生物相似藥非臨床研究和評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則試行

生物相似藥非臨床研究和評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則試行

2015年2月28日，國家食品藥品監(jiān)督管理局（cfda）發(fā)布了《生物藥開發(fā)與評估技術(shù)指南（試行）》（以下簡稱《指南》）。1妥雜的免疫反應(yīng)抗CD20單克隆抗體是一類治療B細(xì)胞淋巴瘤的靶向藥物,原研藥為1997年羅氏制藥有限公司上市的利妥昔單抗(rituximab,商品名為美羅華利妥昔單抗是一種人鼠嵌合性單克隆抗體,能特異性地與跨膜抗原CD20結(jié)合。CD20抗原位于前B和成熟B淋巴細(xì)胞的表面,而造血干細(xì)胞、前B細(xì)胞、正常漿細(xì)胞或其他正常組織不表達(dá)CD20。95%以上的B細(xì)胞性非霍奇金淋巴瘤瘤細(xì)胞表達(dá)CD20。利妥昔單抗與B細(xì)胞上的CD20抗原結(jié)合后,啟動介導(dǎo)B細(xì)胞溶解的免疫反應(yīng)。可能機(jī)制包括:補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒作用(CDC),抗體依賴細(xì)胞的細(xì)胞毒作用(ADCC)。利妥昔單抗自1997年上市后銷量逐年增加,至2011年銷售額達(dá)30億美元,成為該年全美銷量第一的抗腫瘤藥。利妥昔單抗國內(nèi)批準(zhǔn)的適應(yīng)癥包括復(fù)發(fā)或耐藥的濾泡性中央型淋巴瘤的治療;先前未經(jīng)治療的CD20陽性III~IV期濾泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL);CD20陽性彌漫大B細(xì)胞性非霍奇金淋巴瘤(DLBCL)應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)CHOP化療聯(lián)合治療。為降低第1代抗CD20單克隆抗體藥物的人抗鼠抗體(HAMA)反應(yīng)和免疫原性,提高單抗與抗原的親和力,Genmab制藥公司與葛蘭素史克公司聯(lián)合開發(fā)了完全人源化Ⅰ型IgG1κ單抗Ofatumumab(奧法妥木單抗,Arzerra,HuMax-CD20)。之后,為了進(jìn)一步提高該類抗體的特異性和與抗原結(jié)合的親和力,通過糖基化等工程手段對抗體Fc段進(jìn)行改造修飾,研發(fā)了第3代抗CD20單抗,包括ocaratuzumab(AME-133v),PRO131921,obinutuzumab(GA101)等。目前,國內(nèi)多家企業(yè)申報(bào)CD20靶點(diǎn)的單抗藥物,研究主要以仿制第1代利妥昔單抗為主,也有人源化抗CD20單抗申報(bào)。2重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)在非臨床安全性試驗(yàn)的一般考慮方面,中國《指導(dǎo)原則》和WHO,FDA,EMA的相關(guān)指導(dǎo)原則在非臨床安全性試驗(yàn)的一般考慮方面總體策略是一致的對于PK/PD研究,《指導(dǎo)原則》要求應(yīng)選擇相關(guān)動物種屬開展單次給藥(多個(gè)劑量組)和重復(fù)給藥的藥代比對試驗(yàn)研究,后者可結(jié)合重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)進(jìn)行。FDA僅說明單次單劑量的PK/PD一致性結(jié)果即可為相似性的整體判斷增加權(quán)重。各指導(dǎo)原則都明確了重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)的重要意義。EMA指導(dǎo)原則認(rèn)為毒性試驗(yàn)應(yīng)至少做一個(gè)重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)且伴隨毒代動力學(xué),應(yīng)設(shè)計(jì)足夠的試驗(yàn)時(shí)間以觀察到毒性和免疫反應(yīng)的差異?！吨笇?dǎo)原則》對此要求大體相同,同時(shí)明確提出要進(jìn)行至少一項(xiàng)相關(guān)動物種屬的至少4周的研究。免疫原性方面,盡管動物免疫原性試驗(yàn)對人免疫原性的預(yù)測意義不大,WHO和FDA指導(dǎo)原則都認(rèn)為有必要進(jìn)行免疫原性的比對,因?yàn)槊庖叻磻?yīng)對一般檢查難以發(fā)現(xiàn)的質(zhì)量屬性(如結(jié)構(gòu)、雜質(zhì)等)方面的差異很敏感。EMA指導(dǎo)原則提出可在毒代試驗(yàn)中觀察免疫原性指標(biāo),如抗體滴度、抗體的組織交叉反應(yīng)、中和抗體。和國際要求一致,《指導(dǎo)原則》要求進(jìn)行抗體篩選、確證、定量和定性,并研究與劑量和時(shí)間的相關(guān)性。安全藥理學(xué)、生殖毒性、遺傳毒性試驗(yàn)方面,《指導(dǎo)原則》認(rèn)為應(yīng)在必要時(shí)進(jìn)行。FDA和EMA則明確提出,如質(zhì)量研究、動物有效性、安全性比對結(jié)果已經(jīng)證明了相似性,而重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)無特殊的安全風(fēng)險(xiǎn)提示,一般不需要進(jìn)行。局部給藥刺激性試驗(yàn)EMA要求至少在一個(gè)種屬上進(jìn)行,《指導(dǎo)原則》認(rèn)為可在重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)中觀察。3重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)生物類似藥的非臨床研究思路為:遵循逐步遞進(jìn)的策略,根據(jù)藥學(xué)方面的相似性程度考慮開展比對性非臨床研究。下面結(jié)合抗CD20單抗的研究討論生物類似藥的非臨床評價(jià)。3.1藥效學(xué)生物類似藥的研究主要為比較性研究,通過比較SBP和RBP的藥效活性,評價(jià)與原研產(chǎn)品的一致性。體外藥效指標(biāo)通常為臨床療效密切相關(guān)的生物活性檢測,如受體結(jié)合活性、細(xì)胞檢測等。由于體外試驗(yàn)可能比動物試驗(yàn)更具敏感和特異性,首先考慮進(jìn)行充分的體外試驗(yàn),提供多種比對的體外試驗(yàn)數(shù)據(jù)。根據(jù)適應(yīng)癥使用相關(guān)動物模型進(jìn)行體內(nèi)藥效試驗(yàn)。案例A:申請NHL適應(yīng)癥。在藥學(xué)比對基本一致的前提下,進(jìn)行了體外藥效試驗(yàn)進(jìn)行了與高表達(dá)CD20抗原分子的人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系Raji細(xì)胞的體外結(jié)合親和力試驗(yàn)、ADCC和CDC效應(yīng)的比對試驗(yàn),及組織交叉反應(yīng)比對試驗(yàn)。體內(nèi)藥效試驗(yàn)進(jìn)行了猴單次和多次給藥PK/PD試驗(yàn),比較對CD20陽性B淋巴細(xì)胞的清除作用,體內(nèi)外試驗(yàn)均與參照藥進(jìn)行比對,結(jié)果類似藥與參照藥作用相當(dāng)。案例B:在已申報(bào)NHL和慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)適應(yīng)癥的基礎(chǔ)上,申請?jiān)趪庥械珖鴥?nèi)尚未批準(zhǔn)的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的適應(yīng)癥。體外和體內(nèi)對腫瘤的藥效試驗(yàn)和案例A相似,但未進(jìn)行RA動物模型的體內(nèi)藥效比對。由于申請NHL適應(yīng)癥時(shí)提供的重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)未與參照藥比對,參照生物類似藥評價(jià),考慮CD20單抗在國內(nèi)無RA適應(yīng)癥,且RA與腫瘤治療的藥效學(xué)、安全性方面的評價(jià)不同,在體內(nèi)試驗(yàn)?zāi)Ｐ涂尚袝r(shí)建議RA考慮進(jìn)一步開展相應(yīng)體內(nèi)藥效學(xué)試驗(yàn)研究。由于申請腫瘤適應(yīng)癥時(shí)提供的重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)未完成與參照藥比對,考慮到RA人群與腫瘤人群的風(fēng)險(xiǎn)接受程度不同,建議在臨床前先進(jìn)行與參照藥比對的重復(fù)給藥毒性研究和伴隨的毒代、免疫原性研究。3.2藥動學(xué)內(nèi)容包括單次和重復(fù)給藥的藥動學(xué)比對試驗(yàn)研究,在預(yù)定的可接受范圍內(nèi)按等效性判斷,進(jìn)行定量的比較性研究。藥代試驗(yàn)可結(jié)合體內(nèi)藥效的PK/PD試驗(yàn)或重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)進(jìn)行。案例A:結(jié)合體內(nèi)藥效試驗(yàn)進(jìn)行了單次和多次給藥的PK/PD研究,與單劑量RBP利妥昔單抗定量比較了藥動學(xué)特性;多次給藥PK試驗(yàn),考察了類似藥多次給藥的藥代特性;伴隨重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)的毒代試驗(yàn),與利妥昔單抗定量比較多次給藥的毒代動力學(xué)特性。單次給藥PK和毒代的比對均提示了兩者藥動學(xué)特征的一致性。案例C:僅進(jìn)行了單次給藥PK的比對,未進(jìn)行伴隨重復(fù)給藥的毒代動力學(xué)試驗(yàn),藥動學(xué)一致性證據(jù)不充分,因此建議進(jìn)行重復(fù)給藥的比對試驗(yàn)。案例D:進(jìn)行了單次和多次給藥的PK研究,但未進(jìn)行與RBP的比對;重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)中未伴隨毒代比對研究。建議補(bǔ)充與RBP比較的藥動學(xué)和毒代動力學(xué)研究。3.3安全性試驗(yàn)毒性試驗(yàn)選擇相關(guān)動物種屬,給藥劑量和方案應(yīng)能提示臨床安全性。《指導(dǎo)原則》指出,比對試驗(yàn)研究使用的動物種屬、模型、給藥途徑及劑量應(yīng)與RBP一致。關(guān)注與臨床療效有關(guān)的藥效作用,并開展毒代動力學(xué)研究,局部安全性試驗(yàn)可結(jié)合進(jìn)行。對于抗CD20類藥物,非人靈長類是唯一相關(guān)動物種屬。試驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)該關(guān)注重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)給藥時(shí)間應(yīng)足夠反應(yīng)SBP和RBP在毒性和抗體反應(yīng)之間的差異,設(shè)置足夠長的恢復(fù)期。劑量應(yīng)盡可能選擇RBP暴露毒性的劑量水平。案例C:進(jìn)行了連續(xù)給藥12周,恢復(fù)期8周的重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)。在恢復(fù)期結(jié)束時(shí)淋巴組織B細(xì)胞不能完全恢復(fù)至給藥前基數(shù)值。由于該類藥理效應(yīng)的恢復(fù)需要較長時(shí)間,恢復(fù)期設(shè)置較短,未觀察到B細(xì)胞何時(shí)恢復(fù)。案例D:猴重復(fù)給藥試驗(yàn)的高劑量設(shè)計(jì)僅相當(dāng)于1倍人臨床擬用劑量,結(jié)果4~8周動物體內(nèi)即出現(xiàn)抗藥抗體,影響體內(nèi)藥物暴露,以至候選藥物毒性暴露不充分。應(yīng)提高劑量或調(diào)整給藥方式并與RBP比較重新進(jìn)行重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)。3.4免疫原性對藥物免疫原性相關(guān)的安全性擔(dān)憂主要有過敏性和免疫原性,因其可能改變藥物的體內(nèi)生物學(xué)性質(zhì)(藥動、藥效和/或毒性)案例A:伴隨重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)進(jìn)行了免疫毒性和免疫原性的比對,檢測了IgG抗體水平、淋巴細(xì)胞數(shù)目等藥效相關(guān)免疫指標(biāo),以及抗體產(chǎn)生時(shí)間、抗體滴度、中和抗體等指標(biāo),結(jié)果顯示了SBP和RBP的一致性。案例C:免疫原性試驗(yàn)中未進(jìn)行SBP和RBP的比對。SBP未檢測到抗藥抗體,未出現(xiàn)淋巴組織B細(xì)胞減少。而參考RBP的原研資料,動物出現(xiàn)了抗藥抗體。由于該試驗(yàn)未設(shè)置與參照藥的對照,無法判斷免疫原性的差異。3.5案例的審評情況上文中提到的審評案例由于總體的研發(fā)思路和試驗(yàn)內(nèi)容不同,最終導(dǎo)致對非臨床相似性評價(jià)結(jié)果的差別。案例A:在SBP和RBP藥學(xué)質(zhì)量比對一致的基礎(chǔ)上,進(jìn)行了比對的體外藥效和免疫組織交叉反應(yīng)試驗(yàn)、比對的藥動學(xué)試驗(yàn),提示了體外藥效和藥代特性的一致性。在此基礎(chǔ)上,又提供了比對的體內(nèi)藥效、重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)及免疫原性試驗(yàn),證據(jù)整體性支持兩藥的相似性。案例C:藥學(xué)質(zhì)量比對結(jié)果顯示SBP和RBP可變區(qū)氨基酸序列不同,申請人進(jìn)行了比對的體外(包括體外組織交叉反應(yīng)試驗(yàn))、體內(nèi)藥效試驗(yàn),顯示生物活性基本一致。藥代方面僅進(jìn)行了單次給藥的比對試驗(yàn)。未進(jìn)行比對的重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)和免疫原性試驗(yàn),相似性依據(jù)不足,建議進(jìn)一步提供與RBP比對的重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)、免疫原性以及多次給藥的藥動學(xué)試驗(yàn),或慎重考慮是否按照生物類似藥的思路繼續(xù)研發(fā)。案例D:藥學(xué)質(zhì)量研究未提供足夠的一致性證據(jù),體外藥效比對結(jié)果顯示一致性,但未進(jìn)行組織交叉反應(yīng)比對,體內(nèi)藥效未進(jìn)行申報(bào)適應(yīng)癥的動物模型比對研究。未進(jìn)行比對的重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)、毒代及免疫原性研究、藥動學(xué)研究。該藥若按類似藥思路研發(fā),應(yīng)進(jìn)行比對的非臨床研究,以進(jìn)一步評價(jià)與參照藥的一致性,內(nèi)容包括必要的比對的藥效、藥代和一種相關(guān)動物種屬的重復(fù)給藥毒性試驗(yàn);若按照新藥思路研發(fā),應(yīng)有支持臨床試驗(yàn)周期的重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)和其他必要的毒性試驗(yàn)。4生物類似藥臨床使用的穩(wěn)定性分析生物類似藥的比對研究通常包括藥學(xué)研究質(zhì)量、有效性和安全性試驗(yàn)對生物類似藥的研發(fā),WHO的指導(dǎo)原則提出了CaseByCaseBasis。如生物藥結(jié)構(gòu)高度復(fù)雜,通過現(xiàn)有分析技術(shù)難以確證質(zhì)量相似性,或臨床治療指數(shù)窄的生物類似藥,其安全性和有效性試驗(yàn)需要按ICH