭干凈；③比色皿在換裝不同濃度溶液時(shí)，必須用待測(cè)液潤(rùn)洗至少三次；.測(cè)定過(guò)程中首先確定等吸收點(diǎn)是因?yàn)楦鶕?jù)等吸收點(diǎn)可以消除一種組分對(duì)另一種組分的干擾；并且雙波長(zhǎng)分光光度法是通過(guò)測(cè)定一種組分的等吸收點(diǎn)，