不同光強下生長的垂盆草對ccl

不同光強下生長的垂盆草對ccl

環(huán)境影響藥物的化學成分組成和含量，并影響藥物的藥理作用。隨著藥用植物人工栽培工作的推進，大量研究探討了環(huán)境因子如光照、水分、養(yǎng)分等對藥用植物生長、產量及化學成分的影響。有研究者氧化應激是植物包括藥用植物在面對逆境的正常反應之一，同時氧化脅迫是許多疾病發(fā)生的病理基礎，因此氧化脅迫和人類疾病之間的關系受到廣泛關注。多種次生物質的產生和積累是藥用植物應對逆境的反應之一，研究表明可以通過對植物施加逆境脅迫以促進具有抗氧化作用的化學成分的積累目前光照強度對藥用植物的影響主要集中于生長、產量及化學成分的研究材料表面細胞培養(yǎng)—藥材與細胞研究材料來自南京農業(yè)大學中藥材研究所，經郭巧生教授鑒定為景天科景天屬植物垂盆草HepG2細胞購自江蘇凱基生物技術股份有限公司，來源于ATCC細胞庫。試劑MEM培養(yǎng)基(美國GIBCO,11095-080);FBS(美國ExCellBiology,FSS500);CCl儀器96孔、24孔細胞培養(yǎng)板(美國CorningIncorporated);CO方法細胞培養(yǎng)HepG2細胞用含10%胎牛血清FBS的MEM培養(yǎng)基于37℃,5%CO處理組基于前期研究，參考楊金鳳等mtt法對細胞的存活率進行檢測細胞經消化、計數，配制成濃度為5×10細胞存活率=細胞凋亡和周期檢測分別將對數生長期的HepG2細胞消化接種到6孔板中，次日待細胞貼壁后，根據組別設置加入相應的含藥培養(yǎng)基，同時設立陰性對照組，藥物作用72h后，消化收集細胞，按照檢測試劑盒說明檢測細胞凋亡情況與細胞周期。alt,ast,sod,mda,gsh及gsh-px活性檢測將處于對數生長期的HepG2細胞消化接種到細胞板中，根據分組設置分別加入對應的含藥培養(yǎng)基，藥物作用72h后，收集細胞，吸取上清，按照試劑盒說明分別測定ALT,AST,SOD,GSH-Px活性及MDA,GSH含量，評價HepG2細胞損傷程度。數據分析采用Excel2010和SPSS18.0進行統計與分析，不同處理相同指標進行Duncan0.05多重比較。結果與分析各組胞存活率比較不同光強處理的垂盆草水提液對HepG2細胞存活率影響差異顯著，見圖1。垂盆草組除G2組外，HepG2細胞存活率顯著高于模型組(存活率為38.30%)。G2組存活率為39.28%,與模型組無顯著差異，但存活率比模型組高2.56%,同時顯著低于水飛薊賓組(存活率為62.93%)。G4組HepG2細胞存活率次之，與G3組無顯著差異；G1組HepG2細胞存活率最高，為63.93%,與陽性對照水飛薊賓組無顯著差異。垂盆草細胞凋亡率模型構建不同處理對HepG2細胞凋亡的影響見圖2。空白組細胞凋亡率(UR+LR)為6.63%,模型組為53.83%。5個垂盆草組HepG2細胞凋亡率均低于模型組；其中G1組凋亡率(15.78%)最低，低于水飛薊賓組(19.61%)。關于cclCCl不同光強梯度垂盆草水提液對hepg2細胞ast活性的影響不同光強處理的垂盆草水提液對HepG2細胞ALT活性影響差異顯著，見圖4。與空白組相比，模型組ALT活性顯著升高，比空白組增加了31.05%。與模型組相比，5個垂盆草組ALT活性顯著降低，隨光照強度降低呈升高趨勢。在5個光強梯度垂盆草水提液處理中，G1組活性最低，為38.70U·L不同光強處理的垂盆草水提液對HepG2細胞AST活性具有顯著影響。與空白組相比，模型組AST活力急劇升高，比空白組提高1.68倍。與模型組相比，垂盆草水提液作用于HepG2細胞后，AST活性顯著降低，隨光照強度降低，垂盆草組AST活性呈先升后降再升趨勢。其中，G1組最低，比模型組降低53.32%,比水飛薊賓組增加18.25%,并與水飛薊賓組無顯著差異。G5組AST活性最高，為10.04U·L水飛薊賓對gh-px活性的影響不同光強處理的垂盆草水提液對MDA,SOD,GSH和GSH-Px水平的影響見表1。與空白組相比，模型組MDA含量急劇上升，比空白組增加7.13倍；與模型組相比，垂盆草水提液預處理HepG2細胞后，HepG2細胞MDA含量顯著降低。在5個光強處理中，G4組MDA含量最高，與模型組差異不顯著，但比模型組減少3.08%;G2組與G3,G5組差異不顯著，與G1組有顯著差異；G1組含量最低，比模型組減少59.69%,與水飛薊賓組無顯著差異。與空白組相比，模型組SOD活性、GSH含量以及GSH-Px活性顯著降低。與模型組相比，垂盆草給藥組SOD活性、GSH-Px活性及GSH含量顯著增強。在5個光強處理中，上述3個指標的最大值均出現在G1組，分別為0.31U·mg垂盆草抗氧化酶系統中hepg2細胞活性的關系將前期發(fā)表研究HepG2細胞存活率與鐵離子還原能力(FRAP法)呈顯著正相關，與HepG2細胞內的SOD活性和GSH含量以及GSH-Px活性呈顯著或極顯著正相關。HepG2細胞ALT活性與異鼠李素含量呈顯著負相關。HepG2細胞MDA含量與垂盆草水提物的DPPH自由基清除能力、鐵離子還原能力(FRAP法)存在顯著負相關關系。HepG2細胞SOD活性與AST活性呈顯著負相關，與鐵離子還原能力(FRAP法)、細胞內GSH含量以及GSH-Px活性呈顯著或極顯著正相關。此外，垂盆草總酚及總黃酮與HepG2細胞存活率沒有顯著相關性。槲皮素含量與HepG2細胞內的ALT,AST活性、MDA含量表現為負相關，但沒有達到顯著。對垂盆草保肝作用的影響肝損傷模型有多種，本實驗采用經典的CCl生長環(huán)境光強顯著影響垂盆草藥材的保肝活性。G1處理的HepG2細胞存活率最高，與陽性對照水飛薊賓組存活率相當，細胞凋亡率及ALT,AST活性最低。說明光強是影響垂盆草發(fā)揮保肝效果的重要環(huán)境因子，G1組處理保肝藥效最好。史紅專等潘金火等綜上所述，生長環(huán)境中不同光強條件顯著影響垂盆草藥材的保肝功效。其中在100%全光強條件下生長的垂盆草擁有最佳的保肝作用，其水提物保肝功效與水飛薊賓相當。適度遮光(60%全光照)也具有較強保肝作用。從保肝功效角度考慮，垂盆草在全光照下種植為宜。