藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液的研制

藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液的研制

藍(lán)莓是藍(lán)莓屬的一種多年生灌木。藍(lán)莓果實(shí)中含有豐富的花青素、多糖、黃酮、尼克酸以及多種維生素、不飽和脂肪酸、超氧化物歧化酶、礦物質(zhì)等成分,具有抗氧化、降血脂、抗衰老、保護(hù)視力及減少心腦血管疾病1材料和方法1.1試劑與儀器藍(lán)莓:采于吉林省白山市靖宇縣;紅景天:購(gòu)于吉林市江城大藥房;纖維素酶:酶活性50000U/g,深圳恒生生物科技有限公司;20g~22g清潔級(jí)健康昆明種雄性小白鼠:購(gòu)于吉林大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心,生產(chǎn)和使用許可證號(hào):SCXK(吉)2013-0001;血尿素氮(BUN)測(cè)定試劑盒、血乳酸(BLA)測(cè)定試劑盒、肝糖原(LG)測(cè)定試劑盒、肌糖原(MG)測(cè)定試劑盒:南京建成生物工程研究所;其他試劑均為分析純。JY92-2D超聲波細(xì)胞粉碎機(jī):寧波新芝生物科技股份有限公司;HWC-3型微波提取設(shè)備:天水華圓制藥設(shè)備科技有限公司;HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋:江蘇省金壇市科技儀器有限公司;LG10-2.4A高速離心機(jī):北京醫(yī)用離心機(jī)廠;SHZ-Ⅲ循環(huán)水真空泵:上海亞榮生化儀器廠;722N可見(jiàn)分光光度計(jì):上海佑科儀器儀表有限公司;XSC型小鼠恒溫游泳池:淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司;DY89-II型電動(dòng)玻璃勻漿機(jī):寧波新芝生物科技股份有限公司;2695高效液相色譜儀:大連依利特有限公司。1.2方法1.2.1藍(lán)莓復(fù)合裝盒的制備1.2.1.1.流程藍(lán)莓濃縮液:藍(lán)莓→粉碎→酶解→滅酶→超聲波提取→離心→減壓濃縮→藍(lán)莓濃縮液1.2.1.微波提取藍(lán)莓多糖、紅景天苷,制備藍(lán)莓多糖口服液藍(lán)莓清洗后冷凍,加入6倍的蒸餾水打漿,加入0.5%的纖維素酶,在40℃條件下酶解100min,100℃滅酶,然后進(jìn)行超聲波提取(提取時(shí)間40min,提取溫度50℃,超聲功率80W),將提取液以3000r/min離心10min進(jìn)行分離,取上清液,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至藍(lán)莓多糖含量為1mg/mL,備用紅景天粉碎過(guò)50目篩,加入10倍量的蒸餾水浸泡90min,微波提取3次,每次90s,合并提取液,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至紅景天苷含量為1mg/mL,備用將藍(lán)莓濃縮液、紅景天濃縮液、白砂糖、β-環(huán)糊精、純凈水等進(jìn)行混合調(diào)配,過(guò)濾,除去雜質(zhì),將調(diào)配好的口服液灌裝在玻璃瓶?jī)?nèi),每瓶100mL,在80℃下殺菌30min。冷卻,成品。1.2.1.3、藍(lán)莓糖含量和紅景天含量的測(cè)定藍(lán)莓多糖含量的測(cè)定:采用硫酸———苯酚法紅景天苷含量的測(cè)定:采用高效液相色譜法1.2.2最佳制備經(jīng)驗(yàn)：紅景天復(fù)合口服液在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,選擇影響口服液感官評(píng)價(jià)結(jié)果較大的4個(gè)因素(藍(lán)莓濃縮液、紅景天濃縮液、白砂糖、β-環(huán)糊精),采用L1.2.3感官評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)組織食品專業(yè)30名同學(xué)對(duì)藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液進(jìn)行感官評(píng)價(jià),評(píng)價(jià)指標(biāo)包括:色澤、口感、滋味、組織狀態(tài)。采用模糊數(shù)學(xué)評(píng)價(jià)法,滿分100分,評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1。1.2.4抗疲勞試驗(yàn)1.2.4.對(duì)不同實(shí)驗(yàn)劑量小鼠的影響將適應(yīng)7d后的小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為對(duì)照組和低、中、高3個(gè)不同實(shí)驗(yàn)劑量組,每試驗(yàn)組各10只小鼠。分別將口服液濃縮10倍,20倍,40倍作為實(shí)驗(yàn)的低、中、高3個(gè)劑量組1.2.4.水溫+小鼠末次給樣30min后,將小鼠尾部負(fù)上小鼠自身重量5%的砝碼,放入恒溫游泳池中,水溫(25±0.5)℃,放入小鼠開(kāi)始計(jì)時(shí),至小鼠沉于水面下10s后不能浮出水面的時(shí)間作為力竭游泳時(shí)間1.2.4.小鼠血乳酸、血尿素氮的檢測(cè)將游泳力竭的小鼠即刻于眼眶采血,離心,取上清液,按照試劑盒提供的方法檢測(cè)血乳酸(BLA)和血尿素氮(BUN)含量。將采血后的小鼠立即取肝臟和股四頭肌,經(jīng)生理鹽水漂洗,濾紙吸干,勻漿,備用。按照試劑盒提供的方法檢測(cè)肝糖原(LG)和肌糖原(MG)含量1.3獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件分析,實(shí)驗(yàn)結(jié)果均用“ue0af±s”表示,將3個(gè)不同劑量實(shí)驗(yàn)組分別與對(duì)照組進(jìn)行獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn),P<0.05為差異具有顯著性意義,P<0.01為差異具有極顯著性意義;多組數(shù)據(jù)采用方差分析。2結(jié)果與分析2.1單因素試驗(yàn)結(jié)果。藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服2.1.1藍(lán)莓濃縮汁添加量的試驗(yàn)藍(lán)莓多糖具有良好的抗疲勞作用由表2可知,在藍(lán)莓濃縮汁添加量為35mL~40mL時(shí),口服液呈透明狀態(tài),而隨著藍(lán)莓濃縮汁添加量的增加,口服液酸度增加,口感和透明度均下降,所以選擇35、40、45mL作為正交試驗(yàn)的水平范圍。2.1.2紅景天濃縮汁的制備紅景天具有多種活性成分,其中紅景天苷具有顯著的抗疲勞作用紅景天中含有大量的鞣質(zhì),導(dǎo)致紅景天濃縮汁具有苦、澀味。由表3可知,當(dāng)紅景天濃縮汁添加量超過(guò)30mL時(shí),苦澀味道難以掩蓋,對(duì)口服液的口感影響較大。所以選擇20、25、30mL作為正交試驗(yàn)的水平范圍。2.1.3白砂糖添加量的確定藍(lán)莓濃縮汁口感偏酸,紅景天濃縮汁口感偏苦、澀,因此在藍(lán)莓濃縮汁、紅景天濃縮汁、β-環(huán)糊精添加量不變的情況下,每100mL口服液添加不同質(zhì)量的白砂糖,通過(guò)感官評(píng)價(jià),確定白砂糖的最佳添加量。結(jié)果見(jiàn)表4。由表4得出,在添加量為4g~6g之間甜味偏淡,藍(lán)莓濃縮汁偏酸,使得口服液整體口感偏酸,不潤(rùn)滑,評(píng)分偏低,在添加量為10g~12g時(shí)偏甜。所以選擇7、8、9g作為正交試驗(yàn)的水平范圍。2.1.4-環(huán)糊精添加量的確定在藍(lán)莓濃縮汁、紅景天濃縮汁、白砂糖添加量不變的情況下,每100mL口服液添加不同質(zhì)量的β一環(huán)糊精,通過(guò)感官評(píng)價(jià),確定β-環(huán)糊精最佳添加量。結(jié)果見(jiàn)表5。β-環(huán)糊精具有包埋作用,可以適當(dāng)降低苦、澀味。由表5得出,β-環(huán)糊精的添加量0.15g時(shí)口服液的苦澀味減弱,添加量達(dá)到0.20g時(shí),無(wú)明顯苦味和澀味,并且口服液具有藍(lán)莓和紅景天的香味。所以選擇0.15、0.20、0.25g作為正交試驗(yàn)的水平范圍。2.2正交試驗(yàn)中培育的藍(lán)莓紅景天復(fù)合制劑的結(jié)果在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,選擇藍(lán)莓濃縮汁、紅景天濃縮汁、白砂糖、β-環(huán)糊精為考察因素,進(jìn)行L由表6可知,最佳配方為A2.3對(duì)小鼠負(fù)壓游泳時(shí)間的影響疲勞最直接的表現(xiàn)就是運(yùn)動(dòng)耐力的下降,小鼠負(fù)重游泳試驗(yàn)是測(cè)定小鼠疲勞狀況和運(yùn)動(dòng)耐力的常用實(shí)驗(yàn)方法。復(fù)合口服液對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響見(jiàn)表7。由表7可知,與對(duì)照組相比,口服液低、中、高劑量組的小鼠負(fù)重游泳時(shí)間均有所延長(zhǎng),低劑量組和中劑量組具有顯著性(P<0.05),高劑量組具有極顯著性(P<0.01);小鼠負(fù)重游泳時(shí)間與對(duì)照組相比,分別延長(zhǎng)23.25%,49.33%和68.06%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液能延長(zhǎng)小鼠運(yùn)動(dòng)時(shí)間,提高小鼠運(yùn)動(dòng)耐力,具有緩解疲勞的作用。2.4血尿素氮與血乳酸含量的變化當(dāng)機(jī)體長(zhǎng)時(shí)間緊張運(yùn)動(dòng)會(huì)使體內(nèi)能源物質(zhì)肌糖原、肝糖原含量減少;蛋白質(zhì)的分解代謝加劇及乳酸含量增加。肝糖原和肌糖原是機(jī)體運(yùn)動(dòng)的主要能量來(lái)源,機(jī)體內(nèi)肝糖原和肌糖原含量的增多,可以提供更多的能量。無(wú)氧條件下,當(dāng)體內(nèi)糖原被分解產(chǎn)生大量乳酸,釋放出能量的同時(shí),也會(huì)加速蛋白質(zhì)與氨基酸的分解,使血中尿素氮含量增高。因此,血尿素氮和血乳酸的含量可以反映疲勞的程度。復(fù)合口服液對(duì)小鼠體內(nèi)生化指標(biāo)的影響見(jiàn)表8。由表8可知,與對(duì)照組相比,低、中、高劑量組小鼠中的LG含量均有所增加,且均具有顯著性差異(P<0.05);MG含量低劑量組與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05),中劑量組和高劑量組呈顯著性差異(P<0.05);BUN和BLA含量與對(duì)照組相比都有所下降,其中BUN的低劑量組無(wú)顯著性差異(P>0.05),中劑量組和高劑量組呈顯著性差異;BLA低劑量組、中劑量組和高劑量組與對(duì)照組相比均呈顯著性差異(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明,藍(lán)莓紅景天復(fù)合口服液可以提高小鼠體內(nèi)肝糖原和肌糖原的儲(chǔ)備能力,提高小鼠體內(nèi)有氧代謝能力,減少血乳酸的生成;蛋白質(zhì)的分解代謝作用也會(huì)減慢,降低小鼠運(yùn)動(dòng)后產(chǎn)